Các chủng vi khuẩn sử dụng trong đề tài, bao gồm chủng vi khuẩn thử nghiệm L. acidophilus, các chủng vi khuẩn kiểm định B. subtilis và E. coli
được bảo quản bằng phương pháp cấy truyền định kì lên môi trường mới. Các thao tác cấy truyền được thực hiện trong tủ cấy vi sinh. Tủ cấy được tiệt trùng trước khi sử dụng bằng cách lau sạch bằng cồn 70o
và bật đèn UV trong 20 phút.
Môi trường MRS lỏng được pha chế theo công thức ở mục 2.1.3 a, phân phối vào các ống nghiệm, mỗi ống 9 ml môi trường, nút kín và tiệt trùng trong nồi hấp ở 115oC trong 20 phút, để nguội. Trộn đều ống giống lỏng của
L. acidophilus bằng máy lắc Vortex để có hỗn dịch tế bào đồng nhất. Dùng pipet Eppendorf hút 1 ml hỗn dịch tế bào từ ống giống cấy sang ống môi trường mới. Nuôi trong tủ ấm CO2 5% ở 37oC trong 24 giờ.
Sau thời gian ủ, loại bỏ các ống không đạt yêu cầu nếu có (vi sinh vật không mọc, mọc kém, nghi ngờ bị nhiễm). Các ống giống được gói kĩ, bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ khoảng 10oC (ngăn mát). Việc cấy truyền được thực hiện 1 – 2 tuần/lần.
b. Phương pháp cấy truyền B. subtilis và E. coli từ môi trường thạch
Môi trường thạch thường được pha chế theo công thức ở mục 2.1.3 b, phân phối vào các ống nghiệm, mỗi ống 10 ml môi trường, nút kín và tiệt trùng trong nồi hấp ở 121oC trong 20 phút. Sau khi tiệt trùng, đặt các ống môi trường nằm nghiêng khoảng 15 – 20o
trên mặt bàn sạch để thạch đông lại. Dùng que cấy vô trùng lấy một vòng vi sinh vật từ ống giống đặc cấy sang ống môi trường mới, lướt que cấy trên bề mặt thạch theo hình zigzag. Cả B. subtilis và E. coli đều được nuôi trong tủ ấm ở 37oC trong 24 giờ.
Sau thời gian ủ, loại bỏ các ống không đạt yêu cầu nếu có (vi sinh vật không mọc, mọc kém, nghi ngờ bị nhiễm). Các ống giống được gói kĩ, bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ khoảng 10oC (ngăn mát). Việc cấy truyền được thực hiện 1 – 2 tháng/lần.