Chúng tôi tiến hành phân tích mẫu thực trên máy HPLC – PDA trong điều kiện tối ƣu.
Mẫu thuốc:
Với mỗi mẫu thuốc, chúng tôi cân một lƣợng tƣơng ứng với một viên 0,15 gam với mẫu 2, 3 và 0,1 gam với mẫu 1(quy trình mục 2.3.1). Mỗi mẫu làm 3 lần, mỗi lần đo trên hệ HPLC 3 lần lấy kết quả trung bình. Hàm lƣợng chất phân tích trong một viên thuốc tính theo công thức:
Digoxin, digitoxin(mg/viên) = C(mg/l).10 (ml) Trong đó:
- C (mg/l) là nồng độ chất phân tích
- 10 (ml) là thể tích dung dịch mẫu phân tích
Dƣới đây là kết quả thu đƣợc của mẫu thực:
Mẫu 1: Chỉ phát hiện thấy digoxin với nồng độ tƣơng ứng với 3 lần tiến hành là: 24,8ppm, 24,4ppp, 24,7ppm. Kết quả phân tích cũng cho thấy không phát hiện (KPH) thấy digitoxin có trong mẫu thuốc. Kết quả tính theo hàm lƣợng chất/viên trong bảng sau:
Bảng 3.13: Kết quả thu được của mẫu 1
Các glycoside tim Lần 1
(mg/viên)
Lần 2 (mg/viên)
Lần 3
(mg/viên) Hàm lƣợng công bố (mg/viên thuốc)
Digoxin 0,25 0,24 0,25 0,25
Digitoxin KPH KPH KPH --
Mẫu 2: Chỉ phát hiện thấy digoxin với nồng độ tƣơng ứng với 3 lần tiến hành là: 25ppm, 24,5ppp, 24,9ppm. Kết quả tính theo hàm lƣợng chất/viên thể hiện trong bảng sau:
Bảng 3.14: Kết quả thu được của mẫu 2
Các glycoside tim Lần 1
(mg/viên) (mg/viên) Lần 2 (mg/viên) Lần 3 Hàm lƣợng công bố (mg/viên thuốc)
Digoxin 0,25 0,25 0,25 0,25
Digitoxin KPH KPH KPH --
Mẫu 3: Cũng chỉ phát hiện thấy digoxin với nồng độ tƣơng ứng với 3 lần tiến hành là: 24,1ppm, 24,3ppp, 24,6ppm
Các glycoside tim Lần 1 (mg/viên)
Lần 2 (mg/viên)
Lần 3
(mg/viên) Hàm lƣợng công bố (mg/viên thuốc)
Digoxin 0,24 0,24 0,25 0,25
Digitoxin KPH KPH KPH --
Nhƣ vậy, dựa vào bảng 3.14, 3.15, 3,16 ta nhận thấy: Chỉ có digoxin trong thuốc, không phát hiện thấy digitoxin. Nhƣ vậy kết quả phân tích tƣơng đối phù hợp với thực tế.
Mẫu dƣợc liệu:
Chúng tôi cũng tiến hành làm 3 mẫu (theo quy trình mục 2.3.1), mỗi mẫu đo 3 lần trên hệ HPLC. Qua kết quả thực nghiệm chúng tôi thấy: không phát hiện thấy digoxin và digitoxin có trong mẫu lá trúc đào.
Dƣới đây là sắc đồ của các mẫu thuốc thật. Mẫu 1: 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 min -0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 mAU(x10) 225nm,4nm (1.00) 2.5 11 2.8 18 3.1 05 3.6 81 4.1 91 4.4 37 4.6 92 Mẫu 2: 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 min -0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 mAU(x10) 225nm,4nm (1.00) 2.5 15 2.6 13 2.8 27 3.1 11 3.678 4.2 03 4.4 37 4.7 02 mAu mAu Thời gian, phút Digoxin Digoxin
Mẫu 3: 0.0 2.5 5.0 min 0.0 1.0 2.0 3.0 mAU(x10) 225nm,4nm (1.00) 2.5 25 2.6 24 2.8 18 3.1 16 3.6 79 4.1 86 4.7 07 6.6 63
Hình 3.9: Sắc đồ của mẫu thực – mẫu thuốc
mAu
Thời gian, phút Digoxin
KẾT LUẬN
Qua quá trình làm nghiên cứu phƣơng pháp định lƣợng glycoside tim trong dƣợc phẩm, chúng tôi thu đƣợc kết quả nhƣ sau:
1. Đã tối ƣu hóa đƣợc các điều kiện xác định 02 glycoside tim, điều kiện tách 02 glycoside tim bằng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao, sử dụng detector PDA. Các điều kiện tối ƣu bao gồm:
Hệ dung môi pha động là ACN/H2O với tỉ lệ ACN/H2O = 55/45
Tốc độ dòng là u = 0,7ml/phút.
Đánh giá đƣợc độ lặp lại của thiết bị phân tích và kết luận hệ máy đã chọn có độ lặp lại tốt, dƣới 5%.
2. Chúng tôi cũng đánh giá đƣợc độ đúng của phƣơng pháp phân tích:
Độ lặp lại của phƣơng pháp xử lý mẫu 1,07 %< 5%
Đánh giá đƣợc độ thu hồi của phƣơng pháp từ 96,1% đến 105,5%.
Ứng dụng phƣơng pháp trên để phân tích một số mẫu thuốc trên thị trƣờng.
3. Dựa trên những điều kiện tối ƣu đã khảo sát, đã áp dụng các điều điều kiện đó để xây dựng đƣờng chuẩn các glycoside tim. Và ứng dụng đƣờng chuẩn này để phân tích các glycoside tim có trong một số mẫu thuốc, mẫu dƣợc liệu.
4.Phân tích đƣợc một số mẫu thuốc điều trị tim lƣu hành trên thị trƣờng, cụ thể mẫu Digoxin- richter, Digoxine nativelle và DigoxineQualy 0,25mg. Kết quả cho thấy các mẫu thuốc này có chứa digoxin với hàm lƣợng tƣơng ứng 0,2463mg/viên, 0,2480mg/viên và 0,2433mg/viên. Nhƣ vậy kết quả phân tích tƣơng đối phù hợp với thực tế. Phân tích mẫu dƣợc liệu là lá trúc anh đào không phát hiện thấy digoxin và digitoxin.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt:
1. Bộ y tế (2010), Dược điển Việt Nam, NXB y học, Hà Nội.
2. Bộ y tế (2012), Dược thư quốc gia Việt Nam, NXB y học, Hà Nội.
3. Phạm Luận (2000), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu năng cao, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội.
4. Lê Đức Ngọc (2011), Bài giảng nhập môn xử lý số liệu và kế hoạch hoá thực nghiệm, Hà Nội.
5. Nguyễn Đình Thành (2011), Cơ sở các phƣơng pháp phổ ứng dụng trong hóa
học, NXB khoa học và kỹ thuật, Hà Nội.
6. Nguyễn Văn Ri (2006), Chuyên đề các phương pháp tách chất, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội.
7. Nguyễn Văn Ri (2013), Các phương pháp tách, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG Hà Nội, Hà Nội.
8. Tạ Thị Thảo (2006), Bài giảng thống kê trong hoá phân tích, Trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Hà Nội.
9. Ngô Văn Thu (2004), Bài giảng dược liệu tập 1, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội.
Tiếng Anh:
10. A. Jedlicka, T. Grafnetterova´, V. Miller (2003), “HPLC method with UV detection for evaluation of digoxin tablet dissolution in acidic medium after solid-phase extraction”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,33, pp. 109 – 115.
11. Belachew Desta, E. Kwong and K. M. Mcerlane (1981), “ Sepration of digoxin, digitoxin and their potential metabolites, impurities or
degradation products by High – performance liquid choramatography”,
Journal of Chromatography, 240, pp. 137-143.
12. Federica Pellati, Renato Bruni, Maria Grazia Bellardi, Assunta Bertaccini, Stefania Benvenuti (2009), “Optimization and validation of a high- performance liquid chromatography method for the analysis of cardiac glycosides in Digitalis lanata”, Journal of Chromatography A, 1216, pp. 3260–3269.
13. Ferenc Orosz, Mimi Nuridsa’ny and Judid Ova’di (1986), “Isolation and
Quantitative Determination of Some Cardioactive Glycosides from Digitalis lanata by High-Performance Liquid Chromatography”, Analytical biochemistry, 156, pp. 171 – 175.
14. F. Erni and R W. Frei (1976), “A Comoarision of reversed – phase and partiion High performance liquid chromatography of some digitalis glycoside”, Journal of Chromarography, 130 , pp. 169-180.
15. Kevin L. Kelly, Bruce A. Kimball, John J. Johnston (1995), Quantitation of digitoxin, digoxin, and their metabolites by high-performance liquid chromatography using pulsed amperometric detection”, Journal of Chromatography A, 711, pp. 289-295.
16. L.K. Hearn, P.P. Subedi (2009), “ Determining levels of steviol glycosides in the leaves of Stevia rebaudiana by near infrared reflectance spectroscopy”, Journal of Food Composition and Analysis, 22, pp. 165–168.
17. Ralf Dieter Josephs, Adeline Daireaux, Steven Westwood, Robert Ian Wielgosz (2010), “Simultaneous determination of various cardiac glycosides by liquid chromatography -hybrid mass spectrometry for the
purity assessment of the therapeutic monitored drug digoxin”, Journal of Chromatography A, 1217, pp. 4535–4543.
18. Santosh J. Vetticaden (1990), “ Review Chromatography of cardiac glycosides”, Journal of Chromatography,531, pp. 215 - 234.
19. Sarah Kohls, Barbara M. Scholz-Bottcher, Jorg Teske, Patrick Zark, Jurgen Rullkotter (2012), “Cardiac glycosides from Yellow Oleander (Thevetia peruviana) seed”, Phytochemistry, 75, pp. 114-127.
20. V. Ya. Davydov, M. Elizalde Gonzalez and A. V. Kiselev (1981), “ High performance liquid choramatography of cardiac glycosides”, Journal of Chromatography, 204, pp. 293 – 301.
21. V. Ya. Davydov, M. Elizalde Gonzalez and A. V. Kiselev (1982), “Correlation between the retention of cardiac glicosides in reversed – phase High – performance liquid choramatography with a diphenylsil stationary phase, the strucure of their molecules and their biological activitty”, Journal of Chromatography,248, pp. 49 -62.
22. Youichi Fujii, Hitoml Fukuda, Yumko Saito and Mitsuru Yamazaki (1980), “Separation of digitalis glycosides by micro high-performance liquid chromatography”, Journal of Chromatography, 202 , pp. 139- 143.
23. Youichi Fujii, Hitoml Fukuda, Yumko Saito and Mitsuru Yamazaki (1989),
“High – performance liquid choramatography determination of
secondary cardiac glycosides in digitalis purpurea leaves”, Journal of
Chromatography, 419, pp. 319-325.
24. Youichi Fujii, Yukari và Mitsuru Yamazaki (1988), “Micro High –
performance liquid choramatographic determination of cardiac
glycosides in -methydioxin and digoxin tablets”, Journal of
Chromatography, 448, pp. 157-l64. 25. Zozan B. Todorovic’, Miodrag L. Lazic’, Vlada B. Veljkovic’ (2009),
“Validation of an HPLC–UV method for the determination of digoxin residues on the surface of manufacturing equipment”, Joural of Serbian Chemical Societyl, 74 (10), pp. 1143–1153.