2.3.2.1. Một số chỉ tiêu chất lượng
Hình thức: viên có hình trụ lồi, màu trắng hoặc trắng ngà, cứng, chắc; bề mặt
bóng đẹp, không bị bong mặt, sứt cạnh.
Độ cứng: xác định bằng máy đo độ cứng ERWEKA, thử với 10 viên, lấy giá trị
trung bình.
Độ mài mòn: xác định bằng máy đo độ mài mòn ERWEKA. Yêu cầu độ mài
mòn không được vượt quá 1%.
Độ đồng đều khối lượng: cân khối lượng của 20 viên bất kỳ rồi tính giá trị trung
bình. Đối với viên thực nghiệm có khối lượng trung bình 200mg, yêu cầu độ chênh lệch không quá ±7,5%.
Một số chỉ tiêu bán thành phẩm:
- Đánh giá độ ẩm của khối bột: xác định bằng phương pháp mất khối lượng do
làm khô trên cân hàm ẩm Precisa XM 60, thử với khối lượng bột trên 1 g.
- Đánh giá độ trơn chảy của khối bột: cho hạt chảy qua phễu Duran có đường
kính 10 mm, tính góc nghỉ α, hoặc tính tan α theo công thức tan α = chiều cao khối bột/bán kính đáy khối bột.
- Cũng có thể đánh giá tính trơn chảy của khối bột qua chỉ số Carr: dùng máy
gõ xác định tỷ trọng ERWEKA tính để tính tỷ trọng biểu kiến dbk của khối bột ban đầu có tỷ trọng thô dthô và tính theo công thức:
chỉ số Carr = (dbk - dthô)x100/dbk [1], [5].
Bảng 2.3. Tương quan giữa chỉ số Carr và tính chất trơn chảy của hạt/bột [1] Chỉ số Carr Phân loại độ trơn chảy
5 – 15 Rất tốt 12 – 16 Tốt 18 – 21 Dễ chảy (trung bình) 23 – 35 Kém 33 – 38 Rất kém > 40 Vô cùng kém
2.3.2.2. Phương pháp định lượng bằng đo quang vi sai theo bước sóng
- Pha dung dịch thử: cân 20 viên, xác định khối lượng trung bình viên. Nghiền
thành bột mịn, cân chính xác 1 lượng bột viên tương ứng với khoảng 1,5 mg indapamid cho vào bình định mức 25 ml. Thêm vào khoảng 20 ml ethanol, siêu âm 15 phút/lần x 3 lần. Bổ sung ethanol vừa đủ 25 ml, để yên khoảng 5 giờ, siêu âm 15 phút rồi ly tâm 4000v/p x 10 phút, lọc dịch trong phía trên qua màng 0,45 µm. Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc cho vào bình định mức 50 ml, bổ sung đệm pH 6,8 cho tới vạch, lắc đều được dung dịch thử (nồng độ Cthử khoảng 6 µg/ml).
- Pha dung dịch chuẩn: cân chính xác khoảng 30,0 mg indapamid chuẩn cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 30 ml ethanol, siêu âm cho tan hết, bổ sung ethanol 96% vừa đủ, lắc đều. Hút chính xác 1,0 ml dung dịch thu được cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung đệm phosphat pH 6,8 vừa đủ, lắc đều được dung dịch chuẩn (nồng độ Cchuẩn chính xác khoảng 6µg/ml).
- Mẫu trắng: đệm phosphat pH 6,8.
- Đo quang 2 mẫu tại 2 bước sóng 240 và 275 và tính kết quả theo công thức [20] Cthử = Cchuẩnx ΔDthử/ΔDchuẩn.
Xây dựng đường chuẩn biểu diễn sự phụ thuộc giữa hiệu mật độ quang với
nồng độ dung dịch indapamid trong môi trường đệm phosphat pH 6,8
Trong môi trường đệm phosphat pH 6,8, pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ lần lượt là 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6 μg/ml. Pha dung dịch chuẩn thêm có nồng độ 30 μg/ml. Với mỗi dung dịch thử tiến hành thêm chuẩn như sau: hút chính xác 1,0ml dung dịch chuẩn thêm C = 30 μg/ml cho vào bình định mức 10ml, bổ sung vừa đủ bằng dung dịch thử. Tiến hành đo quang vi sai theo bước sóng ở 240 và 275 nm. Từ kết quả thu được xây dựng đường chuẩn và đánh giá khoảng tuyến tính qua hệ số R2.
2.3.2.3. Định lượng indapamid trong viên nén bằng phương pháp HPLC
- Pha động: dung dịch A: methanol (30:70)
Dung dịch A: Hút chính xác 0,4 ml dung dịch HCLO4 đặc, pha loãng với nước cất 2 lần thành 1 lít dung dịch A. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Dung dịch chuẩn gốc có nồng độ 180 µg/ml: cân chính xác 18,0 mg indapamid chuẩn, cho vào bình định mức 100 ml. Thêm 70 ml pha động, siêu âm 5 phút cho tan hoàn toàn, bổ sung pha động cho đến thể tích vừa đủ 100 ml và lắc đều.
- Dung dịch chuẩn: Lấy chính xác 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc, chuyển vào bình
định mức 100 ml, bổ sung pha động tới thể tích vừa đủ thu được dung dịch chuẩn có nồng độ chính xác khoảng 9,0 µg/ml.
- Dung dịch thử: Nghiền, đồng nhất hóa viên (≥ 15 viên), phân tán một lượng bột
tương đương 18,0 mg indapamid bằng 70 ml pha động trong bình định mức 100 ml, siêu âm 20 phút, thêm pha động vừa đủ tới vạch 100 ml, đế yên khoảng 14h. Ly tâm một phần dung dịch với tốc độ 2000 v/p x 15 phút. Chuyển 5,0 ml phần dịch trong vào bình định mức 100 ml, bổ sung pha động vừa đủ tới vạch. Dung dịch thử thu được có nồng độ khoảng 9,0 µg/ml. - Hệ thống sắc ký: + Detector: UV 254 nm. + Cột: C18, Phenomenex (25 cm x 4,6 mm, 5 µm). + Tốc độ dòng : 1,0 ml/min. + Thể tích tiêm: 20 µl.
- Hàm lượng indapamid trong viên được tính theo công thức ở phụ lục 3.
2.3.2.4. Phương pháp đánh giá giải phóng dược chất từ viên nén
Điều kiện:
- Thiết bị sử dụng: cánh khuấy.
- Môi trường: 500 ml môi trường đệm phosphat pH 6,8.
- Nhiệt độ: 37±0,5 o
C.
- Tốc độ khuấy: 100 ± 1 vòng /phút.
- Thời điểm lấy mẫu: 2 giờ, 4 giờ, 6 giờ, 8 giờ, 14 giờ,16 giờ.
Tiến hành:
- Bước 1: Pha đệm phosphat pH 6,8: cân chính xác khoảng 6,805 g KH2PO4 và 0,896 g NaOH cho vào bình định mức dung tích 1000ml. Thêm 100 ml nước để hòa
tan hoàn toàn. Bổ sung nước cất vừa đủ 1000 ml. Điều chỉnh pH bằng dung dịch NaOH 0,1N hoặc dung dịch HCl 0,1N nếu cần.
- Bước 2: chuẩn bị các dung dịch chuẩn:
Dung dịch chuẩn gốc C0 nồng độ 1000µg/mL trong ethanol: Cân chính xác khoảng 25,0 mg indapamid chuẩn cho vào bình định mức 25 ml. Thêm 20 ml ethanol, siêu âm cho tan hoàn toàn. Bổ sung ethanol vừa đủ 25 ml và lắc đều.
Pha dung dịch chuẩn C2 nồng độ 2 μg/ml trong đệm: Hút chính xác 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc C0 vào bình định mức 50 ml. Pha loãng bằng dung dịch đệm phosphat pH 6,8 vừa đủ được dung dịch chuẩn C1 có nồng độ 100 μg/ml. Hút chính xác 2,0 ml dung dịch chuẩn C1 cho vào bình định mức 100ml. Bổ sung dung dịch đệm phosphat pH 6,8 vừa đủ và lắc đều.
Pha dung dịch chuẩn thêm C30 nồng độ 30 μg/ml trong đệm: Hút chính xác 3,0 ml dung dịch chuẩn gốc C0 cho vào bình định mức 100ml. Bổ sung dung dịch đệm phosphat pH 6,8 và lắc đều.
- Bước 3: chuẩn bị các dung dịch thử:
Tại các thời điểm lấy mẫu, hút chính xác 12,0 ml dịch hòa tan. Ly tâm với tốc độ 4000v/phút x 10 phút. Dịch ly tâm phía trên được lọc qua màng 0,45 µm. Hút chính xác 1,0 ml dung dịch chuẩn thêm C30 vào bình định mức 10ml. Bổ sung bằng dịch thử hòa tan sau lọc cho vừa đủ thể tích thu được dung dịch thử. Bổ sung 12 ml môi trường hòa tan vào cốc và tiếp tục thử.
Chuẩn bị dung dịch chuẩn đo: hút chính xác 1,0 ml dung dịch chuẩn thêm C30
vào bình định mức 10ml, bổ sung vừa đủ bằng dung dịch chuẩn C2 2 μg/ml.
Đo độ hấp thụ UV của dung dịch thử và dung dịch chuẩn đo ở bước sóng 240 nm và 275 nm. Mẫu trắng là dung dịch đệm phosphat pH 6,8.
- % indapamid giải phóng tại các thời điểm được tính theo công thức ở phụ lục 4.
2.3.2.5. Phương pháp đánh giá động học giải phóng dược chất từ viên nén.
Từ kết quả thử hòa tan thu được, động học giải phóng của viên được đánh giá bằng mô hình động học bậc 0 hoặc mô hình Higuchi đã được trình bày ở mục 1.1.4, dùng phần mềm Excel 2007 xây dựng đồ thị biểu diễn sự tương quan giữa %
indapamid giải phóng với thời gian (với mô hình bậc 0) hay căn bậc hai thời gian (với mô hình Higuchi), xác định hệ số tương quan R2và đánh giá độ tin cậy của mô hình với phương pháp nghiên cứu, dự đoán bản chất quá trình hòa tan từ viên. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.3.2.6. Phương pháp đánh giá sự tương quan giữa đồ thị giải phóng viên thực
nghiệm với viên đối chiếu
Dựa vào hệ số tương đồng f2 theo quy định của FDA (thể hiện sự giống nhau của hai đường cong hòa tan) khi so sánh giữa đồ thị hòa tan của viên nén Indapamid bào chế được và đồ thị hòa tan của chế phẩm đối chiếu. Giá trị f2 được tính theo công thức: + − = − = ∑( ) 100 1 1 lg . 50 5 , 0 1 2 2 R T x n f n t t t
Trong đó: n là số điểm lấy mẫu thử, Rt, Tt lần lượt là % dược chất giải phóng tại thời điểm t của mẫu đối chiếu, mẫu thử.
Ý nghĩa: f2 nhận giá trị từ 0 – 100. Hai đồ thị hòa tan được coi là giống nhau khi f2
≥ 50 (f2 càng lớn, hai đồ thị càng giống nhau) [12].