2.3.3.1. Đùn ép tuần tự sử dụng mini – extruder
Liposome thu được sau bào chế được đùn ép lần lượt dưới áp suất thấp sử dụng thiết bị đùn mini extruder:
- Nâng nhiệt độ của mẫu lên 500C và giữ nhiệt trong suốt quá trình đùn (dùng bể điều nhiệt).
- Đùn lần lượt mẫu qua các màng polycarbonat kích thước 1000 – 400– 200 nm, mỗi mẫu đùn qua 29 lần.
2.3.3.2. Siêu âm sau đó đùn ép tuần tự sử dụng mini – extruder
Liposome thu được sau bào chế được siêu âm để làm giảm KTTP sau đó đùn ép qua thiết bị mini extruder để mẫu đồng nhất hơn, giảm chỉ số PDI:
- Chia mẫu thành các phần 15 ml mẫu, cho vào cốc có mỏ dung tích 25 ml, tiến hành khảo sát quá trình siêu âm: siêu âm liên tục trong 3 phút và siêu âm ngắt quãng trong 3 phút, 5 phút, 7 phút. Trong quá trình siêu âm có sử dụng nước đá để tránh tăng nhiệt cục bộ hỗn dịch liposome. Mẫu thu được đánh giá các đặc tính để chọn ra điều kiện thích hợp nhất cho quá trình siêu âm.
- Mẫu có KTTP và phân bố KTTP có giá trị nhỏ nhất được lựa chọn để thực hiện quá trình đùn ép qua màng polycarbonat kích thước lỗ lọc 200 nm dưới áp suất thấp.
2.3.3.3. Đùn ép dưới áp suất cao
Liposome sau bào chế được đùn ép dưới áp lực cao, sử dụng thiệt bị đùn cao áp EmulsiFlex-c5.
- Điều kiện đùn: màng polycarbonat kích thước lỗ lọc 400 nm, áp suất 80 – 100 Psi, khảo sát thời gian đùn tuần hoàn trong 1 phút, 4 phút và 6 phút để lựa chọn điều kiện thích hợp cho quá trình đùn ép.
2.3.4. Đông khô liposome
Bước đầu thực hiện quá trình đông khô để tăng độ ổn định của liposome trong bảo quản:
- Tiến hành lựa chọn tá dược động khô: Lựa chọn các tá dược đông khô là lactose, sucrose và mannitol với tỉ lệ số mol đường : tổng số mol lipid = 10:1.
- Bào chế liposome AMB theo phương pháp trình bày ở mục 2.3.2. Bổ sung tá dược đông khô vào dung dịch dùng để hydrat hóa.
- Đồng nhất và làm giảm KTTP theo phương pháp đùn ép dưới áp suất thấp được mô tả ở mục 2.3.3.
- Hút chính xác mỗi 2 ml hỗn dịch liposome sau khi giảm KTTP, cho vào lọ thủy tinh dung tích 10 ml, đông khô theo quy trình: làm đông xuống - 600C, giữ trong 8h; hút chân không áp suất 0,1 mBar, gia nhiệt với tốc độ 0,10C/phút đến 300C, giữ trong 8h.