5. Ý nghĩa khoa học
2.2.2. Phương pháp định lượng một số chỉ số hóa sinh
2.2.2.1. Phương pháp định lượng glucose huyết
Máu dùng để định lƣợng glucose huyết là máu toàn phần lấy từ đuôi chuột. Định lƣợng glucose huyết bằng máy đo đƣờng huyết tự động và bộ kít thử tƣơng ứng (One Touch Ultra, Johnson & Johnson, USA).
Hình 2.5: Phƣơng pháp lấy máu đo glucose huyết
* Nguyên tắc
Nguyên tắc hoạt động của phƣơng pháp dựa trên chuỗi phản ứng tạo màu và đƣợc đo bằng phƣơng pháp quang học để định lƣợng glucose huyết.
+ Phản ứng 1: khi máu tiếp xúc với bề mặt của vùng phản ứng que thử, dƣới xúc tác đặc hiệu của glucose oxidase (GOD) có trong kít thử, glucose trong máu phản ứng với oxy (không khí) tạo thành acid gluconic và hydro peroxide (H2O2).
+ Phản ứng 2: hydro peroxide vừa tạo ra sẽ phản ứng với O-Dianisidin tạo phức màu và đƣợc thiết bị đo quang học trong máy One Touch Ultra chuyển hóa định lƣợng biểu thị bằng số mmol/l hoặc mg/dl glucose.
* Tiến hành
Ấn nút điều khiển để khởi động máy. Gắn que thử vào máy. Dùng kim châm chuyên dụng châm vào mạch máu ở đuôi chuột, để máu chảy tự nhiên,
phải là giọt máu tròn đầy, phủ kín giọt máu lên vùng phản ứng của que thử. Sau 5 giây, kết quả nồng độ đƣờng huyết sẽ hiển thị trên màn hình.
2.2.2.2. Định lượng một số chỉ số lipid trong huyết thanh
Các chỉ số lipid huyết thanh (cholesterol toàn phần, triglycerid,
HDL - c, LDL - c) đƣợc xác định trên máy xét nghiệm sinh hóa tự động (Phòng hóa sinh - Bệnh viện Hữu nghị Việt - Xô). Nguyên tắc xác định nhƣ sau:
a. Định lƣợng triglycerid
Thuỷ phân triglycerid bằng enzyme lipase, định lƣợng glycerol giải phóng ra bằng phƣơng pháp đo màu của quynonimin tạo thành từ 4 - aminoantipyrin và 4 - chlorophenol phản ứng với peroxide hydrogen theo các phản ứng sau:
Đo mật độ quang học quynonimin ở bƣớc sóng 546nm (máy Olympus AU400) rồi so với chuẩn để tính kết quả.
b. Định lƣợng cholesterol toàn phần
Thuỷ phân cholesterol este bằng enzyme cholesterol esterase (CHE) và oxy hoá bằng cholesterol oxydase (CHO). Đo mật độ quang của quynonimin tạo nên từ phản ứng của hydrogen peroxide với 4-aminophenazone và phenol nhờ xúc tác của peroxydase. Các phản ứng:
Đo mật độ quang của Quynonimin ở bƣớc sóng 546nm (bằng máy Olympus AU400), so với ống chuẩn để tính kết quả.
c. Định lƣợng HDL - c.
Nguyên tắc: xét nghiệm gồm hai bƣớc. Bƣớc thứ nhất cholesterol trong
chylomicron, VLDL, LDL bị loại bỏ và phá hủy bằng các phản ứng enzyme đặc hiệu. Bƣớc thứ hai cholesterol trong HDL đƣợc định lƣợng bằng phản ứng enzyme với sự có mặt của chất surfactant đặc hiệu cho HDL.
Bƣớc 1
Bƣớc 2
