L ỜI CẢM ƠN
2.2.1Phương pháp phân lập chủng vi khuẩn
2) Môi trường:
2.2.1Phương pháp phân lập chủng vi khuẩn
Tiến hành phân lập các mẫu đất như sau:
Lấy 10g đất cho vào bình tam giác chứa 90ml dd NaCl 0,85% rồi bắt đầu
tiến hành pha loãng ở các nồng độ khác nhau. Đem lắc mẫu trên máy lắc. Pha
loãng mẫu theo các nồng độ từ 10-1 đến 10-8. Lấy 1ml ở bình tam giác sau khi lắc
220 vòng/phút trong 15 phút cho vào ống nghiệm chứa 9ml, cứ làm như vậy cho đến khi được nồng độ thí nghiệm.(Để có số khuẩn lạc trên đĩa phù hợp, mẫu thường được pha loãng. Do hiếm khi biết trước được nồng độ vi sinh vật trong
mẫu, người ta thường dùng nhiều nồng độ khác nhau). Tuỳ vào số lượng vi sinh vật nhiều hay ít mà ta chọn nồng độ cấy thích hợp (đối với vi khuẩn thường từ
10-5,10-6,10-7,10-8 ).
Dùng môi trường thạch thường đã hấp khử trùng đổ vào đĩa petri. Tiến
hành nhỏ 0,05ml dịch đã pha loãng vào đĩa thạch đã ghi tên mẫu, nồng độ. Dùng que gạt, gạt đều đến khi san đều tổng mẫu trên bề mặt thạch. Sau đó cất và nuôi cấy mẫu phân lập ở 370C (tuỳ vào loại vi sinh vật ưa ẩm hay ưa nhiệt mà ta cho vào các nhiệt độ khác nhau). Sau khoảng 2 ngày khi vi sinh vật đã phát triển trên
đĩa thạch, tiến hành quan sát tìm loại vi sinh vật cần nghiên cứu.
+ Đối với vi khuẩn: bề mặt nhẵn, ướt; khi dùng que gạt không còn lại
trong thạch.
+ Đối với xạ khuẩn: bề mặt khô xù xì; có hình tròn. + Đối với nấm: có hệ sợi
(Đối với nấm và xạ khuẩn có khuẩn ty cơ chất, khuẩn ty khí sinh nên ăn sâu
xuống mặt thạch).
Nhờ vào đặc điểm này mà ta có thể tìm được loại vi khuẩn cần cho nghiên cứu.
Tách và thuần khiết khuẩn lạc:
Chọn những vi khuẩn cần cho nghiên cứu trên hộp lồng chứa nhiều vi sinh
vật khác nhau rồi cấy vào ống nghiệm (ghi ki hiệu đầy đủ để cho các bước nghiên cứu tiếp theo). Sau đó lấy từ ống nghiệm ra tinh sạch bằng phương pháp cấy
ziczac, tinh sạch nhiều lần. Kiểm tra độ thuần khiết của giống bằng cách kiểm tra
vết cấy , kiểm tra độ thuần chủng của các khuẩn lạc và kiểm tra tế bào vi khuẩn dưới kính hiển vi. Khi được khuẩn lạc đồng nhất và tách rời trên đĩa thạch thì cấy
vào ống nghiệm giữ giống.
Sau khi tinh sạch xong ta chọn khuẩn lạc mọc riêng rẽ cấy vào ống nghiệm
thạch nghiêng. Tiến hành cấy ziczac trên ống nghiệm thạch nghiêng để được giống
vi khuẩn thuần khiết. Giống vi khuẩn được bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ 40C, thời gian tốt nhất là 1 tháng. Sau khoảng 1 tháng tiến hành cấy chuyền định kỳ để đảm bảo dinh dưỡng cho vi sinh vật. Trước khi sử dụng chủng vi khuẩn cần được
hoạt hoá.
Lưu ý: mọi thao tác trên phải được thực hiện trong điều kiện vô trùng: + Tay và bề mặt tiếp xúc trong tủ cấy được khử trùng bằng cồn.
+ Không khí trong tủ được khử trùng bằng tia UV.
+ Dụng cụ phải được khử trùng trên ngọn lửa đèn cồn.
Hình 7: Phương pháp phân lập vi khuẩn từ đất
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});