Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ðối tượng, vật liệu và ñịa ñiểm nghiên cứu
2.2.2. Nội dung 2: Nghiên cứu khả năng sinh trưởng, phát triển và sự biến dịc ủa chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro
chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro
a. Thí nghiệm 2: Nghiên cứu khả năng sinh trưởng, hệ số nhân chồi và sự biến dị
của chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro
• Phương pháp nghiên cứu: Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật hiện hành. ðiều kiện nuôi cấy: Ánh sáng: 2000 – 2500 lux, nhiệt ñộ: 24 ± 20C, thời gian chiếu sáng: 16h sáng - 8h tối. Môi trường nuôi cấy: MS + 30g/l ñường saccarose + 6g/l agar + 100mg/l innositol + 1ml/l kinetin. Môi trường ñược ñưa về pH = 5,7 – 5,8; sau ñó ñưa vào khử trùng ởñiều kiện 1200C, 1.4 atmosphere trong 20 phút.
• Các công thức trong thí nghiệm: tương tự thí nghiệm.
• Bố trí thí nghiệm: Theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức gồm 9 bình (6 mẫu/bình) chia làm 3 lần lặp lại.
• Phương pháp theo dõi: Tiến hành theo dõi qua 2 lần cấy chuyển. Sau mỗi lần cấy chuyển: theo dõi, ño ñếm các chỉ tiêu 2 lần (3 tuần, 6 tuần sau cấy chuyển).
Các chỉ tiêu theo dõi:
+ Tỉ lệ sống (%) = (∑số mẫu sống/∑số mẫu cấy) x 100%
+ Tỉ lệ mẫu bật chồi (%) = (∑số mẫu bật chồi/∑số mẫu theo dõi) x 100% + Hệ số nhân chồi = ∑số chồi tạo thành/∑số mẫu cấy ban ñầu
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 26 + Tỷ lệ mẫu biến dị (%) = (∑số mẫu biến dị/∑số mẫu theo dõi) x 100% + Chiều cao trung bình chồi (cm) = ∑chiều cao các cây/∑số cây theo dõi + Số lá trung bình/chồi (lá) = ∑số lá/∑số mẫu theo dõi
b. Thí nghiệm 3: Nghiên cứu khả năng tạo cây hoàn chỉnh của chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro
• Phương pháp nghiên cứu: Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật hiện hành. ðiều kiện nuôi cấy: Ánh sáng: 2000 – 2500 lux, nhiệt ñộ: 24 ± 20C, thời gian chiếu sáng: 16h sáng - 8h tối. Môi trường nuôi cấy: MS + 30g/l ñường saccarose + 6g/l agar + 100mg/l innositol + 0,5g/l αNAA + 0,5g/l than hoạt tính. Môi trường ñược ñưa về pH = 5,7 – 5,8, sau ñó ñưa vào khử trùng ở ñiều kiện 1200C; 1,4 atmosphere trong 20 phút.
• Bố trí thí nghiệm: theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức gồm 9 bình (6 mẫu/bình) chia làm 3 lần lặp lại.
• Các công thức trong thí nghiệm: tương tự thí nghiệm 1.
• Phương pháp theo dõi: theo dõi, ño ñếm các chỉ tiêu 3 tuần sau khi cấy chuyển các chồi cẩm chướng sau xử lý ñột biến colchicine in vitro vào môi trường ra rễ.
Các chỉ tiêu theo dõi:
+ Tỉ lệ mẫu ra rễ (%) = (∑số mẫu ra rễ/∑số mẫu theo dõi) x100% + ðặc ñiểm các biến dị
+ Tỷ lệ mẫu biến dị (%) = (∑số mẫu biến dị/∑số mẫu theo dõi) x 100% + Chiều cao trung bình chồi (cm) = (∑chiều cao các cây/∑số cây theo dõi) + Số lá trung bình/chồi (lá) = ∑số lá/∑số mẫu theo dõi
+ Chiều dài rễ trung bình (cm) = ∑chiều dài rễ/∑số mẫu theo dõi
2.2.3. Nội dung 3: Nghiên cứu khả năng sinh trưởng, phát triển và sự biến dị của các dòng cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro trong ñiều kiện vườn trồng