• Chuẩn bị dịch chấm sắc ký:
- Với mỗi vị thuốc cân một lượng dược liệu tương đương trong 1/5 thang. Cụ thể: Tục đoạn, Phòng phong, Hy thiêm:
Độc hoạt, Tần giao: Thiên niên kiện, Hoàng kỳ, Xuyên Khung, Đương quy, Ngưu tất : Đỗ trọng :
2 g 1,6 g 1,2 g 0,8 g Mỗi vị đem chiết nóng với 15 ml methanol, khoảng 10 phút. Lọc, dịch lọc đem cô cách thủy tới cắn, hòa tan vào 1 ml MeOH làm dịch chấm sắc ký.
- Cân 3,8 g cao đặc (tương ứng với 1/5 thang) hòa tan trong 20 ml methanol, cô cách thủy đến cắn, hòa tan cắn trong 1 ml methanol làm dịch chấm sắc ký.
- Riêng Mã tiền chế tiến hành như sau:
+ Dung dịch thử: Cho 1 g cao đặc vào bình nón nút mài, thêm 5 ml hỗn hợp cloroform - ethanol (10 : 1) và 0,5 ml amoniac đậm đặc (TT), đậy nắp và lắc trong 5 phút, để yên trong 1 giờ, thỉnh thỏang lắc đều. Lọc, được dung dịch thử [18].
+ Dung dịch đối chiếu: Dung dịch strychnin và brucin chuẩn.
• Chuẩn bị bản mỏng chạy sắc ký
- Bản mỏng silicagen GF254, hãng sản xuất Merk hoạt hóa ở 110°C trong 1 giờ.
46
- Lựa chọn hệ dung môi khai triển: Dựa theo các nhóm chất chính có trong vị thuốc, cao thuốc đểđịnh hướng lựa chọn hệ dung môi, mỗi vị thuốc khảo sát trên một số hệ dung môi nhất định chọn hệ tách vết rõ có khả năng nhận biết được vị thuốc trong cao để ghi lại kết quả.
• Tiến hành chạy sắc ký
- Chấm riêng biệt dịch chiết của cao bài thuốc và vị thuốc với lượng như nhau lên bản mỏng đã hoạt hóa.
- Đặt thẳng bản mỏng vào bình sắc ký đã bão hòa dung môi, đậy kín, để yên, quan sát tới khi dung môi chạy đến vạch giới hạn, lấy ra, để khô tự nhiên, soi UV ở các bước sóng 254; 366 nm và phun thuốc thử hiện màu.
■ Hoàng Kỳ : Khảo sát trên một số hệ dung môi sau Hệ 1: Toluen: ethyl acetat : acid formic = 5: 4: 1 Hệ 2: Toluen : ethyl acetat : acid acetic = 8: 1,5 : 1. Hệ 3: Cloroform : ethyl acetat = 9 : 1.
Hệ 4: Cloroform : Methnol = 9,5 : 0,5.
Hệ 5: Cloroform : Methanol : acid formic = 9,5 : 0,5 : 0,2. • Thuốc thử hiện màu: Vanilin/ acid sulfuric.
■ Độc hoạt, Xuyên khung, Đương quy: Khảo sát trên một số hệ dung môi
Hệ 1: Toluen : ethyl acetat : acid formic = 5 : 4 : 1
Hệ 2: Toluen : aceton : ethanol : NH3đặc = 5 : 5 : 0,8 : 0,4 Hệ 3: Cloroform : ethyl acetat = 9 : 1
Hệ 4: Cloroform : methanol = 9 : 0,5
Hệ 5: n-Hexan : ethyl acetat = 9 : 1 (Cao thuốc với chuẩn Z-ligustilid) Hệ 6: Cloroform : aceton : acid formic = 7 : 2,5 : 0,5
• Thuốc thử hiện màu : Vanilin/ acid sulfuric
■ Hy thiêm, Bạch thược: Khảo sát trên một số hệ dung môi Hệ 1: Toluen : ethyl acetat : acid formic = 5 : 4 : 1
Hệ 2: Toluen : aceton : ethanol : NH3đặc = 5 : 5 : 0,8 : 0,4 Hệ 3: Cloroform : ethyl acetat =9 : 1
47
Hệ 5: Cyclohexan : ethyl acetat : aceton = 7 : 3 : 0,5 Hệ 6: Cloroform : aceton : acid formic = 7 : 2,5 : 0,5 • Thuốc thử hiện màu : Vanilin/ acid sulfuric
■ Đỗ trọng, Thiên niên kiện: Khảo sát trên một số hệ dung môi
Hệ 1: Toluen : ethyl acetat : acid formic = 5 : 4 : 1 Hệ 2: Cloroform : ethyl acetat = 9 : 1
Hệ 3: Toluen : ethyl acetat : acid formic = 6 : 2,5 : 1 Hệ 4: Cloroform : aceton : acid formic = 7 : 2,5 : 0,5 Hệ 5 : Toluen : ethyl acetat = 9 : 1
• Thuốc thử hiện màu : Vanilin/ acid sulfuric
■ Phòng phong: Khảo sát trên một số hệ dung môi Hệ 1: Toluen : ethyl acetat : acid formic = 5 : 4 : 1 Hệ 2: Cyclohexan : ethyl acetat : aceton = 7 : 3 : 0,5 Hệ 3: Cloroform : ethyl acetat = 9 : 1
Hệ 4: Toluen : ethyl acetat = 9,5 : 0,5 • Thuốc thử hiện màu : Vanilin/ acid sulfuric
■ Mã tiền chế: Khảo sát trên một số hệ dung môi Hệ 1: Toluen : ethyl acetat : acid formic = 5 : 4 : 1
Hệ 2: Toluen : aceton : ethanol : NH3đặc = 5 : 5: 0,8 : 0,4 Hệ 3: Cloroform : ethyl acetat = 9:1
Hệ 4: Toluen : aceton : ethanol : NH3đặc = 5 : 5: 0,6 : 0,4 Hệ 5: Cyclohexan : ethyl acetat : aceton = 7: 3 : 0,5
• Thuốc thử hiện màu : Dragendorft
Bảng 3.5 - Tóm tắt kết quảđịnh tính sự có mặt của vị thuốc trong cao bằng SKLM
STT Vị thuốc Hệ DM tách tốt nhất SKĐ
Sốlượng vết tương đương giữa vị thuốc
và cao Kết luận sự có mặt vị thuốc trong cao 254 nm 366 nm TT
48 1 Phòng
phong
Toluen - ethyl acetat = 9,5 : 0,5
Hình
3.32 2 2 3 Có