lớp mỏng (TLC)
a) Chuẩn bị mẫu
Mẫu thử: Lấy khoảng 0,1 g bột lá dược liệu hoặc 0,5 g bột cành Khổ sâm cho lá cho vào bình nón 50 ml, thêm 10 ml MeOH, siêu âm 30 phút, lọc, cô dịch lọc còn 3 ml.
Mẫu đối chiếu: Dung dịch chất CT-1 0,5 mg/ml trong MeOH.
b) Hệ dung môi triển khai: Tiến hành sắc ký khảo sát với các hệ dung môi sau: 18 3,66 (1H; d; J=11Hz; Hα) 3,87 (1H; dd; J=3,0Hz; 16,0 Hz; Hβ) 72,3 3,62 (1H; d; J=11,1Hz; Hα) 3,84 (1H; d; J=11,1Hz; Hβ) 72,2 19 0,85 (3H, s) 17,5 0,82 (3H, s) 17,5 20 1,14 (3H, s) 18,0 1,11 (3H, s ) 18,1 1’ 171,2 171,2 2’ 2,09 (3H, s) 21,1 21,0 OH 1,62 (1H, m)
Hệ A Hex:EtOAc = 2:1 (v:v) Hệ B Toluen:EtOAc = 7:3 (v:v)
Hệ C EtOAc:EtOH:H2O = 8:2:1 (v:v:v)
Hệ D Benzen:EtOAc = 95:5 (v:v) (theo tiêu chuẩn DĐVN IV)
c) Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 5 µl mỗi dung dịch thử và dung dịch đối chiếu. Sau khi khai triển, bản mỏng được để khô ngoài không khí hay sấy nhẹ cho bay hết dung môi. Quan sát ở các bước sóng UV 254 nm và 366 nm, sau đó phun thuốc thử dung dịch H2SO4 10 % (TT) trong ethanol, sấy kính ở 1100C đến khi hiện vết.
Kết quả: Trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vết phát quang có cùng màu sắc và giá trị Rf với vết chất CT-1 của dung dịch đối chiếu.
Qua khảo sát các hệ dung môi (mục 3.3.1 b) thì hệ A cho kết quả sắc ký đồ tách tốt nhất (Hình 3.3) nên dùng hệ A làm hệ dung môi khai triển.
Hình 3.4: Sắc ký đồ chất CT-1, lá và cành cây Khổ sâm cho lá Chú thích: C: Cành Khổ sâm cho lá.
Ch: Chất đối chiếu CT-1. L: Lá Khổ sâm cho lá.
Hình A, C: Quan sát dưới ánh sáng UV 366 nm trước và sau khi phun thuốc thử H2SO4 10% trong EtOH.
Hình B: Quan sát dưới ánh sáng UV-254 nm trước khi phun thuốc thử. Hình D: Quan sát dưới ánh sáng thường sau khi phun thuốc thử H2SO4 10% trong EtOH.
Nhận xét: Trong khóa luận đã sử dụng hệ dung môi Hex:EtOAc (tỷ lệ 2 :1) để định tính chất CT-1 trong dược liệu Khổ sâm cho lá. So với tiêu chuẩn DĐVN IV đã sử dụng dung môi bớt độc hại, kinh tế hơn (thay benzen bằng n-hexan), và xác định rõ ràng chất chính, có thể sử dụng cho công tác tiêu chuẩn hóa dược liệu sau này.