3 tuần sau cấy chuyển 6 tuần sau cấy chuyển Công thức
3.2.2. Nghiên cứu khả năng tạo cây hoàn chỉnh của chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro
số lá trung bình/chồi cao hơn ñối chứng. ðiều này là do các công thức này xuất hiện dạng biến dị cụm chồi làm tăng số lá trung bình trên chồi. Ngược lại, qua 2 lần theo dõi cho thấy việc xử lý colchicine in vitro ñã làm giảm khả năng sinh trưởng chiều cao của cây cẩm chướng gấm.
Việc xử lý colchicine in vitro với các nồng ñộ và thời gian xử lý khác nhau trên cây cẩm chướng gấm (Dianthus chienensis) ñã làm thay ñổi khả năng sinh trưởng, hệ số nhân chồi và sự xuất hiện các biến dị hình thái. Trong ñó, các công thức ñã qua xử lý colchicine in vitro thể hiện hệ số nhân chồi, tỷ lệ biến dị hình thái cao hơn so với ñối chứng và các công thức lắc mẫu trong dung dịch MS. Trong khi, việc xử lý colchicine in vitro lại làm giảm chiều cao trung bình của chồi cẩm chướng gấm. Sự khác biệt này thể hiện rõ rệt hơn ở các công thức xử lý colcicine với nồng ñộ cao (0,15%; 0,20%) và thời gian xử lý kéo dài (36h, 48h).
3.2.2. Nghiên cứu khả năng tạo cây hoàn chỉnh của chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro colchicine in vitro
Sau khi cấy chuyển vào môi trường nhân nhanh, các chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitroñược cấy chuyển vào môi trường kích thích ra rễ, sau 3 tuần, tiến hành ño ñếm các chỉ tiêu theo dõi. Kết quả cho bởi bảng 3.3 dưới ñây:
Kết quả cho thấy, tỷ lệ mẫu ra rễ ở các công thức không có sự khác biệt lớn so với ñối chứng, tương ñối cao và ñồng ñều (hầu hết ñều trên 90%), các công thức có tỷ lệ mẫu ra rễ trên 95% bao gồm: 0% - 24h, 0% - 36h và 0,05% - 24h.
ðối với tỷ lệ mẫu xuất hiện biến dị hình thái, tương tự thí nghiệm 1 và thí nghiệm 2, kết quả cho thấy, việc xử lý colchicine in vitroñã làm tăng tỷ lệ xuất hiện biến dị hình thái trên cây cẩm chướng gấm. Trong ñó, các công thức xử lý colchicine nồng ñộ cao, thời gian kéo dài (0,20% - 36h và 0,20% - 48h) có trên 20% số mẫu xuất hiện biến dị. Công thức ñối chứng có tỷ lệ biến dị hình thái nhất ñịnh, có thể là do sau nhiều lần cấy chuyển, nuôi cấy trong môi trường kích thích ra rễñã
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 36 làm tăng tỷ lệ biến dị hình thái thu ñược. Các kiểu biến dị hình thái thu nhận ñược bao gồm một số dạng: trên chồi xuất hiện 3 lá/ñốt, một mẫu cấy bật nhiều chồi, chồi xuất hiện lá dày, to bản và hiện tượng một số mẫu cây ra hoa sớm, hoa kích thước nhỏ, số lượng cánh hoa ít, hoa không cân ñối...
Bảng 3.3. Khả năng tạo cây hoàn chỉnh của các chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro 3 tuần sau cấy chuyển
Công thức Tỷ lệ mẫu ra rễ (%)
Tỷ lệ biến dị (%)
Hệ số
nhân chồi Số lá/chồi Chiều cao chồi (cm) Chiều dài rễ (cm) DC 90,70 3,70 1,40 17,00 7,73 2,43 0%-24h 98,10 3,70 1,47 16,90 6,50 2,80 0%-36h 96,30 7,40 1,73 21,03 8,73 2,73 0%-48h 92,60 3,70 1,40 17,73 7,47 2,63 0,05%-24h 96,30 3,70 1,40 13,90 5,83 3,53 0,05%-36h 92,60 5,60 1,47 17,10 7,03 3,10 0,05%-48h 94,40 5,60 1,23 12,30 6,00 4,43 0,1%-24h 94,40 7,40 1,50 13,53 5,23 2,90 0,1%-36h 88,90 11,10 1,33 13,77 6,20 3,07 0,1%-48h 90,70 13,00 1,23 12,50 6,00 3,33 0,15%-24h 90,70 18,50 1,80 16,63 6,53 2,87 0,15%-36h 90,70 16,70 1,57 15,17 6,20 2,63 0,15%-48h 92,60 18,50 1,53 13,50 5,47 4,07 0,20%-24h 92,60 18,50 1,60 14,40 6,93 3,37 0,20%-36h 88,90 20,40 1,37 13,43 6,27 3,30 0,20%-48h 88,90 22,20 1,37 13,70 5,83 3,23 CV% 6,50 4,20 4,80 6,90 LSD0,05 0,16 1,06 0,52 0,36
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 37 Sau khi cấy chuyển các chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro vào môi trường kích thích ra rễ thì thấy hệ số nhân chồi giữa các công thức không có sự chênh lệch nhiều so với ñối chứng. Công thức 0,15% - 24h có hệ số nhân chồi cao nhất (1,8), trong khi 2 công thức xử lý colchicine ở nồng ñộ thấp và thời gian kéo dài (0,05% - 48h; 0,1% - 48h) lại có hệ số nhân chồi thấp hơn ñối chứng (1,23).
ðối với các chỉ tiêu sinh trưởng (chiều cao chồi, số lá trung bình), kết quả cho thấy việc xử lý colchicine in vitro với nồng ñộ và thời gian xử lý khác nhau ñã làm thay ñổi khả năng tạo cây hoàn chỉnh của cây cẩm chướng gấm. Trong ñó, hầu hết các công thức ñã qua xử lý colchicine ñều có chiều cao chồi và số lá trung bình thấp hơn ñối chứng và các công thức xử lý colchicine 0%. Các công thức sinh trưởng kém nhất là các công thức xử lý colchicine thời gian kéo dài (0,05% - 48h; 0,1% - 48h; 0,15% - 48h và 0,20% - 48h). Trong khi, công thức 0% - 36h cho kết quả hệ số nhân chồi, chiều cao chồi và số lá trung bình chiếm ưu thế hơn hẳn.
Chiều dài rễ trung bình của các công thức nằm trong khoảng 2,43 - 4,43 cm và hai công thức 0,05% - 48h và 0,15% - 48h có chiều dài rễ trung bình chiếm ưu thế hơn. Trong khi công thức ñối chứng và các công thức xử lý colchicine 0% cho kết quả chiều dài rễ trung bình tương ñối ñồng ñều thì các công thức ñã qua xử lý colchicine với nồng ñộ và thời gian khác nhau lại có chiều dài rễ trung bình chênh lệch nhau và hầu hết ñều cao hơn so với ñối chứng, chứng tỏ việc xử lý colchicine
in vitro với nồng ñộ và thời gian khác nhau ñã làm tăng khả năng tạo cây hoàn chỉnh của chồi cẩm chướng.
Những kết quả trên cho thấy, việc xử lý colchicine in vitroñã làm ảnh hưởng ñến khả năng tạo cây hoàn chỉnh của cây cẩm chướng gấm. Trong khi tỷ lệ mẫu ra rễ và hệ số nhân chồi của các công thức không có sự biến ñộng lớn thì việc xử lý colchicine in vitro với nồng ñộ và thời gian khác nhau ñã làm giảm khả năng sinh trưởng (chiều cao chồi, số lá trung bình), làm tăng tỷ lệ xuất hiện biến dị hình thái (ñặc biệt là các công thức xử lý colchicine nồng ñộ cao và thời gian xử lý kéo dài) ñồng thời có chiều dài rễ trung bình chiếm ưu thế hơn ñối chứng và các công thức xử lý colchicine 0%.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 38 Công thức 0% - 36h (khả năng tạo cây hoàn chỉnh chiếm ưu thế)
Các công thức xử lý colchicine thời gian 48h Cây ra hoa sớm (công thức 0% - 36h)
Hình 3.3. Khả năng tạo cây hoàn chỉnh của các chồi cẩm chướng sau xử lý colchicine in vitro