2.4.4.1 Phương pháp tách chiết enzyme với aceton và rửa tủa (2 lần) bằng aceton
Quá trình trích ly thực hiện ở 200C với thời gian là 3h và tỷ lệ nguyên liệu và dung dịch Na2CO3 1.2 % theo khối lượng là 1 : 2.
Quá trình kết tủa sử dụng dung môi hữu cơ là aceton với tỷ lệ nguyên liệu và dung môi là 1 : 4, khuấy trong 10 phút để lắng 15 phút ở nhiệt độ lạnh.
Hình 2ﾧ.8. Sơ đồ thu nhận enzyme bằng phương pháp tách chiết với aceton.
2.4.4.2 Phương pháp tách chiết enzyme bằng cồn
Các giai đoạn tách chiết với cồn tuyệt đối với những tỷ lệ 1:4, 1:5, 1:7 và cồn 96o tương tự như với aceton nhưng thay aceton bằng cồn.
Xử lý nguyên liệu, xay nhỏ Nguyên liệu được bảo quản ở nhiệt độ đông đá
Trích ly Na2CO3 1,2 %
Tủa thu lấy enzyme
Ly tâm lấy tủa (lần 1)
Rửa tủa bằng aceton
Ly tâm lấy tủa (lần 2) Sấy tủa
Nghiền nhỏ
Chế phẩm enzyme
2.4.4.3 Phương pháp tách chiết enzyme kết tủa bằng (NH4)2SO4
Hình 2ﾧ.9. Sơ đồ tách chiết enzyme bằng phương pháp kết tủa bằng muối (NH4)2SO4
Trích ly lần 1 với nước cất với tỉ lệ nguyên liệu và dung môi là 1 : 1, để tự phân Tụy heo bảo quản
tươi Xử lý, và xay nhỏ Trích ly lần 1 Lọc lấy dung dịch Trích ly lần 2 Lọc lấy dung dịch Kết tủa
Ly tâm lấy tủa
Sấy tủa Nghiền Chế phẩm enzyme Nước cất H2SO4 0,25N (NH4)2SO4 0,25 N
6-8 h ở 200C.
Trích ly lần 2 với dung dịch H2SO4 0,25 , tỷ lệ nguyên liệu và dung môi là 2 : 1, pH 3,5-4, trích ly trong 1 h.
Quá trình kết tủa thực hiện với (NH4)2SO4 60-70%, với tỷ lệ nguyên liệu và dungmôi là 1 : 2.
2.4.4.4 Phương pháp thu nhận enzyme thô bằng phương pháp sấy
Lấy tụy tươi đã được bảo quản, cân trọng lượng và trộn với tinh bột một lượng bằng 10% so với trọng lượng tụy tươi, tiếp theo sấy ở những nhiệt độ 50oC, 60oC, 70oC. Sau 1 thời gian sấy ở những nhiệt độ trên thì ta đem xay nhuyễn và được chế phẩm enzyme thô.
Trong quá trình ly tâm lấy tủa, trộn với tá dược như lactose, glucose, hay tinh bột là các chất phụ gia có tính chất ổn định enzyme đồng thời rút ngắn thời gian sấy, hạn chế sự giảm hoạt tính enzyme trong khi sấy . Thường sấy ở chân không nhiệt độ to = 45oC.
Sấy khô : sau khi ly tâm thu phần kết tủa, đem sấy khô có thổi khí ở nhiệt độ 30 – 40oC hoặc sấy chân không hay thiết bị sấy đông khô. Để tránh bị mất hoạt tính người ta trộïn thêm vào chế phẩm enzyme các chất độn như tinh bột hoà tan, maltose dextrin trong quá trình sấy.