a). Triệu chứng
- Loài mắc bệnh: Gà, gà tõy, vịt, ngan, ngỗng, đà điểu, cỏc loài chim ... - Thời gian nung bệnh: từ vài giờ đến 3 ngày, phụ thuộc vào số lượng vi rỳt, con đường xõm nhập, loài mẫn cảm .
- Tỷ lệ mắc và chết khỏc nhau phụ thuộc vào loài vật mắc và độc lực của vi rỳt gõy bệnh cũng như tuổi mắc và điều kiện mụi trường. Trường hợp vi rỳt gõy bệnh cú độc lực cao, gà cú thể mắc và chết tới 100%.
- Con vật sốt cao, biểu hiện khụng bỡnh thường ở hệ thống tiờu hoỏ, hụ hấp, sinh sản và thần kinh.
Triệu chứng chung: Con vật giảm hoạt động, giảm tiờu thụ thức ăn, gầy yếu, tăng tần số gà ấp ở đàn đang đẻ, giảm sản lượng trứng. Trường hợp nặng biểu hiện ho, thở khú, chảy nước mắt, đứng tỳm tụm một chỗ, lụng xự, phự đầu, mặt, những chỗ da khụng cú lụng bị tớm tỏi, chõn bị xuất huyết, rối loạn thần kinh, ỉa chảy, một số con biểu hiện co giật hoặc đầu ở tư thế khụng bỡnh thường [7]. b). Bệnh tớch Bệnh tớch thường gặp:
- Mào và yếm (tớch) sưng to, phự quanh mớ mắt - Chỗ da khụng cú lụng bị tớm bầm.
- Chõn bị xuất huyết.
- Xuất huyết vựng đầu và thõm tớm;
- Viờm xoang bụng tớch nước hoặc viờm dớnh; - Xuất huyết đốm ở trờn bề mặt niờm mạc;
- Viờm xuất huyết hầu hết toàn bộ đường tiờu hoỏ, đặc biệt rừ ở manh tràng, dạ dầy tuyến nơi tiếp giỏp với mề [4]
c). Phương phỏp xột nghiệm: Cú một số phương phỏp nghiờn cứu về miễn dịch chống bệnh cỳm gia cầm. Trong đú phương phỏp huyết thanh học và chẩn đoỏn virus học là được sử dụng nhiều hơn cả.
Phương phỏp huyết thanh:
- Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA)
- Phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu gà (HI)
Phương phỏp chẩn đoỏn virus:
- Phương phỏp phõn lập virus trờn phụi trứng. - Giỏm định virus bằng kỹ thuật PCR.
d). Chẩn đoỏn huyết thanh học
Phản ứng huyết thanh học dựng để nhận biết cỏc khỏng thể cú từ 7 - 10 ngày sau khi chủng vắc xin. Chỳng ta cú thể sử dụng cỏc phương phỏp chẩn đoỏn như phản ứng ngưng kết hồng cầu -HA (Hemagglutination test), phản
ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu - HI (Hemagglutination inhibition test) Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu- HI: Phản ứng này được ứng dụng để chẩn đoỏn bệnh cỳm gia cầm: xỏc định type hoặc subtype của chủng virus cỳm phõn lập với cỏc khỏng thể đặc hiệu đó biết (mẫu kiểm tra là nước trứng hoặc mụi trường tế bào thu hoạch sau khi tiờm truyền bệnh phẩm); phỏt hiện khỏng thể cỳm gia cầm với subtype của chủng virus cỳm bị nhiễm hoặc sau khi sử dụng vacxin phũng bệnh.
e). Chẩn đoỏn virus học:
Phõn lập vi-rỳt và xỏc định vi-rỳt cỳm gà typ A là hết sức cần thiết và bắt buộc trong chẩn đoỏn bệnh.
* Phõn lập virus bằng tiờm truyền trờn phụi trứng.
Phương phỏp phõn lập virus thớch hợp là tiờm truyền qua phụi trứng gà hoặc tế bào nuụi cấỵ
Tiờm 0,1 - 0,3ml nước bệnh phẩm vào tỳi niệu của phụi gà 9 - 11 ngày tuổi, hàn kớn và tiếp tục cho ấp ở nhiệt độ 370C trong 2 - 3 ngàỵ
Một số ớt chủng virus cú độc lực cao cú thể gõy chết phụi khoảng 18-24 giờ trứng thu hoạch để ở nhiệt độ 40C qua một đờm. Virus nhõn lờn trong nước trứng cú hiện tượng ngưng kết hồng cầu gà. Nếu khụng gõy ngưng kết hồng cầu thỡ cú thể lấy nước trứng thu được tiờm lần 2 cho phụi gà.Phần lớn cỏc phụi bị tạp khuẩn sẽ chết trước 24 giờ phải bỏ đị Những phụi sống sau 24h tiếp tục được theo dừi đến 72h.
Lấy nước phụi từ những phụi chết trong khoảng 48h và sau 48h hoặc từ
phụi chưa chết đến 72h vào việc giỏm định virus. Đõy là khoảng thời gian mà số lượng virus cỳm (nếu cú) đó đạt đến mức lý tưởng.
* Giỏm định virus bằng phương phỏp nhõn gen phiờn mó ngược RT-PCR.
Dựng để xỏc định được Subtyp H và N.
Phản ứng RT - PCR: Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) là một kỹ
thuật tiờn tiến để giỏm định hệ gen của virus cỳm thậm chớ khi chỳng chỉ cú mặt với một lượng rất thấp. Do hệ gen của virus cỳm là chuỗi xoắn đơn RNA, nờn cần phải tổng hợp một bản sao DNA (cDNA) bổ sung với RNA của virus trước khi tiến hành nhõn PCR. Men Reverse Transcriptase là một polymerase được dựng để tổng hợp nờn cDNA như vậỵ Do đú quỏ trỡnh nhõn hệ gen RNA của virus cỳm được gọi là RT- PCR. Phản ứng RT-PCR cần cú một cặp oligonucleotides, hoặc cũn gọi là primer (cặp mồi); 4 deoxyribonucleoside triphosphate (dNTPs); RNA khuụn mẫu, men Rt và Taq DNA polymerasẹ Hỗn hợp phản ứng trước tiờn được làm núng tới 600C, sau đú làm mỏt tới nhiệt độ 420C để primer forward (tiến về trước) gắn vào chuỗi RNA đớch.
Primer đó gắn sau đú được kộo dài ra với RT để tổng hợp cDNA cú độ dài đầy đủở nhiệt độ 500C. Hỗn hợp DNA/RNA sẽ trải qua 25 - 30 vũng gồm cỏc giai đoạn tỏch sợi, gắn vào và kộo dàị Men Taq DNA là một loại men polymerase bền nhiệt khụng bị phỏ huỷ bởi nhiệt độ núng và khụng cần phải thay thế ở mỗi vũng của chu trỡnh nhõn lờn. Do sản phẩm của mỗi 1 vũng nhõn lờn sẽ làm khuụn mẫu cho vũng tiếp theo, nờn mỗi vũng sẽ nhõn đụi số sản phẩm DNA mong muốn.
Cặp primer được sử dụng trong phản ứng PCR được thiết kế dựa trờn cơ sở của chuỗi gen đó biết. Do cỏc chuỗi HA của cỏc type/ subtype của cỏc vi-rỳt cỳm khỏc nhau cũng khỏc nhau nờn cú thể thiết kế cỏc primer PCR để
nhõn lờn một cỏch đặc hiệu của RNA của một type hoặc subtypẹ
Mẫu bệnh phẩm : Là dịch ổ nhớp, phõn, hoặc mẫu bệnh phẩm phõn lập từ trứng hoặc mụi trường tế bàọ