A.4.1 Nguyên tắc
Ở nhiệt độ cao, dưới tác dụng của H2SO4đậm đặc và có chất xúc tác,
các hợp chất hữu cơ bị oxy hóa, carbon và hydro tạo thành CO2 và H2O, còn gốc amin thì bị oxy hóa và giải phóng ra NH3, NH3 tác dụng với H2SO4 tạo
thành (NH4)2SO4 tan trong dung dịch. Đây là giai đoạn công phá đạm trong
mẫu.
A.4.2 Các bước tiến hành
Công phá đạm
Cân 0.2 – 0.25g mẫu trên giấy nhôm, sau đó cho vào ống nghiệm Kjeldahl, đặt ống vào trong kệ nhôm.
Cho vào ống lần lượt 10 ml H2O2 và 10 ml H2SO4 đậm đặc, để yên 5 phút.
Đặt cả kệ nhôm vào trong bộ phận công phá đạm. Mở vòi nước và bật
máy. Chỉnh nhiệt độ ở 3 mức: 1100C trong 20 phút 2000C trong 20 phút 3000C trong 20 phút 3700C trong 20 phút
Tắt máy, khoảng 30 phút sau tắt nước, lấy kệ đỡ ra và chờ nguội hẳn.
Nếu dung dịch trong ống nghiệm trong suốt thì quá trình công phá đạm xảy ra
hoàn toàn, nếu còn màu vàng hay nâu thì thêm 5 ml H2O2 và lặp lại bước 3.
Chưng cất
2. Đặt ống nghiêm chứa dung dịch đã công phá đạm (NH4)2SO4vào đúng
vị trí ở hệ thống chưng cất đạm.
3. Bên dưới hệ thống chưng cất, đặt bình tam giác chứa 10 ml dung dịch
acid boric 2%.
4. Xả NaOH từ bình chứa xuống 1 vạch.
5. Đợi khi xuất hiện chữ P thì bấm nút RUN.
6. Máy chạy khoảng 5 phút, khi xuất hiện chữ “END” thì tắt. Dung dịch
trong bình tam giác lúc này có màu hồng hay xanh, thông thường là màu xanh.
Chuẩn độ: cho từng giọt dung dịch H2SO4 0.1N từ ống burret vào bình tam giác và lắc đều, nhẹ đến khi dung dịch vừa chuyển sang màu hồng nhạt thì dừng lại. Ghi thể tích dung dịch H2SO4 0.1N vừa chuẩn độ.
A4.3 Tính kết quả %N = ( 0)*0.0014*100 m V V %CP = %N * 6.25 Trong đó: %CP: % protein thô V0: Thể tích H2SO4 0.1N chuẩn độ mẫu trắng
V: Thể tích H2SO4 0.1N chuẩn độ mẫu đang phân tích
m: Trọng lượng mẫu
0.0014: Số gram nitơ ứng với 1ml H2SO4 0.1N dùng chuẩn độ.