Phương pháp xử lý số liệu

5. Ý nghĩa khoa học

2.2.3. Phương pháp xử lý số liệu

Chỉ số glucose huyết đƣợc so sánh giữa thời điểm trƣớc và sau nghiên cứu; so sánh giữa các lô dùng thuốc và lô đối chứng ở cùng thời điểm.

X1 – Tỷ lệ % tăng glucose huyết

A – Chỉ số glucose huyết tại thời điểm ban đầu B – Chỉ số glucose huyết tại thời điểm đánh giá

Sự khác biệt đƣợc kiểm định bằng thuật toán t- test student với p< 0,05 có ý nghĩa thống kê.

* Tỷ lệ hạ glucose huyết, (CHL, HDL - C, LDL - C, TG) được tính theo

công thức dưới đây

Tỷ lệ % hạ glucose huyết:

X2 - Tỷ lệ % hạ glucose huyết

A - Chỉ số glucose huyết tại thời điểm ban đầu B - Chỉ số glucose huyết tại thời điểm đánh giá

Sự khác biệt đƣợc kiểm định bằng thuật toán t - test student với p< 0,05 có ý nghĩa thống kê.

- -

CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1. Kết quả tạo mô hình chuột BP thực nghiệm, chuột ĐTĐ type 2.

3.1.1. Kết quả tạo mô hình chuột BP thực nghiệm

Chuột nhắt trắng (Muss musculus) chủng Swiss (khối lƣợng ban đầu là 17 - 20g) đƣợc chia làm 12 lô, đƣợc phân lô ngẫu nhiên mỗi lô 6 con.

Lô 1: Cho ăn chế độ bình thƣờng (thức ăn của Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ƣơng).

Lô 2 - 12: Cho ăn thức ăn giàu lipid và cholesterol cao theo bảng 2.1. Sau 6 tuần nuôi theo chế độ trên, chúng tôi tiến hành cân khối lƣợng chuột. Kết quả sự thay đổi của lô nuôi thƣờng và lô nuôi béo đƣợc thể hiện ở bảng 3.1 và hình 3.1

A – Chuột béo B – Chuột thƣờng Hình 3.1. Chuột béo và chuột thƣờng sau 6 tuần nuôi

Bảng 3.1. Khối lƣợng trung bình (tính theo gam) của hai nhóm chuột nuôi bằng hai chế độ dinh dƣỡng khác nhau

Hình 3.2.Khối lƣợng trung bình (tính theo gam) của hai nhóm chuột nuôi bằng hai chế độ dinh dƣỡng khác nhau

Qua thƣ̉ nghiệm chúng tôi đã tạo thành công mô hình chuột béo phì thƣ̣c nghiệm . Bảng 3.1 và hình vẽ cho thấy chuột nuôi theo chế độ ăn có hàm lƣợng lipid và cholesterol cao có khả năng tăng khối lƣợng cơ thể lớn hơn nhiều so với chuột ăn thức ăn thƣờng. Sự sai khác này có ý nghĩa thống kê với mức ý nghĩa p< 0,05. Cụ thể : chuột nuôi bằng thƣ́c ăn thƣờng cơ thể tăng thêm 16,79g ƣ́ng với 192,50% so với ban đầu . Trong khi chuột nuôi bằng thƣ́c ăn giàu lipid và cholesterol khối lƣợng cơ thể tăng thêm 35,34g ƣ́ng với

Nhóm

Khối lƣợng (g) Tỷ lệ % sau 6

tuần so với ban đầu Ban đầu Tuần 1 Tuần 2 Tuần 3 Tuần 4 Tuần 5 Tuần 6

Ăn thƣờng 18,15 ±1.07 20,19 ±0.38 22,96 ±0.57 25,74 ±0.62 29,17 ±1.01 31,76 ±1.12 34,94 ±1.07 ↑92,50% Ăn béo 17,92 ±1,35 22,74 ±1,72 28,33 ±1,38 35,83 ±1,74 41,92 ±1,68 48,85 ±1,45 53,26 ±1,81 ↑197,21%

297,21% và cao gấp 2,10 lần so với chuột nuôi thƣờng . Kết quả trên là khả quan và phù hợp với nhiều kết quả nghiên cứu thực nghiệm trên chuột của các tác giả trong và ngoài nƣớc. Theo nghiên cứu của Đỗ Ngọc Liên và cộng sự, sau 6 tuần khối lƣợng của chuột nuôi béo tăng gấp 1,55 lần tƣơng ứng với 55,01% với chuột ăn thƣờng. Theo quan sát của chúng tôi, chuột béo phì có biểu hiện kém linh hoạt, vận động đi lại chậm chạp hơn so với chuột nuôi ở chế độ bình thƣờng. Điều đó cho thấy chúng đã ít nhiều bị ảnh hƣởng đến yếu tố thể chất. Nhƣ vậy, chế độ thức ăn giàu chất béo có ảnh hƣởng rõ rệt đến độ tăng khối lƣợng của chuột [9].

Chọn ngẫu nhiên 10 con chuột nuôi béo . Sau khi cho nhịn đói 12 giờ, chúng tôi lấy máu tổng số và phân tích chỉ số hoá sinh để đánh giá ảnh hƣởng của chế độ nuôi béo đến chỉ số lipid trong huyết thanh .

Các chỉ số lipid (mmol/l) TC TG HDL-c LDL-c Glucose Nhóm ăn thƣờng 3,82 1,42 1,55 2,35 6,47 ±0,31 ±0,37 ±0,25 ±0,22 ±0,29 Nhóm ăn béo 6,13 2,45 0.85 4,06 8,79 ±0,18 ±0,28 ±0,24 ±0,48 ±0,36 So sánh lô béo/thƣờng ↑1,60 ↑1,73 ↓1,82 ↑1,72 ↑1,36

Bảng 3.2. So sánh một số chỉ số lipid máu giữa chuột nuôi thƣờng và nuôi béo phì thực nghiệm.

Hình 3.3. So sánh một số chỉ số lipid máu giữa chuột nuôi thƣờng và nuôi béo phì thực nghiệm.

Qua bảng số liệu bảng 3.2 và hình 3.3 cho thấy các chỉ số hóa sinh đã có sự khác biệt rất lớn giữa lô nuôi thƣờng và lô nuôi béo. Cụ thể:

Hàm lƣợng glucose của chuột béo phì là 8,79 mmol/l, tăng 35,86% so với chuột nuôi thƣờng (6,47mmol/l) với mức ý nghĩa p< 0,05

Nồng độ cholesterol của chuột béo phì là 6,13 mmol/l, tăng 60,47% so với lô nuôi thƣờng (3,82 mmol/l) với p< 0,05,Triglycerid của chuột béo phì là 2.45 mmol/l, tăng 103% so với lô nuôi thƣờng (1,42mmol/l) với p<0,05.

Hàm lƣợng LDL - c trong máu chuột béo phì là 4,06 mmol/l, tăng 72,76% so với lô chuột nuôi thƣờng (2,35 mmol/l) với p < 0,05, Trái lại, HDL - c lại có sự sụt giảm mạnh, giảm tới 45,16% so với chuột nuôi thƣờng (1,55mmol/l), với p < 0,05.

Khi chuột đƣợc nuôi bằng thƣ́c ăn giàu lipid và cholesterol thì không chỉ tăng về khối lƣợng mà còn tăng về các chỉ số lipid nhƣ cholesterol, triglyceride, LDL - c tăng rõ rệt. Qua bảng số liệu ta thấy rằng béo phì đã kéo theo sƣ̣ rối loạn trao đổi glucid làm nồng độ glucose trong máu tăng cao . Điều này chƣ́ng tỏ đã có sự biểu hiện của hiện tƣợng kháng insulin , dẫn tới nguy cơ mắc Đ TĐ type 2

của chuột béo phì. Kết quả này hoàn toàn phù hợp với quy luật thực tế và nghiên cứu của Srinivasan và cộng sự là chuột ăn thức ăn có hàm lƣợng lipit cao trong thời gian dài rất dễ dẫn đến rối loạn trao đổi chất glucid - lipid [23].

Từ các dẫn liệu khối lƣợng cơ thể, các chỉ số mỡ máu tăng cao bất thƣờng, cùng với sự hoạt động kém linh hoạt cuả chuột nuôi béo so với chuột nuôi thƣờng. Chúng tôi có thể kết luận rằng mô hình gây chuột béo phì bằng thực nghiệm đã thành công. Chuột béo phì tiếp tục sử dụng cho những nghiên cứu tiếp theo.

3.1.2. Kết quả tạo mô hình chuột ĐTĐ type2 thực nghiệm.

Trên thế giới có rất nhiều mô hình gây ĐTĐ thƣ̣c nghiệm . Thông thƣờng đối với ĐTĐ type 1 ngƣời ta tiêm STZ hoặc alloxan ở liều cao vào chuột mà không cần phải qua thời gian nuôi béo do tác dụng phá huỷ hoàn toàn tế bào β của đảo tuỵ bởi STZ hoặc alloxan . Đối với mô hình ĐTĐ type 2 lại tuỳ thuộc vào nhiều yếu tố nhƣ dòng chuột , thời gian nuôi , chế độ ăn thƣ́c ăn béo. Chuột béo phì tiêm STZ hoặc alloxan liều đơn , chuột béo phì tiêm STZ liều thấp kết hợp nicotineamide , chuột béo phì tiêm STZ liều thấp lặp lại .

STZ (Streptozotocin) có tên hóa học là: 2 - deoxy - 2 - (3 - metyl - 3 - nitrosoureido) - D - glucopyranose, đƣợc phân lập đầu tiên vào năm 1960 từ Streptomyces achromogens. Đây là kháng sinh có hoạt tính chống ung thƣ, tiêu u và gây đái tháo đƣờng. STZ đã kết hợp với một protein vận chuyển glucose qua màng vài tế bà o GLUT 2 (glucose transporter ) để đƣa vào tế bào β và gây phá huỷ AND của tế bào β tuyến tuyến tuỵ . Tƣ̀ đó gây suy yếu hoặc phá huỷ các tế bào β, gây ảnh hƣởng nghiêm trọng tới khả năng tiết insu lin [20], [21].

Với nguyên tắc kết hợp giữa chế độ ăn béo trong thời gian dài và tiêm màng bụng STZ (pha trong đệm Citrat 0,01M, pH 4,5) với liều đơn 110

nghiệm. Kết quả đƣợc trình bày trong bảng 3.3 và có so sánh với các lô chuột chỉ ăn thƣờng tiêm STZ, chuột thƣờng và chuột béo chỉ tiêm đệm (Citrat 0,01M, pH 4,5).

Các lô chuột Nồng độ glucose huyết (mmol/l)

Trƣớc khi tiêm Sau khi tiêm 72 giờ

Chuột thƣờng tiêm đệm 6,75±0,42 7,15±0,51

Chuột thƣờng tiêm STZ (110mg/ kg) 7,25±0,36 7,42±0,47

Chuột béo phì tiêm đệm 8,15±0,21 8,46±0,39

Chuột béo phì tiêm STZ (110mg/ kg) 8,56±0,34 22,16±0,85 p< 0,05

Bảng 3.3. Nồng độ glucose huyết lúc đói của các lô chuột trƣớc và sau khi tiêm STZ

I - Chuột thƣờng tiêm đệm II - Chuột thƣờng tiêm STZ III - Chuột béo phì tiêm đệm IV - Chuột béo phì tiêm STZ

Hình 3.4. Nồng độ glucose huyết lúc đói của các lô chuột trƣớc và sau khi tiêm STZ

Từ bảng 3.3 và hình 3.4 ở trên ta thấy:

- Không có sự thay đổi nhiều về nồng độ glucose sau khi tiêm ở lô chuột thƣờng tiêm đệm tƣơng ứng là 6,75 mmol/l và 7, 15 mmol/l.

- Đã có sự khác nhau tăng nhẹ nồng độ glucose huyết của chuột thƣờng tiêm STZ sau khi tiêm (nồng độ glucose lúc đói trƣớc và sau 72 giờ tiêm tƣơng ứng 7, 25 và 7, 42mmol/l). Điều này có thể do chuột ăn chuẩn có thể tự điều chỉnh nồng độ glucose máu nhờ tăng lƣợng insulin tiết ra để điều hòa lƣợng glucose trong máu.

- Ở lô chuột béo phì tiêm đệm nồng độ glucose huyết sau khi tiêm cũng thay đổi không nhiều so với ban đầu tƣơng ứng là 8,15mmol/l và 8,46mmol/l.

- Ở lô béo phì tiêm STZ, nồng độ glucose huyết tăng mạnh so với lô thƣờng và so với trƣớc khi tiêm. Sau 72 giờ tƣơng ứng là 8,56mmol/l và 22,16mmol/l.

Nguyên nhân tăng mạnh vì: chuột béo phì bị rối loạn mỡ trong máu làm tăng thành phần mỡ gây hại và giảm thành phần mỡ bảo vệ cho cơ thể . Hàm lƣợng của các chỉ số lipid nhƣ cholesterol , triglycerid, LDL - c trong huyết thanh của chuột tăng cao so với chuột thƣờng , hàm lƣợng HDL - c lại giảm thấp. Chứng tỏ những rối loạn chuyển hóa lipid rất dễ dẫn đến rối loạn chuyển hóa glucid , các quá trình chuyển hóa trong cơ thể luôn có mối quan hệ biện chứng chặt chẽ . Vì thế chuột béo phì khi tiêm STZ sẽ tăng nguy cơ rối loạn mỡ máu dẫn tới đ ái tháo đƣờng . Kết quả thu đƣợc phù hợp với nghiên cứu của tác giả Đỗ Ngọc Liên và cộng sự (2006), Phùng Thanh Hƣơng, Trần Thị Chi Mai và nhiều nghiên cứu khác khi tiến hành gây ĐTĐ bằng STZ trên mô hình chuột béo, đều có glucose huyết tăng cao trên 18mmol/l. Vậy việc kết hợp nuôi béo và tiêm STZ liều 110mg/kg là thành công trong mô hình chuột ĐTĐ thƣ̣c nghiệm mô phỏng theo ĐTĐ type 2 [10], [11], [12]..

3.2. Đánh giá tác dụng giảm khối lƣợng từ dịch chiết của loài Diệp Hạ Châu ( Phyllanthus urinaria L.). trên mô hình chuột béo phì. Châu ( Phyllanthus urinaria L.). trên mô hình chuột béo phì.

Sau khi gây mô hình chuột béo phì thực nghiệm thành công, chúng tôi tiến hành nghiên cứu khả năng giảm khối lƣợng chuột đái tháo đƣờng của các phân đoạn dịch chiết từ loài Diệp Hạ Châu.

Chuột béo phì đƣợc uống các cao phân đoạn EtOH , cao phân đoạn n - hexan, cao phân đoạn chloroform , cao phân đoạn ethylacetat , cao phân đoạn nƣớc với liều lƣợng 2000mg/kg thể trọng . Cao của các phân đoạn dịch chiết đƣợc hòa bằng nƣớc ấm và cho chuột uống hàng ngày vào mỗi buổi sáng. Trong thời gian 21 ngày điều trị, chúng tôi thu đƣợc kết quả ở bảng 3.4 và hình 3.5 sau:

Bảng 3.4. So sánh khối lƣợng của các lô chuột béo phì trƣớc và sau khi điều trị với p < 0,05

Lô chuột điều trị

Khối lƣợng (g) Sự thay đổi % sau 21 ngày

điều trị Ban đầu Sau 21 ngày

Lô 1 (Bình thƣờng ) 34,82 ± 1,25 40,69 ± 2,14 ↑ 16,85 Lô 2 (Không điều trị) 52,98 ± 1,26 60,48 ± 1,50 ↑14,16 Lô 3 (EtOH) 53,46 ± 1,71 37,38± 2,53 ↓30,26 Lô 4 (n - hexan) 53,38 ± 1,06 43,57± 1,94 ↓18,37 Lô 5 (CHCl3) 53,25 ± 2,23 40,73±2,07 ↓23,52 Lô 6 (EtOAc) 52,91 ± 1,75 44,29±2,20 ↓16,29 Lô 7 (PĐ nƣớc) 53,16 ± 2,63 45,38±1,35 ↓14,63 Lô 8 (Metf) 54,41 ± 2,32 35,81±1,47 ↓34,17

Hình 3.5. So sánh khối lƣợng của các lô chuột béo phì trƣớc và sau khi điều trị

Từ bảng 3.4 và hình 3.5 ta thấy:

Sau 21 ngày khối lƣợng của các lô chuột có sự thay đổi đáng kể ở lô đối chứng cho uống nƣớc bình thƣờng khối lƣợng của các lô chuột vẫn tiếp tục tăng.

Ở các lô 3, 4, 5 và 6, chuột nuôi với chế độ thức ăn có hàm lƣợng lipid cao, nhƣng đƣợc điều trị bằng cách cho chuột uống cao các phân đoạn dịch chiết của loài Diệp Hạ Châu, chúng tôi nhận thấy trọng lƣợng cơ thể sau 21 ngày điều trị của các lô chuột đều giảm đáng kể. Trong đó, chuột đƣợc điều trị bằng cao phân đoạn cồn giảm mạnh nhất (30,26%), ở cao phân đoạn n - hexan giảm thấp nhất (18,37%), các phân đoạn CHCl3, EtOAc giảm tƣơng ứng23,25%,16,29% và ở lô 7 là cao phân đoạn nƣớc cũng giảm 14,63%.

Những nghiên cứu này chỉ ra rằng: chuột ăn thức ăn giàu chất béo có chứa 0,2% dịch chiết vỏ Cam, Trà đen trong 10 tuần đã làm giảm 48,8% trọng lƣợng các lô chuột so với nhóm đối chứng (ăn thức ăn béo và u ống nƣớc).

từ lá sen hồng (Nelumbo nucifera) đến các enzyme tiêu hoá, quá trình trao đổi lipid và quá trình sản sinh năng lƣợng trên mô hình chuột cống và chuột nhắt trắng thực nghiệm.

Kết quả cho thấy các cao phân đoạn từ dịch chiết của loài Diệp Hạ Châu có tác dụng giảm trọng lƣợng rất tốt ở chuột béo phì th ực nghiệm, đặc biệt là cao phân đoạn EtOH làm giảm khối lƣợng mạnh nhất.

3.3. Đánh giá tác dụng hạ đƣờng huyết và khả năng chống rối loạn trao đổi lipid từ dịch chiết của loài Diệp Hạ Châu (Phyllanthus urinaria L.) đổi lipid từ dịch chiết của loài Diệp Hạ Châu (Phyllanthus urinaria L.) trên mô hình chuột đái tháo đƣờng type 2.

3.3.1.Tác dụng của các phân đoạn dịch chiết từ loài Diệp Hạ Châu đến nồng độ glucose huyết lúc đói của chuột ĐTĐ

Để nghiên cứu tính ổn định đƣờng huyết của các lô chuột thí nghiệm. Chúng tôi cho chuột uống cao các phân đoạn dịch chiết của loài Diệp Hạ Châu và metformin trong 21 ngày liên tiếp với liều lƣợng 2000mg/kg thể trọng/ngày. Còn ở lô đối chứng chúng tôi cho chuột uống nƣớc cất. Chuột nhịn đói trƣớc khi cho chuột uống cao dịch chiết, nhằm tránh hƣởng sự thức ăn đến khả năng hấp thụ cao dịch chiết. Kết quả đƣợc trình bày trong bảng 3.5 và biểu đồ hình 3.6

Số lô Phân lô ĐT Nồng độ glucose huyết lúc đói (mmol/l)

Trƣớc ĐT 7 ngày ĐT 14 ngày ĐT 21 ngày ĐT

1 ĐC 7,25 7,32 7,12 7,41 ±0,35 ±0,41 ±0,82 ±0,43 ↑0,96% ↓1,79% ↑2,21% 2 KĐT 22,03 24,76 27,05 29,25 ±0,94 ±0,82 ±2,05 ±1.62 ↑12,39% ↑22,78% ↑32,77% 3 Met 23,15 15,89 11,75 8,57 ±2,05 ±1.62 ±2,05 ±1.29 ↓31,36% ↓49,24% ↓62,98% 4 EtOH 22,51 18,34 14,21 10,59 ± 2,63 ±1,68 ±1,45 ±1,81 ↓18,52% ↓36,87% ↓52,95% 5 n-hexan 21,27 18,67 16,64 14,58 ±1,15 ±0,21 ±0,29 ±0,38 ↓12,22% ↓21,76% ↓31,45% 6 Chloroform 21,36 18,53 15,96 12,51 ±1,29 ±1,22 ±1,16 ±1,33 ↓13,25% ↓25,28% ↓41,43% 7 EtOAc 22,61 18,85 15,78 12,92 ±1,74 ±1,68 ±1,45 ±1,81 ↓16,73% ↓30,21% ↓42,86% 8 PĐ nƣớc 21,09 19,17 17,84 16,05 ±0,97 ±1,16 ±1,18 ±1,15 ↓9,10% ↓15,41% ↓23,89%

Bảng 3.5. Kết quả nồng độ glucose huyết lúc đói của các phân đoạn dịch chiết tƣ̀ loài Diệp Hạ Châu đến chuột ĐTĐ sau 21 ngày điều trị

Hình 3.6. Kết quả nồng độ glucose huyết lúc đói của các phân đoạn dịch chiết tƣ̀ loài Diệp Hạ Châu đến chuột ĐTĐ sau 21 ngày điều trị

Qua bảng 3.5 và hình 3.6 ta thấy ở lô chuột thƣờng uống nƣớc cất nồng độ glucose sau 21 ngày gần nhƣ là không thay đổi . Tuy nhiên ở lô chuột ĐTĐ không điều trị đã tăng tƣ̀ 22,03 lên 29,24 mmol/l (tăng 32,77%). Điều này cho thấy rằng chuột ĐTĐ không đƣợc điều trị t hì nồng độ glucose huyết ngày càng tăng và càng nghiêm trọng hơn .

Lô chuột uống thuốc metformin và các cao phân đoạn của loài Diệp Hạ Châu đều giảm mạnh sau 7 ngày đầu điều trị và tiếp tục giảm ở các ngày tiếp theo nhƣng chậm dần. Theo dõi các chỉ số glucose huyết trong quá trình điều trị chúng tôi nhận thấy các cao phân đoạn của loài Diệp Hạ Châu có tác dụng tốt trong việc giảm nồng độ glucose huyết . Với liều điều trị là 2000 mg/kg thì sau 21 ngày ở cao phân đoạn EtOH và cao phân đoạn ethylacetat và chloroforrm là có tác dụng tốt nhất (ứng với 52,95%, 42,86% và 41, 43%). Tiếp theo là cao phân đoạn n - hexan và có tác dụng giảm nồng độ glucose huyết tƣơng ƣ́ng là