4. Ý nghĩa của đề tài
2.1.2.2. Các hoá chất sinh học phân tử cần thiết
Các hoá chất sinh học phân tử cần thiết: các hoá chất tách chiết ADN, hoá chất làm PCR, hoá chất chạy gel agarose.
* Hoá chất tách chiết ADN:
- Nước cất hai lần, đã khử ion - Dung dịch EDTA 0,1M - Dung dịch Tris - HCl 0,2M - Dung dịch NaOH 1M - Dung dịch CH3COONa 3M - Dung dịch TE 10 mM, pH = 8 - Dung dịch đệm chiết SDS - Dung dịch NaCl - Dung dịch TAE 1x
- Cồn (Ethanol) 70%: lấy 100 ml cồn 99%, cộng 41 ml nước giữ ở nhiệt độ 40C.
* Hoá chất chạy điện di:
Điện di gel agarose gồm các hoá chất: TAE 1X hoặc TBE 1X, chất nhuộm Bromophenol blue (hoặc Xylene cyanol hoặc hỗn hợp cả 2 chất này), Ethidium bromide, agarose.
* Hoá chất dùng để chạy phản ứng PCR – RAPD
- Đệm PCR 1X (Buffer) của hãng Quiagen hoặc Invitrogen - MgCl2 của hãng Fermentas
- dNTPs (dATP, dGTP, dCTP, dTTP hoặc dUTP) của hãng Sigma - Taq polymerase của hãng Fermentas
- Nước khử ion
Bảng 2.1: Tên và trình tự nucleotid của 20 mồi RAPD sử dụng trong nghiên cứu
ST T
Tên mồi Trình tự nucleotid STT Tên mồi Trình tự nucleotid
1 OPA2 TGCCGAGCTG 11 OPN7 CAGCCCAGAG
2 OPA18 AGGTGACCGT 12 OPN10 ACAACTGGGG
3 OPC2 GTGAGGCGTC 13 OPN11 TCGCCGCAAA
4 OPM6 CTGGGCAACT 14 OPN16 AAGCGACCTG
5 OPM9 GTCTTGCGGA 15 OPN18 GGTGAGGTCA
6 OPM12 GGGACGTTGG 16 S201 GGGCCACTCA
7 OPM18 CACCATCCGT 17 S211 TTCCCCGCGA
8 OPN4 GACCGACCCA 18 S239 GGGTGTGCAG
9 OPN5 ACTGAACGCC 19 S256 CTGCGCTGGA
10 OPN6 GAGACGCACA 20 S285 AGCCGTGGAA
* Các thiết bị:
- Máy PCR của hãng Eppendorf
- Máy ly tâm lạnh (Eppendorf 58 10 - R và 2K15, Sigma) - Máy điện di BIO - RAD GT (Anh)
- Bộ chụp ảnh gel High Perfor mance (Mỹ) - Thiết bị Votex (Genie 2 và MS1 Minishaker) - Nồi hấp thanh trùng (05 MB1 - 160T - 3 - Nga) - Cân điện tử Sartorious (Đức)
- Tủ sấy (Memmert) - Lò vi sóng