- Môi trờng lên men chìm: + Môi trờng Sabouraud
4.2:Lựa chon môi trờng, thời gian, lợng mẫu lên men thích hợp.
Kết quả nghiên cứu và thảo luận
4.2:Lựa chon môi trờng, thời gian, lợng mẫu lên men thích hợp.
Để thực hiện lên men kết hợp thì đầu tiên chúng ta phải tiến hành lên men chìm hai chủng nấm trong bình thuỷ tinh và nuôi trên máy lắc với thời gian 2 ngày ở 28oC, 200 vòng/phút sau đó dùng pipet 1ml hút lợng mẫu nh nhau cấy lên môi trờng xốp. Sau 10 ngày nuôi cấy trên khối cơ chất đã thể hiện sự sinh tr- ởng và phát triển của chủng nấm Metarhizium ở mức nhiều và rất nhiều qua màu sắc, từ màu xám của môi trờng cơm và màu vàng xám của môi tròng trấu cám chuyển thành màu xanh thẫm và xanh lục. Sau khi lên mên xốp trong bóng kính đợc 15 ngày thì đem phơi khô ở nhiệt độ phòng khoảng 5 ngày, sau đó
dùng sàng để thu bào tử dạng tinh khiết và xác định hàm lợng bào tử bằng cách pha loãng rồi đếm khuẩn lạc trên đĩa petri. Kết quả đếm bào tử đợc xác đinh nh sau:
Bảng 3: Lợng bào tử (bt/g) của chủng M4, M5 sau lên men kết hợp
CT Chủng Chủng Ct1 (100% cơm) Ct2 (20% trấu + 80% cỏm gạo) M4 218 x108 108 x107 M5 225 x108 120 x107
Qua bảng 1 cho thấy cả hai chủng M4; M5 ở công thức 1 có lợng bào tử cao nhất trong các công thức thí nghiệm. Vậy môi trờng lên men kết hợp thích hợp để các chủng Metarhizium phát sinh bào tử là 100% cơm (MT xốp).
Sau khi xác định đợc lợng bào tử trong 1gam bào tử tinh khiết chúng tôi tiến hành xác định môi trờng lên men chìm tốt nhất, bằng cách pha loãng 1gam bào tử trong nứơc vô trùng thành 7 lần sau đó đêm nồng độ nhỏ nhất đem nuôi cấy trên môi trờng lỏng lắc Czapek-Dox, kết quả sau 1 ngày, 2ngày, 3ngày, 4ngày, 5ngày nuôi cấy đợc xác định lợng bào tử bằng cách đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch. Kết quả bảng nh sau
Bảng 4: số lợng bào tử sau các ngày nuôi cấy. TG (ngày)
Chủng 1 2 3 4 5
M4 78 121 135 107 99
M5 65 109 119 92 89
3 ngày lợng bào tử thu đợc nhiều nhất.
Sau lên men kết hợp để xác định chúng tôi tiến hành thu và đếm lợng bào tử trên gam. Thu bào tử bằng phơng pháp nghiền sơ bộ môi trờng sau đó sàng thu bào tử. Để đếm bào tử chúng tôi dùng phơng pháp pha loãng đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch. Kết quả đếm bào tử đợc ghi ở bảng sau
Bảng 5: Lợng bào tử (bt/g) khi lên men kết hợp với lợng mẫu cấy khác nhau
Chủng Đếm khuẩn lạc (CFU) = n x 107