Chúng tôi tiến hành tách chiết lượng lớn plasmid pBSIIK(+)/Δasd và cắt với cặp enzyme giới hạn XbaI và KpnI để thu được đoạn gen Δasd làm nguyên liệu cho thí nghiệm tạo dòng plasmid tái tổ hợp pRE112/Δasd.
Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm cắt pBSIIK(+)/Δasd bằng cặp enzyme cắt giới hạn XbaI và KpnI để thu đoạn gen Δasd trên gel agarose 1,2% được trình bày trên Hình 3.14
M
Δasd (Pa1234) pBSIIK+
Hình 3.14. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm cắt pBSIIK(+)/Δasd
Đoạn gen Δasd có kích thước xấp xỉ 4 kp sẽ ở phía trên đối với đoạn gen pBSIIK(+) (kích thước 3 kp). Do đó, phần DNA ở phía trên sẽ được cắt, tách chiết và tinh sạch. Đoạn gen Δasd sau khi được tinh sạch được đem lai với plasmid pRE112 đã được xử lý với cặp enzyme cắt giới hạn XbaI - KpnI và CIP trước đó. Sản phẩm thu được sau phản ứng lai được biến nạp vào tế bào E. coli χ7213 khả biến.
Các thể biến nạp được sàng lọc trên môi trường LB chứa chloramphenicol 30 µg/ml và DAP 50µg/ml. Sau đó, chúng được tách plasmid và cắt kiểm tra bằng cặp enzyme giới hạn XbaI, KpnI.
Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm cắt của 3 dòng chọn lọc vector tái tổ hợp, pRE112/Δasd bằng cặp enzyme giới hạn XbaI và KpnI trên gel agarose 1,2% được trình bày trên Hình 3.15
M 1 2 3 4 5
pRE112 Δasd
Hình 3.15. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm cắt của 3 dòng chọn lọc vector tái tổ hợp pRE112/Δasd
Kết quả thu được cho thấy vector tái tổ hợp pRE112/Δasd đã được tạo thành công. Các dòng này sẽ được sử dụng tiếp hợp để tạo các dòng S. choleraesuis mang gen asd đột biến.