Đây là kỹ thuật phổ 2 chiều cho phép xác định các tương giao của các hạt nhân từ của phân tử trong không gian 2 chiều. Một số kỹ thuật chủ yếu thường dùng như sau:
+ Phổ HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum Coherence) các tương tác trực tiếp C–H được xác định nhờ các tương tác trên phổ này. Trên phổ 1
trục là phổ 1H–NMR còn trục kia là 13C–NMR các tương tác HMQC nằm trên
đỉnh các ô vuông trên phổ.
+ Phổ 1H–1H COSY (HOMOCOSY) 1H–1H Chemical Shift
Correlation–Spctroscopy: Phổ này biểu diễn các tương tác H–H, chủ yếu của các proton đính với cacbon liền kề nhau. Chính nhờ phổ này mà các phần của phân tử được nối ghép lại với nhau.
+ Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity) đây là loại phổ biểu diễn các tương tác xa của H và C trong phân tử. Nhờ vào các tương tác trên phổ này mà từng phần của phân tử cũng như toàn bộ phân tử được xác định về cấu trúc.
+ Phổ NOESY (Nucler Overhouser Effect Spectroscopy) phổ này biểu diễn các tương tác xa trong không gian của các proton không kể đến các liên kết mà chỉ tính đến khoảng cách nhất định trong không gian. Dựa vào kết quả phổ này có thể xác định được cấu trúc không gian của phân tử.
Người ta còn sử dụng hiệu ứng NOE bằng kỹ thuật phổ NOE defferenecs để xác định cấu trúc không gian của phân tử. Bằng việc đưa vào một xung đúng bằng từ trường cộng hưởng của 1 proton xác định thì các proton có cùng phía về không gian cũng như gần nhau về mặt không gian sẽ cộng hưởng mạnh hơn và cho tín hiệu phổ với cường độ mạnh hơn.
Ngoài ra, ngày nay người ta còn sử dụng nhiều kỹ thuật phổ 2 chiều rất hiện đại khác. Ví dụ như kỹ thuật xoá tương tác trên các phổ nhất định
(decoupling), ví dụ như trên phổ proton xoá tương tác của 1 proton nào đó có thể xác định vị trí của các proton bên cạnh ...
Ngoài các phương pháp phổ trên, trên thế giới người ta còn sử dụng phổ X-RAY (nhiễu xạ Rơnghen) để xác định cấu trúc không gian của toàn bộ phổ này rất hạn chế. Bởi vì yêu cầu tiên quyết là cần phải có đơn tinh thể. Đây là 1 điều kiện không phổ biến đối với các hợp chất hữu cơ.
Như trên, ngoài việc sử dụng các loại phổ người ta còn phải sử dụng kết hợp với các chuyển hoá hoá học cũng như các phuơng pháp phân tích so sánh, kết hợp. Đặc biệt đối với các phân tử nhiều mạch nhánh dài, tín hiệu phổ NMR bị chồng lặp nhiều khó xác định chính xác chiều dài các mạch, cũng như đối với các phân tử có các đơn vị đường thì việc xác định chính xác loại đường cũng như cấu hình đường thông thường phải sử dụng phương pháp thuỷ phân rồi xác định bằng phương pháp so sánh LC–MS hoặc GC–MS với các đường chuẩn dự kiến.
Chƣơng 2
đối tƣợng và phƣơng pháp nghiên cứu
2.1. Mẫu thực vật
Toàn cây Dischidia acuminata (15kg tươi) được thu hái vào tháng 3
năm 2005 tại Vườn quốc gia Tam Đảo. Mẫu thực vật do PGS TS Nguyễn
Phương (Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật) giám định. Tiêu bản số DA-
05-07 được lưu giữ tại Viện hóa học các Hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam.