3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu
3.2.1. Xây dựng các phương trình đường chuẩn và xác định khoảng
tuyến tính
Để tiến hành xây dựng đường chuẩn chúng tôi chuẩn bị một dãy dung dịch chuẩn có nồng độ: 10pmol, 25pmol, 100pmol để xác định khoảng tuyến tính của 17 axit amin. Kết quả đo được như sau (bảng 3.3):
Bảng 3.3: Sự phụ thuộc của diện tích pic sắc ký vào nồng độ (pmol/l) của axit amin
TT Axit amin Nồng độ Diện tích Nồng độ Diện tích Nồng độ Diện tích 1 Asp 10 781,812 25 1755,649 100 5438,597 2 His 10 658,736 25 1587,502 100 6239,592 3 Thr 10 1015,310 25 2341,675 100 8992,931 4 Tyr 10 958,267 25 2197,594 100 8405,716 5 Ile 10 945,163 25 2259,511 100 8830,265 6 Glu 10 963,071 25 2094,327 100 6318,022 7 Ser 10 1172,479 25 2403,424 100 8491,895 8 Gly 10 1037,715 25 2380,595 100 8435,319 9 Ala 10 1062,448 25 2284,784 100 8007,862 10 Arg 10 1299,576 25 2771,053 100 8919,414 11 Cys-ss- cys 10 440,336 25 845,849 100 2293,169 12 Val 10 1208,736 25 2715,620 100 8757,126 13 Met 10 1292,891 25 3019,753 100 9728,984 14 Phe 10 1000,467 25 2283,057 100 5793,015 15 Leu 10 1293,723 25 2712,360 100 9084,671 16 Lys 10 499,848 25 811,406 100 3801,906 17 Pro 10 1636,646 25 2116,079 100 7006,031
Từ kết quả xác định được ở bảng 3.3, vẽ đồ thị sự phụ thuộc diện tích pic sắc ký vào nồng độ axit amin ta có đường chuẩn của Aspartic như sau:
Hình 3.11: Đường chuẩn định lượng Asp
Phương trình hồi quy tuyến tính của Asp: y = 50,892x + 268,560 Hệ số tương quan: R2 = 0,9991
(x là nồng độ, y là diện tích pic, hệ số góc là 50,892) Tương tự, ta có đường chuẩn định lượng của 16 axit amin khác
Hình 3.12: Đường chuẩn định lượng His
y = 61,99555x + 39,04232 R2 = 0,9999
Hình 3.13: Đường chuẩn định lượng Thr
y = 88,61426x + 129,31682 R2 = 0,9998
Hình 3.14: Đường chuẩn định lượng Tyr y = 82,72156x + 131,60838
R2 = 0,9998
Hình 3.15: Đường chuẩn định lượng Ile
y = 87,61079x + 68,49580 R2 = 0,9999
Hình 3.16: Đường chuẩn định lượng Glu
y = 62,69125x + 263,33105 R2 = 0,9992
Hình 3.17: Đường chuẩn định lượng Ser y = 84,49167x + 193,64351
Hình 3.18: Đường chuẩn định lượng Gly y = 84,82661x + 137,90590
R2 = 0,9996
Hình 3.19: Đường chuẩn định lượng Ala
y = 81,55369x + 153,46259 R2 = 0,9996
Hình 3.20: Đường chuẩn định lượng Arg y = 90,39369x + 279,05025
R2 = 0,9993
Hình 3.21: Đường chuẩn định lượng Leu y = 90,33318x + 261,08487
Hình 3.22: Đường chuẩn định lượng Cys - SS - Cys
y = 33,76513x + 35,36127 R2 = 0,9996
Hình 3.23: Đường chuẩn định lượng Val y = 87,66077x + 261,12880
R2 = 0,9995
Hình 3.24: Đường chuẩn định lượng Met y = 98,27722x + 264,61287
R2 = 0,9992
Hình 3.25: Đường chuẩn định lượng Phe y = 65,24065x + 649,86865
Hình 3.26: Đường chuẩn định lượng Lys y = 31,78382x + 66,57235
R2 = 0,9992
Hình 3.27: Đường chuẩn định lượng Pro y =53,82445x - 13,40806
R2 = 0,9993
Hình 3.29: Sắc đồ hỗn hợp chuẩn 17 axit amin ở nồng độ 25 pmol/l
Hình 3.30: Sắc đồ chạy hỗn hợp chuẩn 17 axit amin ở nồng độ 100 pmol/l