4. Ý nghĩa của đề tài
3.2.2. Kết quả phản ứng PCR – RAPD
Sau khi hoàn thành phản ứng PCR - RAPD, sản phẩm nhân bản được điện di trên agarose 1,0% để phân tích đa hình ADN của các mẫu nghiên cứu. Kết quả phân tích PCR - RAPD của 6 mẫu hoa cúc với tổng số 20 mồi RAPD thuộc các nhóm OPA, OPC, OPM, OPN và nhóm S. Trong đó, có 15 mồi xuất hiện các băng đa hình và 5 mồi cho kết quả đơn hình đó là các mồi: OPN4, OPN11, OPN16, S211 và S239.
Dưới đây là kết quả điện di sản phẩm PCR – RAPD với một số mồi điển hình:
* Kết quả phân tích vớimồi OPA2
Hình 3.2: Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu hoa cúc với mồi OPA2 trên gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu cúc với mồi OPA2 thu được tổng số 32 băng với 7 loại băng ở các kích thước khác nhau, trong đó 3 băng đa hình và 4 băng đơn hình. Kích thước các băng khoảng từ 300 bp đến 1200bp. Mẫu 4 (F9) xuất hiện 1 băng cá biệt có kích thức khoảng 1050 bp (hình 3.2).
* Kết quả phân tích vớimồi OPA18
Hình 3.3: Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu hoa cúc với mồi OPA18 trên gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
(1 – F0; 2 – F3; 3 – F7; 4 – F9; 5 – F11; 6 – F5)
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu cúc với mồi OPA18 thu được tổng số 9 băng với 3 loại băng ở các kích thước khác nhau, trong đó 2 băng đa hình và 1 băng đơn hình. Kích thước các băng dao động từ 400 bp đến 1000 bp. Các băng tách biệt, rõ ràng và đậm nét (hình 3.3).
* Kết quả phân tích vớimồi OPC2
Hình 3.4: Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu hoa cúc với mồi OPC2 trên gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
(1 – F0; 2 – F3; 3 – F7; 4 – F9; 5 – F11; 6 – F5)
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu cúc với mồi OPC2 thu được tổng số 53 băng với 9 loại băng ở các kích thước khác nhau, trong đó 1 băng đa hình và 8 băng đơn hình, ở mẫu 4 (F9) khuyết một băng ở vị trí có kích thước khoảng 300 bp. Kích thước các băng dao động từ 300 bp đến 1400 bp. Các băng tách biệt, rõ ràng và đậm nét (hình 3.4).
* Kết quả phân tích vớimồi OPN10
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu cúc với mồi OPN10 thu được tổng số 18 băng với 4 loại băng ở các kích thước khác nhau có 2 băng đa hình và 2 băng đơn hình, không có băng cá biệt. Kích thước các băng dao động từ 500 bp đến 1000 bp (hình 3.5).
Hình 3.5: Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu hoa cúc với mồi OPN10 trên gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
(1 – F0; 2 – F3; 3 – F7; 4 – F9; 5 – F11; 6 – F5) * Kết quả phân tích vớimồi S239
Hình 3.6: Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu hoa cúc với mồi S239 trên gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu cúc với mồi S239 thu được tổng số 48 băng với 8 loại băng ở các kích thước khác nhau, tất cả đều là băng đơn hình, không có băng cá biệt. Kích thước các băng dao động từ 300 bp đến 1400 bp. Các băng tách biệt, rõ ràng và đậm nét (hình 3.6).
* Kết quả phân tích vớimồi S256
Hình 3.7: Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu hoa cúc với mồi S256 trên gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
(1 – F0; 2 – F3; 3 – F7; 4 – F9; 5 – F11; 6 – F5)
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 6 mẫu cúc với mồi S256 thu được tổng số 40 băng với 7 loại băng ở các kích thước khác nhau có 2 băng đa hình và 5 băng đơn hình, không có băng cá biệt. Mẫu 2 (F3) khuyết 2 băng có kích thước khoảng 1500 bp và 1900bp. Kích thước các băng dao động từ 300 bp đến 1900 bp. Các băng tách biệt, rõ ràng và đậm nét (hình 3.7).
Bảng 3.2: Thống kê số băng ADN thu được của 6 mẫu hoa cúc nghiên cứu với 20 mồi PCR – RAPD
Số băng ADN xuất hiện trên từng mẫu Mồi F F3 F5 F7 F9 F11 Tổng OPA2 5 5 5 6 6 5 32 OPA18 2 1 1 1 3 1 9 OPC2 9 9 9 9 8 9 53 OPM6 11 11 10 10 8 9 59 OPM9 6 7 6 6 4 8 37 OPM12 4 4 2 3 4 5 22 OPM18 14 14 13 12 12 12 77 OPN4 5 5 5 5 5 5 30 OPN5 11 11 10 10 10 10 62 OPN6 7 6 7 7 6 6 39 OPN7 5 7 6 6 5 6 35 OPN10 3 3 3 3 3 3 18 OPN11 4 4 4 4 4 4 24 OPN16 5 5 5 5 5 5 30 OPN18 9 10 9 9 9 10 56 S201 9 10 9 9 9 9 55 S211 4 4 4 4 4 4 24 S239 8 8 8 8 8 8 48 S256 7 5 7 7 7 7 40 S285 4 6 6 6 5 4 31 Tổng 132 135 129 130 125 130 781
Kết quả thống kê số băng ADN thu được của 6 mẫu hoa cúc nghiên cứu với 20 mồi PCR – RAPD được trình bày ở bảng 3.2. Qua bảng 3.2 cho thấy:
- Với 120 phản ứng PCR - RAPD nhân lên được tổng số 781 băng ADN thuộc 147 loại băng có kích cỡ khác nhau. Trong đó 108 băng đơn hình, chiếm 73,47% và 39 băng đa hình, chiếm 26,53%.
- Kích thước băng có chiều dài nhỏ nhất khoảng 200bp và băng có kích thước lớn nhất khoảng 2400 bp.
- Mồi OPM18 nhân lên số băng nhiều nhất 77 băng. - Mồi OPA18 nhân lên được số băng it nhất 9 băng.
- Mồi OPA2 nhân lên được 32 băng trong đó ở mẫu 4 (F9) thu được một băng cá biệt có kích thước khoảng 1050 bp.
- Mồi OPC2 có 53 băng trong đó mẫu 4 (F9) khuyết 1 băng duy nhất (không xuất hiện băng) ở vị trí băng có kích thước khoảng 300 bp.
- Mồi OPA18 nhân lên được 9 băng trong đó mẫu 4 (F9) xuất hiện một băng cá biệt có kích thước khoảng 800bp.