Cho 50 g bột nhân hạt bông được đưa vào bình cầu dung tích 500 ml,
thêm 100 ml dung dịch acid phosphoric IM, thủy phân ở nhiệt độ 60®c, trên
nồi đun cách thủy có lắp sinh hàn để hồi lưu dung môi bay hơi. Sau 60 phút, thêm vào bình 200 ml aceton, đun hồi lưu trong 30 phút. Lọc hút chân không, thu dịch lọc, phần bã tiếp tục cho vào bình rồi thêm 150 ml hồn họp dung môi aceton : nước = 7:3. Tiếp tục đun hồi lưu cách thủy trong 30 phút rồi lọc như trên, bã nguyên liệu tiếp tục đưa trở lại bình và thêm 1 0 0 ml hỗn hợp dung môi aceton : nước = 7:3. Đun hồi lưu cách thủy trong 30 phút, hết thời gian đem lọc như trên. Phẫn bã được rửa bằng 20 ml aceton. Gộp tất cả các phần dịch lọc thu được dịch chiết. Quá trình chiết trên đều được tiến hành trong
điều kiện tránh ánh sáng, đun cách thủy hồi lưu ở nhiệt độ 60^c, thỉnh thoảng
có khuấy trộn.
Dịch chiết được cất thu hồi aceton dưới áp suất giảm trên máy cất quay, ở nhiệt độ 40^C, thu được aceton (aceton này có thể cất lại để sử dụng cho các lần chiết tiếp theo) và pha nước chứa gossypol và dầu hạt bông không tan.
Chuyển pha nước vào bình chiết quả lê, chiết với DCM 3 lần (80 ml, 60 ml, 60 ml). Gộp các pha DCM chiết được rồi rửa pha này 1 lần với nước để loại acid nếu có. Cuối cùng, pha DCM được cất loại dung môi dưới áp suất giảm trên máy cất quay, ở nhiệt độ 40^c thu được 1,74 g cao chiết màu nâu.
Sơ đồ 3.1: Chiết xuất và tinh chế G-AA
Cao chiết được định tính sự có mặt của gossypol bằng phương pháp đo phổ hấp thụ tử ngoại và SKLM. Kết quả cho thấy, phổ hấp thụ tử ngoại của cao chiết có đỉnh hấp thụ cực đại tại 364 nm (Phụ lục 1), và có hình dạng phù họp với hình dạng và đỉnh hấp thụ cực đại của gossypol đã được công bố trước đó (365 nm) [16]. Tiến hành SKLM với hệ dung môi khai triển là n-
hexan/ethyl acetat/acid acetic = 9/1/0,4 với thuốc thử hiện màu là H2SO4 20%
trong EtOH. Trên sắc kí đồ thấy cao chiết có một vết đậm tương ứng với vết của gossypol đối chiếu. (Hình 3.1). Kết luận, trong cao chiết có gossypol.