M Ở ðẦ U
2.3.2 Phương phỏp cường hoỏ Artemia
Artemia loại Red Top (Mỹ sản xuất ký hiệu O.S. I) ủược ấp nở theo hướng dẫn của nhà sản xuất, thời gian ấp khoảng 24h tất cả trứng ủó nở thành nauplius tuỳ thuộc vào nhiệt ủộ nước mà trứng cú thể nở sớm hơn hoặc muộn hơn. Trước khi lọc chỳng ta phải kiểm tra trứng ủó nở hết khi ủú mới lọc nhằm hạn chế ủược những trứng chưa nở hết sẽ hao hụt về số lượng mà ấu trựng nauplius mà chỳng ta cần. Sau khi kiểm tra trứng ủó nở hết ta tiến hành xử lý bằng formaline với nồng ủộ 100-150cc trong khoảng thời gian 10-15 phỳt nhằm loại bỏ mầm bệnh, sau ủú tắt sục khớ ủể khoảng 15-20 phỳt cho vỏ nổi lờn cũn những trứng bị ung chỡm xuống dưới dựng ống tio lọc qua tỳi lọc artemia sau ủú ủem rửa sạch bằng nước ngọt khi ủó rửa sạch cho vào xụ ủó ủược chuẩn bị sẵn dung dịch cường hoỏ (làm giàu). Nước ấp artemia và làm giàu là nước mặn (nước nuụi ấu trựng) cho ăn giai ủoạn từ Zoae 3 ủến giai ủoạn cua bột (cua 1)
2.4. Phương phỏp xỏc ủịnh cỏc yếu tố mụi trường trong quỏ trỡnh thớ nghiệm.
- Phõn tớch cỏc thụng số mụi trường như: N-NO2-; N-NO3-; N-NH4 +; pH thu mẫu nước ủầu và cuối thớ nghiệm ủem phõn tớch tại Trạm kiểm dịch ủộng vật Thuỷ sản thuộc Chi Cục Bảo Vệ Nguồn Lợi Thuỷ sản Thanh Hoỏ.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………27
- ðo nhiệt ủộ bằng nhiệt kế thuỷ ngõn, ủo vào 8h sỏng lỳc và 15h chiều. - ðo ủộ mặn bằng mỏy ủo khỳc xạ kế (Salinity hóng Nhật Bản sản xuất) cú ủộ chớnh xỏc 1‰
2.5 Phương phỏp xử lý số liệu.
Cụng thức tớnh tỷ lệ sống của ấu trựng cua xanh.
Tổng số ấu trựng sống Tỷ lệ sống (%) = x 100
Tổng số ấu trựng ủưa vào thớ nghiệm
Số liệu ủược mó hoỏ, xử lý theo phương phỏp thống kờ sinh học và dựa vào phần mềm Excel 2003 ủể tớnh cỏc giỏ trị trung bỡnh, ủộ lệch chuẩn và vẽ ủồ thị. Phõn tớch phương sai 1 nhõn tố (ANOVA-Single Factor) và LSD0.05
(Least Significant Diffrence-dấu hiệu sai khỏc nhỏ nhất) ủược sử dụng ủể xỏc ủịnh mức ủộ sai khỏc của yếu tố tỷ lệ sống và cỏc chỉ số thời gian lột xỏc biến thỏi của cỏc cụng thức thớ nghiệm. Cỏc thống kờ ủược sử dụng với mức ủộ tin cậy 95% (α = 0,05). Ấu trựng giai ủoạn Zoae Ấu trựng giai ủoạn Megalope Giai ủoạn Zoae 1– Zoae 2 Sử dụng Rotifer Giai ủoạn Zoae 3–Zoae 5 Sử dụng Artemia Sử dụng vỏ sũ và lưới làm giỏ thể Sử dụng vỏ sũ làm giỏ thể CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT4 CT5 - Xỏc ủịnh tỷ lệ sống (%)
- Xỏc ủịnh thời gian chuyển giai ủoạn (ngày)
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………28
Sơủồ 1: Bố trớ thớ nghiệm cho ăn bằng cỏc loại thức ăn khỏc nhau ở cỏc giai ủoạn khỏc nhau.
Ghi chỳ: + Ở giai ủoạn Zoae 1 và Zoae 2:
CT1: Rotifer ủó ủược cường hoỏ sau 18h CT2: Rotifer chưa ủược cường hoỏ
CT3: Artemia dạng bung dự (artemia loại Cần Thơ sản xuất)
+ Ở giai ủoạn Zoae 3 – giai ủoạn Megalope:
CT4: Artemia (loại Mỹ sản xuất) ủó ủược cường hoỏ sau 18h CT5: Artemia (loại Mỹ sản xuất) chưa ủược cường hoỏ
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………29
CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIấN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3. 1 Một số yếu tố mụi trường của hệ thống thớ nghiệm:
Hệ thống cỏc bể thớ nghiệm này ủược ủặt trong phũng nờn ớt chịu ảnh hưởng của cỏc yếu tố ngoại cảnh (trừ yếu tố nhiệt ủộ giao ủộng) và chế ủộ chăm súc quản lý là như nhau do vậy việc theo dừi cỏc yếu tố mụi trường ủược thu tại thời ủiểm ủầu và cuối thớ nghiệm (ngoại trừ yếu tố nhiệt ủộ thay ủổi theo ngày ủờm).
Bảng 3.1 Cỏc yếu tố mụi trường trong hệ thống bể thớ nghiệm
Yếu tố mụi trường Giỏ trị Hệ thống bể thớ nghiệm
ToC TB Min – Max 27.42±1.08 25.5 –29 N-NO2- TB Min – Max 0.009±0.008 0.001– 0.025 N-NO3- TB Min - Max 0.84±0.086 0.01 – 0.215 N-NH4+ TB Min - Max 0.042±0.0042 0.002 – 0.098 pH TB Min - Max 8.154±0.247 7.8 – 8.5 • Nhiệt ủộ:
Mụi trường nước ương nuụi ấu trựng trong hệ thống thớ nghiệm cú nhiệt ủộ biến ủộng trong khoảng 25.5 – 290 C, nhiệt ủộ chờnh lệch giữa buổi sỏng và buổi chiều, khoảng 10C (Phụ lục 1). Nhiệt ủộ trong ương nuụi ấu trựng cua xanh giao ủộng từ 26 – 310C (Nguyễn Cơ Thạch, 2001), cũng như Cheng, H.C; Jeng. K.H, 1980 thỡ nhiệt ủộ nước ủược coi là thớch hợp ủể ương nuụi ấu trựng cua Xanh, nhưng nhiệt ủộ nước cần ủược duy trỡ trong ương nuụi ủại trà ấu trựng cua Xanh là 270C (Heasman.M.P và Filder, D.R, 1983). Tuy vậy
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………30
trong thớ nghiệm từ giai ủoạn Zoae 5 – Megalope thỡ nhiệt ủộ cú ngày xuống tới 25.50C nhưng thời gian khụng bị kộo dài (chỉ 12 giờ) nờn cũng khụng ảnh hưởng ủến sức khoẻ của ấu trựng cua Xanh trong việc ương nuụi[6],[16],[17].
• pH:
Giỏ trị pH trong hệ thống thớ nghiệm biến ủộng từ 7.8 – 8.5. Sự biến ủộng của pH nằm trong khoảng thớch hợp cho sự phỏt triển của ấu trựng cua Xanh (Cheng. HC; Jeng. K. H,1980). Cũng theo Nguyễn Cơ Thạch, 2001 thỡ yếu tố pH nằm trong khoảng 7.5 – 8.6 ủược coi là thớch hợp cho sự sinh trưởng và phỏt triển ấu trựng cua Xanh [6],[16].
• N-NH4: ðược hỡnh thành từ quỏ trỡnh phõn huỷ prụtờin trong vật chất hữu cơ bởi sinh vật ở ủiều kiện cú oxy và khụng cú oxy. Amonia trong nước tồn ở 2 dạng ủú là NH4+ và NH3+ tuỳ thuộc vào yếu tố pH của mụi trường, trong ủú cú NH3 là ở dạng gõy ủộc. ðối với ủộng vật thuỷ sản NH3 cú tớnh ủộc cao hơn NH4 từ 300-400 lần. Vậy hàm lượng N-NH4 trong cỏc lụ thớ nghiệm dao ủộng trong khoảng 0.002-0.098 khụng gõy ảnh hưởng ủến sinh trưởng và phỏt triển của ấu trung cua Xanh [6].
• N-NO2: Nitit ủược sinh ra do sự chuyển hoỏ từ NH4+ sang NO2- dưới tỏc dụng của vi khuẩn cố ủịnh nitrit (Nitrosomonas) với sự cú mặt của oxy. Qua kết quả phõn tớch mẫu ở cỏc lụ thớ nghiệm hàm lượng N-NO2 cú giỏ trị thấp nhất là 0.001 mg/l ở ủầu của cỏc thớ nghiệm và giỏ trị cao nhất là 0.025 ở lụ thớ nghiệm 6 (giai ủoạn Me-Cua ở CT4). Theo Nguyễn Cơ Thạch, 2001 thỡ hàm lượng NO2 thớch hượp ủể ương nuụi ấu trựng Zoae và Megalope dao ủộng từ 0.01-0.1, hàm lượng từ 0.01-0.05 ở giai ủoạn cua bột. Vậy hàm lượng NO2 nằm trong khoảng 0.001-0.025 khụng gõy anh hưởng tới sinh trưởng và phỏt triển của ấu trựng cua.
• N-NO3: Là sản phẩm cuối cựng của sự vụ cơ hoỏ cỏc chất hữu cơ cú chứa nitơ. Nitrit khụng bền dưới tỏc dụng của vi khuẩn Nitrobacter với sự cú
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………31
mặt của oxy chỳng bị oxy hoỏ thành NO3- và nú ủược coi là yếu tố ớt gõy ủộc ủối với ủộng vật thuỷ sản. Trong mẫu phõn tớch hàm lượng NO3 dao ủộng trong khoảng từ 0.01 ở ủầu cỏc lụ thớ nghiệm và cao nhất ở lụ thớ nghiệm 6 (giai ủoạn Me-Cua ở CT4) là 0.215 nằm trong khoảng thớch nghi của ấu trung cua Xanh [6],[16],[17].
3.2 Ảnh hưởng của thức ăn ủến tỷ lệ sống ấu trựng cua Xanh (Sylla serrata)
3.2.1 Ảnh hưởng ủến tỷ lệ sống ở giai ủoạn Zoae 1 và Zoae 2.
Bảng 3.2 Tỷ lệ sống(%) của ấu trựng giai ủoạn Z 1 và Z 2
Cụng thức thức ăn
Giai đoạn ấu trùng
CT 1 CT 2 CT 3
Giai ủoạn (Zoae1 – Zoae2) 71.3±1.1a 62.4 ± 5.9a 66.23±0.9a Giai ủoạn (Zoae2 – Zoae3) 74.3±1.5a 68.1±1.8b 71.8±1.3b
(Số liệu ở cựng hàng cú số mũ khỏc nhau là sai khỏc nhau ở mức ý nghĩa α =0.05)
Từ kết quả bảng 3.2 và hỡnh 3.1 cho thấy tỷ lệ sống trung bỡnh của ấu trựng cua Xanh ủến thời ủiểm kết thỳc thớ nghiệm giai ủoạn Zoae1-Zoae2 ở cụng thức 1 ủạt kết quả cao nhất là 71.3±1.15 (%), tiếp ủến là cụng thức 3 ủạt 66.233±0.97 (%) và thấp nhất là cụng thức 2 ủạt 62.4 ± 5.98 (%). Từ kết quả trờn chỳng ta khẳng ủịnh rằng trong cựng 1 giai ủoạn phỏt triển thức ăn cú chất lượng khỏc nhau cho kết quả tỷ lệ sống khỏc nhau như ở thớ nghiệm này khi chỳng tụi sử dụng rotifer làm thức ăn cho ấu trựng Zoae1 nhưng 1 lụ chỳng tụi bổ sung thờm hàm lượng dinh dưỡng bằng cỏch cường hoỏ chỳng ở cụng thức 1 (làm giàu) thỡ cho kết quả là tỷ lệ sống trung bỡnh ủạt cao hơn (71.3±1.15 %), cũn lụ kia chỳng tụi sử dụng rotifer khụng ủược bổ sung hàm
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………32
lượng dinh dưỡng từ bờn ngoài ở cụng thức 2 vào cho kết quả thấp hơn (62.4 ± 5.98 %). ở cụng thức 3 chỳng tụi sử dụng là artemia ủang ở dạng bung dự thỡ cũng cho kết quả là tỷ lệ sống ủạt (66.233±0.97 %). Theo tỏc giả Nguyễn Cơ Thạch, 2001 trong cựng một giai ủoạn phỏt triển của ấu trựng khi sử dụng thức ăn khỏc nhau cho tỷ lệ sống khỏc nhau như ở Zoae1 sử dụng thức ăn là Brachionus cho tỷ lệ sống ủạt 62.75% trong khi sử dụng thức ăn là artemia thỡ tỷ lệ sống chỉ ủạt 43.95% (Nguyễn Cơ Thach và ctv, 2001). Tuy nhiờn kết quả phõn tớch ANOVA và LSD0.05 cho thấy sự sai khỏc nhau khụng cú ý nghĩa về mặt thống kờ (p>0.05) giữa cỏc cụng thức thớ nghiệm.
+ Giai ủoạn Zoae2-Zoae3: Từ kết quả ở bảng 3.2 và hỡnh 3.1 cho thấy tỷ lệ sống của ấu trựng Zoae2-Zoae3 khi kết thỳc thớ nghiệm trung bỡnh ủạt cao nhất ở cụng thức 1 là 74.3±1.5 (%), tiếp theo là cụng thức 3 ủạt 71.8±1.3(%) và tỷ lệ sống trung bỡnh ủạt thấp nhất ở cụng thức 2 là 68.1±1.8. Kết quả phõn tớch ANOVA và LSD0.05 cho thấy sự sai khỏc nhau về trung bỡnh tỷ lệ sống (%) cú ý nghĩa về mặt thống kờ (p<0.05) giữa cụng thức 1 so với cụng thức 2 và cụng thức 3 , giữa cụng thức 2 và cụng thức 3 khụng thấy cú sự sai khỏc về mặt thống kờ (p>0.05).
Theo ủỏnh giỏ của chỳng tụi trong quỏ trỡnh tiến hành thớ nghiệm ở cụng thức 2 tỷ lệ sống thấp là do sử dụng thức ăn là rụtifer chưa ủược làm giàu nờn hàm lượng dinh dưỡng chưa ủỏp ứng ủược nhu cầu cần thiết ủể ấu trựng cua Xanh sử dụng dẫn ủến khụng tớch luỹ ủầy ủủ chất dinh dưỡng cần thiết cho quỏ trỡnh hỡnh thành nờn vỏ giỏp, làm ngừng trệ quỏ trỡnh sinh trưởng và phỏt triển do vậy ảnh hưởng ủến tỷ lệ sống [5], [6], tiếp theo là cụng thức 3 khi chỳng tụi sử dụng artemia (Cần Thơ sản xuất) ủang ở dạng bung dự cho kết quả tỷ lệ sống tương ủương, cũn ở CT1 thỡ tỷ lệ sống cao hơn cỏc cụng thức 2 và công thức 3 là do thức ăn ủược làm giàu ủể bổ sung nguồn dinh dưỡng do ủú tỷ lệ sống cao nhất.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………33
Túm lại trong quỏ trỡnh thớ nghiệm việc sử dụng rotifer (CT1) đ−ợc làm giàu bằng cách c−ờng hoá cho tỷ lệ sống đạt cao hơn CT2. nh−ng khi sử dụng rotifer làm thức ăn ở giai ủoạn ấu trựng Zoae1 và Zoae2 rất dễ gõy ra những bệnh như bệnh phỏt sỏng, một số bệnh ký sinh trựng và bệnh nấm những bệnh này thường xõm nhập vào theo thức ăn nếu chỳng ta khụng xử lý tốt ngay từ ban ủầu vỡ ấu trựng ở giai ủoạn Zoae rất dễ mẫn cảm với cỏc tỏc nhõn gõy bệnh (Trần Thế Mưu, 2006, Luận văn thạc sỹ nụng nghiệp), nhất là bệnh phỏt sỏng thường làm ấu trựng chết tới 60 – 70 % (Nguyễn Cơ Thạch, 2001) [6],[8]. 71.3 62.4 66.2 74.3 68.2 71.8 55 60 65 70 75 Z1 Z2 CT1 CT2 CT3
Hỡnh 3.1 Tỷ lệ sống(%) của ấu trựng giai ủoạn Zoae1 và Zoae2 ở cỏc cụng thức thức ăn.
3.2.2 Ảnh hưởng ủến tỷ lệ sống ở giai ủoạn Zoae 3 – Cua (bột).
3.2.2.1 Giai ủoạn Zoae3-Zoae4.
Qua kết quả trỡnh bày ở bảng 3.3 và minh hoạ ở hỡnh 3.2 cho chỳng ta thấy tỷ lệ sống của ấu trựng ở cỏc cụng thức trong thớ nghiệm cú khỏc nhau, trong ủú trung bỡnh tỷ lệ sống ủạt cao nhất ở cụng thức 4 là 82.4±3.704 (%) và cụng thức 5 tỷ lệ sống trung bỡnh ủạt thấp hơn là 78.4±2.551 (%) ủiều này
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………34
chứng tỏ chất lượng thức ăn ủó ảnh hưởng trực tiếp ủến qỳa trỡnh sinh trưởng và tỷ lệ sống của ấu trựng. Kết quả phõn tớch ANOVA và LSD0.05 cho thấy khụng cú sự sai khỏc về trung bỡnh tỷ lệ sống giữa cỏc cụng thức về mặt thống kờ (p>0.05).
3.2.2.2 Giai ủoạn Zoae4-Zoae5:
Trong thớ nghiệm giai ủoạn Zoae4-Zoae5 với cỏc ủiều kiện chăm súc quản lý, cho ăn và cỏc yếu tố mụi trường của cỏc lụ thớ nghiệm như nhau, ở CT4 cho tỷ lệ sống trung bỡnh ủạt cao nhất là 61.43±21.097 (%), ở CT 5 tỷ lệ sống ủạt thấp hơn 61.97±14.1 (%)(%). Nguyờn nhõn tỷ lệ sống trung bỡnh ở CT4 ở lụ thớ nghiệm lặp thứ 3 ấu trựng bị chết trắng chỉ ủạt 37.2 (%) theo nhận ủịnh của chỳng tụi thỡ ấu trựng ủó bị bệnh chết trắng thõn (chưa rừ là bệnh gỡ) sau khi thí nghiệm thực hiện đ−ợc 2.5 ngày nên đ> ảnh h−ởng đến tỷ lệ sống ở trong lần thí nghiệm. Kết quả phõn tớch ANOVA và LSD0.05 cho thấy khụng cú sự sai khỏc nhau về mặt thống kờ (p>0.05)
3.2.2.3 Giai ủoạn từ Zoae5-Megalope:
Kết quả bảng 3.3 và minh hoạ ở hỡnh 3.2 cho thấy tỷ lệ sống từ giai ủoạn Zoae5 – Megalope ủạt trung bỡnh là 28.6±0.36 (%) ở cụng thức 4. Kết quả này so với kết quả nghiờn cứu của Nguyễn Cơ Thạch, 2001 thỡ cao hơn chứng tỏ một ủiều khi sử dụng thức ăn ủược bổ sung hàm lượng dinh dưỡng từ ngoài vào bằng cỏch làm giàu cho kết quả tốt hơn là khụng làm giàu, ở CT5 tỷ lệ sống trung bỡnh ủạt 25.27±0.874 (%) kết quả này so với nghiờn cứu của Nguyễn Cơ Thạch, 2001 khi sử dụng thức ăn khụng ủược làm giàu là tương ủương nhau. Kết quả phõn tớch ANOVA và LSD0.05 cho thấy sự sai khỏc nhau cú ý nghĩa về mặt thống kờ (p<0.05) giữa cụng thức 4 so với cụng thức 5.
3.2.2.5 Giai ủoạn Megalope-Cua:
Kết quả thớ nghiệm ấu trựng giai ủoạn từ Megalope-Cua với 3 lần lặp cho mỗi cụng thức ủể xỏc ủịnh ủược tỷ lệ sống của ấu trựng cho thấy ở cụng thức
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………35
4 trung bỡnh ủạt cao hơn là 94.23±4.25 (%) so với cụng thức 5 chỉ ủạt 79.67±1.258 (%). Kết quả khi phõn tớch ANOVA và LSD0.05 cho thấy sự sai khỏc nhau cú ý nghĩa về mặt thống kờ (p<0.05) giữa cụng thức 4 so với cụng thức 5. Tuy nhiờn thớ nghiệm ở giai ủoạn Megalope-Cua ngoài việc cung cấp thờm cỏc acid amine và acid bộo khụng no vào thức ăn mà chỳng tụi cũn bổ sung thờm lưới tạo nơi ẩn nỏu cho ấu trựng trong khi những nghiờn cứu trước chỉ dựng vỏ sũ ủể tạo giỏ thể, vỡ vậy từ kết quả trờn cho thấy rằng ở giai ủoạn Megalope ngoài việc cung cấp ủầy ủủ dinh dưỡng cũn một yếu tố giỳp tỷ lệ sống của ấu trựng ủược nõng cao ủú là bổ sung thờm lưới tạo giỏ thể cho ấu trựng bỏm trỏnh chỳng cắn nhau trong ủiều kiện ương nuụi ở mật ủộ dầy. Kết quả này so sánh với kết quả của tác giả Don Fielder, 2004 cao hơn khi tác giả −ơng ấu trùng bằng n−ớc tảo xanh cho tỷ lệ sống đạt 70%, theo Qiunitio và ctv, 2004 tỷ lệ sống chỉ đạt từ 30 – 60%. Theo quy trình của tác giả Nguyễn Cơ Thạch, 2001 [6] ở giai đoạn Megalope-Cua đạt từ 78 – 90%, từ kết quả nghiên cứu của chúng tôi đem so với 1 số tác giả khác trên thế giới khi sử dung các loại thức ăn khác nhau thì kết quả của chung tôi cao hơn nhiều so với các tác giả nh− {30}, {31}:
Kết quả −ơng nuôi ấu trùng Megalope-Cua bằng các laọi thức ăn khác nhau của 1 số tác giả trên thế giới [30], [31]
Các loại thức ăn Tỷ lệ sống Các loại thức ăn Tỷ lệ sống