3. Ý nghĩa của đề tài
2.4.1. Phương pháp nghiên cứu sinh trưởng nấm trên môi trường PDA
Cấy chuyển nấm và thí nghiệm đánh giá sinh trưởng nấm trên môi trường Potato Dextrose Agar (PDA) theo phương pháp của Brown and Smith (1957) và Samson (1974) [65].
Chuẩn bị môi trường
PDA (Potato Dextrose Agar) là môi trường nhiều hyđrat cacbon có chứa 20g glucose, 15g agar và nước luộc 200g khoai tây, trong 1lít nước. Khoai tây gọt vỏ rửa sạch và cắt nhỏ trước khi nấu cho vừa mềm. Bào tử vô tính hình thành trên PDA thường có hình dạng và kích thước không ổn định. Môi trường PDA có thể được dùng để bảo quản, phân lập hoặc làm môi trường nhân giống cấp 1.
Chuẩn bị môi trường PDA gồm 5 bước như sau:
Bước 1: Khoai tây được rửa sạch và gọt vỏ, để ráo nước.
Bước 2: Cân 200g và cắt nhỏ theo kích thước 1,0 x 1,0 cm rồi cho vào
nồi cùng 1000ml nước cất, nấu mềm trong khoảng 45 phút đến 1 giờ.
Bước 3: Lọc lấy dịch chiết và thêm vào 20g glucose + 15g agar +
lượng nước sao cho đủ 1000ml, cho lên bếp từ, vừa đun nóng vừa cho con khuấy từ đánh tan đều.
Bước 4: Cho vào một cái chai loại 1000ml có nắp kín, đem hấp tiệt trùng ở
1210, 20 Phút, 15 psi.
Phương pháp cấy chuyền từ đĩa petri sang đĩa petri
Bước1: Chuẩn bị
Tiến hành khử trùng buồng cấy, tay, khử trùng que cấy bằng cồn 70 %
Bước 2: Mẫu nấm
Những mẫu nấm gốc phải đạt tiêu chuẩn trước khi cấy chuyền
Bước 3: Cách cấy
Có 2 cách để cầm đĩa Petri trong khi cấy nấm, có thể cấy một điểm hoạch nhiều điểm trên đĩa petri
Bước 4: Nuôi dưỡng
Cấy xong, các đĩa petri được xếp vào hộp và đem nuôi trong tủ
colofom 22 - 240C
Hình 2.1. Mô tả các bước cấy nấm trên môi trường PDA
* Bố trí thí nghiệm
- Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của hàm lượng dinh dưỡng trên môi trường
PDA tới sinh trưởng và phát triển của nấm Isaria tenuipes.
Trên môi trường PDA tiến hành bổ sung thêm các hàm lượng đường với các mức: CT 1: 20 gam, CT 2: 15 gam và CT 3: 10 gam cho 1 lít môi trường. Mỗi hàm lượng đường là một công thức thí nghiệm.
- Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của thể tích môi trường PDA tới sinh trưởng và phát triển của nấm Isaria tenuipes.
Trên môi trường PDA tiến hành đánh giá sinh trưởng của nấm Isaria
tenuipes với các mức môi trường có độ dày CT 1: 1.5 mm, CT 2: 3 mm và CT
3: 5 mm.
Nấm Isaria tenuipes được bố trí nhân nuôi trên các đĩa petri có đường kính 6cm, với 8 lần lặp lại cho 1 công thức thí nghiệm. Trên mỗi đĩa Petri cấy 5 điểm nấm.
• Chỉ tiêu theo dõi
Thí nghiệm tiến hành theo dõi các chỉ tiêu:
- Đặc điểm hình thái khuẩn lạc nấm Isaria tenuipes sinh trưởng trên môi trường PDA.
- Sự sinh trưởng phát triển của nấm Isaria tenuipes theo bề ngang môi trường (đường kính khuẩn lạc).
- Sự sinh trưởng, phát triển chiều cao của khuẩn lạc nấm Isaria tenuipes - Sự phát sinh và hình thành bào tử nấm Isaria tenuipes trên môi trường
PDA.
- Các chỉ tiêu được theo dõi và lấy số liệu định kỳ 3 ngày 1 lần. Riêng chỉ tiêu miêu tả đặc điểm hình thái khuẩn lạc nấm Isaria tenuipes thì theo dõi và lấy chỉ tiêu theo từng ngày một.