Phổ khối lượng (Mass spectroscopy, MS)

Nguyờn tắc của phương phỏp phổ này là dựa vào sự phõn mảnh ion của phõn tử chất dưới sự bắn phỏ của chựm ion bờn ngoài. Phổ MS cũn cho cỏc pic ion mảnh khỏc mà dựa vào đú người ta cú thể xỏc định được cơ chế phõn mảnh và dựng lại được cấu trỳc hoỏ học cỏc hợp chất. Hiện nay cú rất nhiều loại phổ khối lượng, như những phương phỏp chủ yếu sau:

- Phổ EI-MS (Electron Impact Ionization mass spectroscopy) dựa vào sự phõn mảnh ion dưới tỏc dụng của chựm ion bắn phỏ năng lượng khỏc nhau, phổ biến là 70eV.

- Phổ ESI-MS (Electron Spray Ionization mass spectroscopy) gọi là phổ phun mự điện tử. Phổ này được thực hiện với năng lượng bắn phỏ thấp hơn nhiều so với phổ EI-MS, do đú phổ thu được chủ yếu là pic ion phõn tử và cỏc pớc đặc trưng cho sự phỏ vỡ cỏc liờn kết cú mức năng lượng thấp, dễ bị phỏ vỡ.

- Phổ FAB (Fast Atom Bombing mass spectroscopy) là phổ bắn phỏ nguyờn tử nhanh với sự bắn phỏ nguyờn tử nhanh ở năng lượng thấp, do đú phổ thu được cũng dễ thu được pic ion phõn tử.

- Phổ khối lượng phõn giải cao (High Resolution Mass Spectroscopy), cho phộp xỏc định pic ion phõn tử hoặc ion mảnh với độ chớnh xỏc cao.

- Ngoài ra, hiện nay người ta cũn sử dụng kết hợp cỏc phương phỏp sắc ký kết hợp với khối phổ khỏc như: GC-MS (sắc ký khớ-khối phổ), LC-MS (sắc ký lỏng-khối phổ). Cỏc phương phỏp kết hợp này cũn đặc biệt hữu hiệu khi phõn tớch thành phần của hỗn hợp chất (nhất là phõn tớch thuốc trong ngành dược).

Nguyễn Thị Mai Hương ²² K35C – Khoa Húa học 1.5.3. Phổ cộng hưởng từ hạt nhõn

(Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR).

Phổ cộng hưởng từ hạt nhõn là một phương phỏp phổ hiện đại và hữu hiệu nhất hiện nay. Với việc sử dụng kết hợp cỏc kỹ thuật phổ NMR một chiều và hai chiều, cỏc nhà nghiờn cứu cú thể xỏc định chớnh xỏc cấu trỳc của hợp chất, kể cả cấu trỳc lập thể của phõn tử.

Nguyờn lý chung của cỏc phương phỏp phổ NMR (phổ proton và cacbon) là sự cộng hưởng khỏc nhau của cỏc hạt nhõn từ (1H và ¹³C) dưới tỏc dụng của từ trường ngoài. Sự cộng hưởng khỏc nhau này được biểu diễn bằng độ chuyển dịch hoỏ học (chemical shift). Ngoài ra, đặc trưng của phõn tử cũn được xỏc định dựa vào tương tỏc spin giữa cỏc hạt nhõn từ với nhau (spin coupling).

1.5.3.1. Phổ 1H-NMR:

Trong phổ 1H-NMR, độ chuyển dịch hoỏ học của cỏc proton được xỏc định trong thang ppm từ 0-14ppm, tuỳ thuộc vào mức độ lai hoỏ của nguyờn tử cũng như đặc trưng riờng của từng phần. Dựa vào những đặc trưng của độ chuyển dịch hoỏ học và tương tỏc spin mà ta cú thể xỏc định được cấu trỳc hoỏ học của hợp chất.

1.5.3.2. Phổ 13C-NMR:

Phổ này cho tớn hiệu vạch phổ cacbon. Mỗi nguyờn tử cacbon sẽ cộng hưởng ở một trường khỏc nhau và cho tớn hiệu phổ khỏc nhau. Thang đo của phổ 13C-NMR là ppm, với dải thang đo rộng 0 - 230ppm.

1.5.3.3. Phổ DEPT (Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer):

Phổ này cho ta cỏc tớn hiệu phõn loại cỏc loại cacbon khỏc nhau. Trờn phổ DEPT, tớn hiệu của cỏc cacbon bậc bốn biến mất. Tớn hiệu của CH và CH3 nằm về một phớa và của CH2 về một phớa trờn phổ DEPT 1350. Trờn phổ DEPT 900 chỉ xuất hiện tớn hiệu phổ của cỏc CH.

Nguyễn Thị Mai Hương ²³ K35C – Khoa Húa học 1.5.3.4. Phổ 2D-NMR:

Đõy là cỏc kỹ thuật phổ hai chiều, cho phộp xỏc định cỏc tương tỏc của cỏc hạt nhõn từ của phõn tử trong khụng gian hai chiều. Một số kỹ thuật chủ yếu thường được sử dụng như sau:

- Phổ HSQC (Heteronuclear Single Quantum Coherence): Cỏc tương tỏc trực tiếp H-C được xỏc định nhờ vào cỏc tương tỏc trờn phổ này. Trờn phổ, một trục là phổ 1H-NMR, cũn trục kia là ¹³C-NMR. Cỏc tương tỏc HSQC nằm trờn đỉnh cỏc ụ vuụng trờn phổ.

- Phổ 1H-1H COSY (HOMOCOSY) (1H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy): Phổ này biểu diễn cỏc tương tỏc xa của H-H, chủ yếu là cỏc

proton đớnh với cacbon liền kề nhau. Nhờ phổ này mà cỏc phần của phõn tử được nối ghộp lại với nhau.

- Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity): Đõy là phổ biểu diễn tương tỏc xa trong khụng gian phõn tử. Nhờ vào cỏc tương tỏc trờn phổ này mà từng phần của phõn tử cũng như toàn bộ phõn tử được xỏc định về cấu trỳc.

- Phổ NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy): Phổ này biểu diễn cỏc tương tỏc xa trong khụng gian của cỏc proton khụng kể đến cỏc liờn kết mà chỉ tớnh đến khoảng cỏch nhất định trong khụng gian. Dựa vào kết quả phổ này cú thể xỏc định cấu trỳc khụng gian của phõn tử.

Người ta cũn sử dụng hiệu ứng NOE bằng kỹ thuật phổ NOE differences để xỏc định cấu trỳc khụng gian của phõn tử. Bằng việc đưa vào một xung đỳng bằng từ trường cộng hưởng của một proton xỏc định thỡ cỏc proton cú cựng phớa về khụng gian cũng như gần nhau về khụng gian sẽ cộng hưởng mạnh hơn và cho tớn hiệu với cường độ mạnh hơn.

Ngoài ra, cũn sử dụng phổ X-RAY (nhiễu xạ Rơngen) để xỏc định cấu trỳc khụng gian của toàn bộ phõn tử của hợp chất kết tinh ở dạng đơn tinh thể.

Nguyễn Thị Mai Hương ²⁴ K35C – Khoa Húa học

Nhưng phạm vi sử dụng của nú hạn chế vỡ yờu cầu cần tiờn quyết của phương phỏp này là cần phải cú đơn tinh thể. Đõy là một điều kiện khụng phổ biến đối với cỏc hợp chất hữu cơ.

Như trờn đó đề cập, ngoài việc sử dụng cỏc loại phổ, người cũn sử dụng kết hợp với cỏc chuyển hoỏ hoỏ học cũng như cỏc phương phỏp phõn tớch, so sỏnh kết hợp khỏc. Đặc biệt đối với cỏc phõn tử nhiều mạch nhỏnh dài, tớn hiệu phổ NMR bị chồng lấp nhiều khú xỏc định chớnh xỏc được chiều dài cỏc mạch. Đối với phõn tử cú cỏc đơn vị đường thỡ việc xỏc định chớnh xỏc loại đường cũng như cấu hỡnh đường thụng thường phải sử dụng phương phỏp thuỷ phõn rồi xỏc định bằng phương phỏp so sỏnh LC-MS hoặc GC-MS với cỏc đường chuẩn dự kiến.

Nguyễn Thị Mai Hương ²⁵ K35C – Khoa Húa học

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG THỰC NGHIỆM

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU 2.1. Mẫu thực vật

Mẫu lỏ dõu tằm (Morus alba) được cung cấp bởi PGS.TS Ló Văn Kớnh, Viện Khoa học Kỹ thuật Nụng nghiệp miền Nam.

2.2. Phương phỏp phõn lập cỏc hợp chất.

2.2.1. Sắc ký lớp mỏng (TLC)

Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trờn bản mỏng trỏng sẵn DC-Alufolien

60 F254 (Merck 1,05715), RP18 F254s (Merck). Phỏt hiện chất bằng đốn tử ngoại ở hai bước súng 254 nm và 368 nm hoặc dựng thuốc thử là dung dịch H2SO4

10% được phun đều lờn bản mỏng, sấy khụ rồi hơ núng trờn bếp điện đến khi hiện màu.

2.2.2. Sắc ký lớp mỏng điều chế

Sắc ký lớp mỏng điều chế thực hiện trờn bản mỏng trỏng sẵn Silica gel 60G F254 (Merck, ký hiệu 105875), phỏt hiện vệt chất bằng đốn tử ngoại hai bước súng 254 nm và 368 nm, hoặc cắt rỡa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10%, hơ núng để phỏt hiện vệt chất, ghộp lại bản mỏng như cũ để xỏc định vựng chất, sau đú cạo lớp Silicagel cú chất, giải hấp phụ bằng dung mụi thớch hợp.

2.2.3. Sắc ký cột (CC)

Sắc ký cột được tiến hành với chất hấp phụ là Silica gel pha thường và pha đảo. Silica gel pha thường cú cỡ hạt là 0,040-0,063 mm (240-430 mesh). Silica gel pha đảo ODS hoặc YMC (30-50 m, FuJisilisa Chemical Ltd.).

2.3. Phương phỏp xỏc định cấu trỳc hoỏ học cỏc hợp chất.

2.3.1. Điểm núng chảy (Mp)

Điểm núng chảy được đo trờn mỏy Kofler micro - hotstage của Viện Húa sinh biển.

Nguyễn Thị Mai Hương ²⁶ K35C – Khoa Húa học 2.3.2. Phổ khối lượng (ESI-MS)

Phổ khối lượng phun mự điện tử (Electron Spray Ionization mass spectra) được đo trờn mỏy AGILENT 1100 LC-MSD Trap của Viện Hoỏ học, Viện Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam.

2.3.3. Phổ cộng hưởng từ hạt nhõn (NMR)

Phổ cộng hưởng từ hạt nhõn (NMR): 1H-NMR (500 MHz) và ¹³C- NMR (125 MHz) được đo trờn mỏy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Viện Hoỏ học, Viện Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam.

2.3.4. Độ quay cực []D

Độ quay cực được đo trờn mỏy JASCO DIP-1000 KUY polarimeter của Viện Hoỏ học, Viện Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam.

2.4. Dụng cụ và thiết bị.

2.4.1. Dụng cụ và thiết bị tỏch chiết.

Cỏc dụng cụ và thiết bị dựng cho tỏch chiết và tinh chế chất sạch được sử dụng bao gồm: - Bỡnh chiết 30 lớt - Micropipet - Mỏy cụ quay chõn khụng - Đốn tử ngoại 2 bước súng 254nm và 368 nm - Tủ sấy chõn khụng

- Mỏy sấy, bếp điện

- Bỡnh sắc ký loại phõn tớch và điều chế - Cột sắc ký pha thường cỏc loại đường kớnh - Cột sắc ký pha ngược trung ỏp

Nguyễn Thị Mai Hương ²⁷ K35C – Khoa Húa học 2.4.2. Dụng cụ và thiết bị xỏc định cấu trỳc.

- Mỏy phổ cộng hưởng từ hạt nhõn NMR AM500 FT-NMR spectrometer. - Mỏy sắc ký lỏng cao ỏp ghộp nối phổ (ESI) AGILENT 1100 LC-MSD Trap spectrometer.

- Thiết bị đo điểm núng chảy Kofler micro-hotstage. - Thiết bị đo độ quay cực JASCO.

2.5. Hoỏ chất.

- Silica gel 60 (0,04-0,063mm) Merck.

- Silica gel pha đảo ODS hoặc YMS (30-50 m, Fujisilica Chemical Ltd). - Bản mỏng trỏng sẵn pha thường DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1.05715). - Bản mỏng trỏng sẵn pha ngược RP18 F254s (Merck).

- Bản mỏng điều chế pha thường DC-Alufolien 60 F254 (Merck).

- Cỏc loại dung mụi hữu cơ như methanol, etanol, ethyl acetate, chlorofrom, hexane, acetone,... là loại hoỏ chất tinh khiết của Merck.

Nguyễn Thị Mai Hương ²⁸ K35C – Khoa Húa học

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1. Chiết phõn đoạn và phõn lập cỏc hợp chất

3.1.1. Xử lý mẫu

Mẫu lỏ dõu tằm (Morus alba) 3,0 kg tươi được phơi khụ, sau đú sấy bằng tủ sấy ở nhiệt độ 500C và được nghiền thành bột thu được 1,2 kg bột khụ.

3.1.2. Chiết tỏch và phõn lập cỏc hợp chất

Mẫu bột khụ (1,2 kg) được ngõm chiết với metanol (MeOH) 3 lần, sau đú gộp cỏc dịch chiết lại, loại dung mụi dưới ỏp suất thấp thu được 250g cặn chiết MeOH. Cặn chiết này được phõn bố vào 1 lớt nước cất rồi bổ sung cloroform (CHCl3) (3 lần), lắc đều, để phõn lớp qua đờm. Cất loại CHCl3

bằng mỏy cất quay chõn khụng thu được phõn đoạn cặn CHCl3 (50g). Phần nước cũn lại tiếp tục bổ sung etyl axetat (EtOAc) (3 lần), lắc đều rồi để phõn lớp qua đờm. Cất loại EtOAc thu được phõn đoạn cặn EtOAc (20g).

Nguyễn Thị Mai Hương ²⁹ K35C – Khoa Húa học

Sơ đồ 1: Sơ đồ chiết phõn đoạn dịch chiết metanol từ lỏ dõu tằm (Morus alba).

Phõn đoạn CHCl3 được hũa tan thờm khoảng 80g silica gel, trộn đều, cất loại dung mụi cho đến khi thu được bột tơi, khụ. Hỗn hợp này được tiến hành sắc ký cột nhồi, silica gel pha thường cỡ hạt 230- 400 mesh (0,04 – 0,063 mm), rửa giải bằng hệ dung mụi hexane : acetone với độ phõn cực tăng dần từ 40:1 – 1:1 (theo thể tớch,v/v) thu được 4 phõn đoạn chớnh là F1 (12,0g), F2 (8,5g), F3(15,0g) và F4 (16,0g).

Phõn đoạn F2 được hũa tan bằng CHCl3, bổ sung silica gel tỷ lệ 1:2 rồi đưa lờn cột sắc ký pha thường với hệ dung mụi rửa giải cloroform : acetone tỷ lệ 12:1 (theo thể tớch, v/v) thu được 3 phõn đoạn tương ứng F2A, F2B, F2C. Khi tiến hành tinh chế phõn đoạn F2A trờn cột sắc ký pha thường với hệ dung

Bột lỏ khụ ( 1,2 kg ) Chiết MeOH Cặn MeOH (250g) Bổ sung nước Cloroform:nước 1/1 Cặn CHCl3 (50g) Lớp nước

Bổ sung etyl axetat Lớp nước

Cặn EtOAc ( 20g )

Lớp nước Etyl axetat:nước 1/1

Nguyễn Thị Mai Hương ³⁰ K35C – Khoa Húa học

mụi rửa giải cloroform : etyl axetat tỷ lệ 12:1 (theo thể tớch, v/v) thu được

hợp chất (1).

Phõn đoạn F2C được hũa tan với lượng tối thiểu dung mụi chạy cột rồi đưa lờn cột sắc ký pha đảo với hệ dung mụi rửa giải metanol : nước tỷ lệ 5:1 (theo thể tớch, v/v). Sau khi để qua đờm thấy xuất hiện kết tinh, lọc rửa kết tinh bằng metanol rồi tiến hành kết tinh lại trong metanol thu được hợp chất (2).

Sơ đồ 2: Sơ đồ phõn lập phõn đoạn cloroform từ lỏ dõu tằm .

F1 ( 12,0g) F2 (8,5g) F3 ( 15,0g) F4 ( 16,0g)

Hexane:acetone 40:1 Hexane:acetone 15:1 Hexane:acetone 1:1 Hexane:acetone 1:1 Phõn đoạn F2A Phõn đoạn F2B Phõn đoạn F2C Hợp chất 1 (4mg) Hợp chất 2 ( 8mg) Sắc ký pha thường Cloroform:acetone 12:1 Sắc ký pha thường Cloroform:etyl axetat 12:1 Sắc ký pha đảo Metanol:nước 5:1

Kết tinh lại trong Metanol Phõn đoạn CHCl3

Nguyễn Thị Mai Hương ³¹ K35C – Khoa Húa học 3.2. Hằng số vật lý và dữ liệu phổ của cỏc hợp chất. 3.2.1. Hợp chất 1 - Sanggenon J. Dạng bột màu vàng, C30H32O6 , M= 488 1H-NMR ( 500 MHz, DMSO) (ppm): 6.85 (brs, 1H, C-3); 6.22 (brs, 1H, C-6); 6.87 (d, J=10.0 , 1H, C-9); 5.79 (d, J=10.0 , 1H, C-10); 1.44 (s, 6H, C-10); 7.96 (d, J= 9.0 , 2H, C-2’, 6’); 6.92 (d, J=8.5 , 2H, C-3’, 5’) 13C-NMR (125 MHz, DMSO) (ppm): 163.75 (C-2); 102.90 (C-3); 181.96( C-4); 104.53 (C-4a); 161.37 (C-5); 99.25 (C-6); 158.63 (C-7); 100.99 (C-8); 151.20 (C-8a); 114.30 (C-9); 128.04 (C-10); 22.70 (C-12); 120.94 (C- 1’); 128.54 (C-2’, 6’); 116.04 (C-3’, 5’); 160.86 (C-4’). 3.2.2. Hợp chất 2- Atalantoflavone. Dạng bột màu vàng nhạt, C20H16O5, M=336. 1H-NMR (500 MHz, DMSO) (ppm): 6.19 (d, J=2,0 ,1H, C-6); 6.28 (d, J=2,0 , 1H, C-8); 2.97 (brd, J=6.5, 2H, C-11); 5.01 (t, J=7.0 , 1H, C-12); 1.53 (brs, 3H, C-14); 1.31 (brs, 3H, C-15); 6.40 (d, J=8.0 ,1H, C-5’); 7.02 (d, J=8.0 ,1H, C-6’); 6.74 (d, J=10.0 , 1H, C-1” ); 5.71 (d, J=10.0 , 1H, C-2”); 1.68 (m, 2H, C-4”); 2.07 (q, J=15.5 , 8.0 , 2H, C-5”); 1.62 (brs, 3H, C-8”); 1.53 (brs, 3H, C-9”); 1.35 (brs, 3H, C-10”). 13C-NMR (125 MHz, DMSO) (ppm): 160.79 (C-2); 120.23 (C-3); 181.59 (C-4); 157.86 (C-5); 98.35 (C-6); 163.99 (C-7); 93.38 (C-8); 161.42 (C-9); 103.64 (C-10); 23.76 (C-11); 121.27 (C-12); 131.11 (C-13); 25.37 (C- 14); 17.7 (C-15); 113.30 (C-1’); 150.49 (C-2’); 109.90 (C-3’); 155.31 (C- 4’); 107.66 (C-5’); 130.06 ( C-6’); 116.89 ( C-1”); 128.24 (C-2”); 78.15 (C-3”); 40.34 (C-4”); 22.14 (C-5”); 123.90 (C-6”); 130.91 (C-7”); 25.37 (C-8”); 17.38 (C-9”); 25.92 (C-10”).

Nguyễn Thị Mai Hương ³² K35C – Khoa Húa học

CHƯƠNG 4: THẢO LUẬN KẾT QUẢ

4.1. Xỏc định cấu trỳc húa học của hợp chất 1 ( Sanggenon J )

Hợp chất 1 thu được dưới bột màu vàng. Kết quả phõn tớch phổ 1H, ¹³C và DEPT cho thấy đõy là một hợp chất dạng flavonoid. Trờn phổ ¹H xuất hiện 5 nhúm metyl tại tớn hiệu cộng hưởng δ: 1.31 (3H, brs), 1.35 (3H, brs), 1.53 (6H, brs), 1.62 (3H, brs). Sự chuyển dịch về phớa trường yếu của cỏc tớn hiệu này gợi ý sự liờn kết với nối đụi. Bờn cạnh đú trờn phổ proton cũng xuất hiện 4 tớn hiệu proton vũng thơm với 2 tớn hiệu ở vị trớ 6 và 8 của vũng A tại δ 6.19 (1H, d, J = 2.0 Hz), 6.28 (1H, d, J = 2.0 Hz) và 2 tớn hiệu proton thơm của vũng C tại δ: 6.40 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.02 (1H, d, J = 8.0 Hz). Ngoài ra cũn quan sỏt thấy 2 tớn hiệu nối đụi trong vũng cú cấu hỡnh trans do sự

chuyển dịch của tớn hiệu về phớa trường yếu δ: 5.71 (1H, d, J = 10.0 Hz), 6.74 (1H, d, J = 10.0 Hz) và 2 tớn hiệu proton olefin khỏc tại δ: 5.01 (1H, t, J = 7.0 Hz), 5.08 (1H, t, J = 7.0 Hz).

Nguyễn Thị Mai Hương ³³ K35C – Khoa Húa học

Kết quả phõn tớch phổ cacbon 13Cvà DEPT cho thấy 30 tớn hiệu cacbon với 5 tớn hiệu của nhúm metyl bậc 4, 8 tớn hiệu cacbon metyl, 3 tớn hiệu cacbon metylen và 14 tớn hiệu cacbon bậc 4 với một tớn hiệu cacbon đớnh với nhúm oxi tại δC 78.15.

Hỡnh 4.1.b:Phổ cacbon ¹³C của hợp chất 1

Nguyễn Thị Mai Hương ³⁴ K35C – Khoa Húa học

Cỏc số liệu proton được gắn với tớn hiệu cacbon tương ứng dựa vào kết quả phõn tớch phổ 2 chiều HSQC (bảng số liệu)

Hỡnh 4.1.d: Phổ 2 chiều HSQC của hợp chất 1

Từ số liệu phổ thu được kết hợp so sỏnh với cỏc hợp chất đó thu được phõn lập mẫu dõu tằm cho thấy phự hợp với hợp chất Sanggenon J. Tuy nhiờn, cho đến nay vẫn chưa cú số liệu phổ đầy đủ của hợp chất này. Để làm sỏng tỏ cấu trỳc húa học của hợp chất 1, chỳng tụi kết hợp so sỏnh số liệu phổ của hợp chất 1 với 2 hợp chất cú cấu trỳc phự hợp là 3’-geranyl-3-prenyl- 2’,4’,5,7-tetrahydroxyflavone [1] (phần vũng A,B) và lespeol [2].

Vị trớ liờn kết được dựa trờn kết quả phõn tớch phổ 2 chiều HMBC. Trờn phổ 2 chiều nhận thấy tương tỏc của proton nhúm metilen 2.97 (2H, brd, J = 6.5 Hz, H-11) với cỏc tớn hiệu cacbon C-2(C, 160.79), C-4 (C, 181.59), C- 12(CH, 121.27), C-13(C, 131.11). Điều này cho phộp xỏc định nhúm prenyl tạo liờn kết với cacbon C-3 (120.2).

Nhỏnh cũn lại được xỏc định tạo liờn kết với cacbon bậc bốn liờn kết với 1 nguyờn tử Oxi do cú tương tỏc của proton nhúm metilen 2.07 (2H, q, J = 15.5, 8.0 Hz, H-5’’) với cỏc tớn hiệu cacbon C-3’’(C, 78.15), C-4’’ (CH2, 40.34), C-6’’(CH, 123.90), C-7’’(C, 130.91). Tại vị trớ cacbon bậc 4,

Nguyễn Thị Mai Hương ³⁵ K35C – Khoa Húa học

C-3’’(80.150) cũn xỏc định sự cú mặt của một nhúm metyl dựa vào tương tỏc của proton nhúm metyl này 1.35 (3H, brs, H-10’’) với cỏc tớn hiệu cacbon C-2’’ (CH, 128.24), C-3’’ (C, 78.15) và C-4’’(CH2, 40.34). Cỏc tương tỏc HMBC khỏc được biểu diễn theo hỡnh 4.1.e.