2.2.3.1. Phương pháp tủa protein
- Tủa trong MeOH (không kiềm hóa): Lấy chính xác 2,0ml HT chứa ST và BR + 50µl dung dịch chuẩn nội gốc 45µg/ml + 3ml MeOH. Lắc xoáy trong 15 giây. Ly tâm với tôc độ 5000 vòng/phút trong 10 phút. Lọc toàn bộ dịch, bay hơi, hòa tan cắn trong 1,5ml pha động, lọc qua màng 0,45 µm, đem phân tích HPLC.
- Tủa trong MeOH (kiềm hóa): Lấy chính xác 2,0ml HT chứa ST và BR + 50µl dung dịch chuẩn nội gốc 45µg/ml + 50µl dung dịch NaOH 1M (kiềm hóa) + 3ml MeOH. Lắc xoáy trong 15 giây. Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút trong 10 phút. Lọc toàn bộ dịch, bay hơi, hòa tan cắn trong 1,5ml pha động, lọc qua màng 0,45 µm, đem phân tích HPLC.
- Tủa trong ACN: Lấy chính xác 2,0ml HT chứa ST và BR + 50µl dung dịch chuẩn nội gốc 45µg/ml + 50µl dung dịch NaOH 1M (kiềm hóa) + 3ml ACN. Lắc xoáy trong 15 giây. Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút trong 10 phút. Lọc toàn bộ dịch, bay hơi, hòa tan cắn trong 1,5ml pha động, lọc qua màng 0,45 µm, đem phân tích HPLC.
- Tủa trong acid percloric: Lấy chính xác 2,0ml HT + 50µl dung dịch chuẩn nội gốc 45µg/ml + 400µl acid percloric 1N + 50µl dung dịch NaOH 1M (kiềm hóa). Lắc xoáy trong 15 giây. Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút trong 10 phút. Lọc toàn bộ dịch qua màng 0,45 µm, đem phân tích HPLC.
2.2.3.2. Phương pháp chiết lỏng-lỏng
- Chiết trong chloroform: Lấy chính xác 2,0ml HT chứa ST và BR + 50µl dung dịch chuẩn nội gốc 45µg/ml + 50µl dung dịch NaOH 1M (kiềm hóa), lắc xoáy 5 phút. Sau đó thêm 2 ml CHCl3, lắc xoáy 10 giây. Ly tâm lấy lớp dung dịch phía dưới. Bay hơi dung môi hữu cơ. Hòa tan cắn bằng 1,5ml pha động, lọc qua màng 0,45 µm, đem phân tích HPLC.
- Chiết trong ethyl acetat: Lấy chính xác 2,0ml HT chứa ST và BR + 50µl dung dịch chuẩn nội gốc 45µg/ml + 50µl dung dịch NaOH 1M (kiềm hóa), lắc xoáy 5 phút. Sau đó thêm 2 ml ethyl acetat, lắc xoáy 10 giây. Ly tâm lấy lớp dung dịch phía trên. Bay hơi dung môi hữu cơ. Hòa tan cắn bằng 1,5ml pha động, lọc qua màng 0,45 µm, đem phân tích HPLC.