Có nhiều phương pháp chẩn ựoán Tiên mao trùng trong phòng thắ nghiệm, mục ựắch là phát hiện Tiên mao trùng trong máu gia súc. Tùy từng trường hợp bệnh, tuỳ ựiều kiện mà có thể làm cùng lúc một số phương pháp hoặc lựa chọn một phương pháp phù hợp và có ựộ chắnh xác cao.
1.8.2.1. Phương pháp phát hiện Tiên mao trùng trực tiếp
- Phương pháp xem tươi (Direct smear). Khi sốt, trong mao quản ngoại vi của gia súc mắc bệnh Tiên mao trùng thường có T. evansi. Vì vậy, trường hợp này nên lấy máu vùng ngoại vi ựể xem tươi.
- Phương pháp nhuộm Giemsa tiêu bản máu khô (Romanovsky) Phương pháp giọt dầy.
Phương pháp giọt mỏng.
Phương pháp làm tan hồng cầu.
1.8.2.2. Phương pháp tập trung Tiên mao trùng
- Phương pháp ly tâm tập trung bằng ống Haematocrit (1971 ) Phương pháp này ựơn giản, phát hiện Tiên mao trùng tốt hơn phương pháp xem tươi và nhuộm Giemsa. Song, tỷ lệ phát hiện chưa cao.
Với ống Haematocrit trên, có thể thực hiện phương pháp Darkground. - Phương pháp tách Tiên mao trùng bằng tiền DEAE - cellulose (Diethyl - Anomino Ethyl - cellulose). Bằng phương pháp này, có thể tách ựược trên 96% Tiên mao trùng (Lumsden và cs, 1979).
1.8.2.3. Phương pháp tiêm truyền ựộng vật thắ nghiệm
Lê Ngọc Mỹ (1994), đoàn Văn Phúc (1994), ựây là phương pháp phổ biến, hiệu quả, chắnh xác và thường ựược sử dụng nhiều ựể chẩn ựoán bệnh Tiên mao trùng ở Việt Nam. Phương pháp này có ưu ựiểm là chắnh xác, do trực tiếp phát hiện thấy Tiên mao trùng sau khi nhân chúng lên trong ựộng vật thắ nghiệm mẫn cảm. Song, nhược ựiểm của phương pháp tiêm truyền ựộng vật thắ nghiệm là khi cần chẩn ựoán nhanh, với số lượng nhiều và thời gian
ngắn thì phương pháp này không thể ựáp ứng ựược
1.8.2.4. Phương pháp chẩn ựoán huyết thanh học
Bằng phương pháp huyết thanh học, có thể phát hiện kháng thể hoặc kháng nguyên Tiên mao trùng. đây là các phương pháp huyết thanh học ựặc hiệu.
* Các phương pháp phát hiện kháng thể kháng Tiên mao trùng
- Phương pháp ngưng kết trên phiến kắnh (SAT: Slice Agglutination Test)
- Phương pháp này ựơn giản, dễ làm và có thể áp dụng trên diện rộng. - Phương pháp LATEX (Latex Agglutination Test)
LATEX là phương pháp ngưng kết gián tiếp, ựược dùng ựể phát hiện kháng thể lưu ựộng có trong máu của gia súc mắc bệnh tiên mao trùng.
Phương pháp này có thể ứng dụng ựể chẩn ựoán nhanh, số lượng nhiều, tỷ lệ phát hiện cao. Tuy nhiên, nhược ựiểm của phương pháp này là có thể có phản ứng giả khi pha loãng huyết thanh ở nồng ựộ thấp 1/2, 1/4 và dương tắnh cả khi con vật khỏi bệnh nhưng vẫn còn kháng thể tồn tại trong huyết thanh. Mặt khác, phải nhập kháng nguyên của nước ngoài nên giá thành rất cao.
- Phương pháp CATT (Cam Agglutination Test for Trypanosomiasis) Theo Lương Tố Thu và cs (1996), phương pháp CATT dễ sử dụng, có ựộ nhậy cao gần gấp ựôi phương pháp tiêm truyền chuột nhắt trắng (73,75% so với 40%).
- Phương pháp kháng thể huỳnh quang gián tiếp IFAT (Indirect Fluorescent Antibody Test)
Phản ứng này là phản ứng huyết thanh học ựặc hiệu có ựộ nhạy cao, ựược ứng dụng rộng rãi trong phòng thắ nghiệm và thực ựịa. Ngoài việc ựược dùng làm phản ứng chuẩn ựể so sánh với các phương pháp huyết thanh khác, phương pháp IFAT còn ựược dùng trong nghiên cứu cấu trúc của kháng nguyên Tiên mao trùng (Luckins, 1988; Davison, 1999).
ựã chế tạo conjugate huỳnh quang trên thỏ kháng IgG của bò ựể chẩn ựoán bệnh Tiên mao trùng. độ pha loãng của conjugate tự chế sử dụng cho phản ứng là 1/8 và huyết thanh chuẩn pha loãng ớ 1/40. Theo Lương Tố Thu và Lê Ngọc Mỹ (1996), ựộ nhậy của phương pháp IFAT là 71,25%, trong khi phương pháp tiêm truyền chuột nhắt trắng là 40%.
- Phương pháp ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay)
Phương pháp ELISA là một trong những phương pháp hiện ựại nhất ựược ứng dụng ựể chẩn ựoán bệnh tiên mao trùng.
Phương pháp ELISA hiện dang ựược sử dụng rộng rãi ở các nước trên thế giới. Ở Việt Nam, Lê Ngọc Mỹ và cs (1994) ựã bước ựầu chế kháng nguyên Tiên mao trùng và ứng dụng ựể chẩn ựoán bệnh Tiên mao trùng ở nước ta.
* Các phương pháp phát hiện kháng nguyên Tiên mao trùng
- Phương pháp ELISA kháng nguyên (Ag - ELISA)
Lê Ngọc Mỹ và cs (1994) ựã bước ựầu ứng dụng phương pháp này ựể chẩn ựoán bệnh Tiên mao trùng ở Việt Nam. Tuy nhiên, theo cơ quan năng lượng nguyên tử thế giới (IAEA) (1997), phương pháp ELISA kháng nguyên có ựộ nhậy kém hơn so với các phương pháp phát hiện Tiên mao trùng cổ ựiển. Vì vậy, phương pháp này ựã không ựược phổ biến trong thời gian hiện tại và tương lai (IAEA ựã không sản xuất ựĩa Ag - ELISA cho nhiều nước trên thế giới).
- Phản ứng Suratex
Phản ứng Suratex là phản ứng ngưng kết giữa các hạt latex ựược gắn kháng thể ựơn dòng với kháng nguyên lưu ựộng trong máu ựộng vật nhiễm Tiên mao trùng (Nantulya, 1994). Phản ứng này hiện ựang ựược thử nghiệm và ựánh giá ở thực ựịa.
1.8.2.5. Phương pháp phát hiện ADN của Tiên mao trùng bằng phản ứng PCR (Polymerase Reaction)
chẩn ựoánbệnh Tiên mao trùng trong những năm gần ựầy.
Mullis và cs (1986) ựã thiết lập qui trình phản ứng ựể ứng dụng chẩn ựoán bệnh Tiên mao trùng. Sau ựó, Desquesnes (1996, 2002), Masake (1997) ựã ứng dụng phản ứng PCR ựể chẩn ựoán bệnh T. evansi ở bò, Almeida (1998) ựã ứng dụng chẩn ựoán bệnh Tiên mao trùng ở dê.
Phương pháp PCR có ựộ nhậy và ựộ chắnh xác rất cao. Tuy nhiên, phương pháp này ựòi hỏi phải có trình ựộ kỹ thuật cao, trang thiết bị hiện ựại nên hiện nay mới ựang ựược thử nghiệm tại một số phòng thắ nghiệm hiện ựại.