a. Cám gạo
2.5. Tình hình nghiên cứu, sản xuất nấm Bào Ngƣ trong và ngoài nƣớc
2.5.1. Ngoài nƣớc
Hiện nay, nấm ăn được trồng ngày càng phổ biến trên thế giới, chủ yếu là các nước đang phát triển vì một số nguyên nhân: đây là loài duy nhất có khả năng phát triển trên các chất thải nông nghiệp, các cơ chất dùng trồng nấm có giá thành rất rẻ thậm chí là không phải tốn tiền mua và giúp bảo vệ môi trường thông qua việc tái sử dụng chất thải từ công - nông nghiệp, đặc biệt là nấm bào ngư (Pleurotus spp.) có khả năng sử dụng rất nhiều loại chất thải khác nhau làm cơ chất so với các loại nấm khác.
Nấm bào ngư đã được nghiên cứu và trồng thử nghiệm trên nhiều loại cơ chất khác nhau như mùn cưa, lá chuối, rơm lúa mì, lõi ngô, mụn dừa,… tại rất nhiều nước trên thế giới với các quy mô khác nhau. Badshah et al. (1992) đã thử nghiệm trồng
nấm bào ngư (Pleurotus spp.) trên các cơ chất như bã mía, lõi ngô, mùn cưa và rơm lúa mì. Sản lượng nấm đạt khoảng 185,0 – 432,8g/2kg cơ chất, trong đó cơ chất rơm lúa mì cho sản lượng cao nhất sau đó là bã mía, lõi ngô và cuối cùng là mùn cưa.
Hong et al. (1992) nghiên cứu về ảnh hưởng của dầu thực vật lên sự phát triển của tơ nấm Pleurotus sajor-caju. Cơ chất được sử dụng để sản xuất nấm là rơm rạ, vỏ trái đậu Hà Lan, vỏ trấu, vỏ trái cacao, bã cà phê. Kết quả tơ phát triển tốt nhất (12mg/ml) khi thêm dầu ép từ hạt bông. Hiệu suất sinh học (B.E = trọng lượng tươi của nấm/ trọng lượng khô của cơ chất x 100) thu được tương ứng đối với rơm rạ là 36,4%, vỏ trái đậu Hà Lan là 32,6%. Sản lượng cao nhất ở cơ chất được phối trộn bởi 50% rơm rạ và 50% bã bia là 109,6% theo sau là 50% vỏ trái đậu Hà Lan và 50% bã bia là 74,5%.
Nấm bào ngư trắng (Pleurotus florida) được trồng trong điều kiện phòng thí nghiệm, cho thấy kết quả tỉ lệ phần trăm sản lượng nấm tươi đạt cao nhất trên cơ chất lá chuối, sau đó là rơm lúa và thấp nhất là rơm lúa mì (Jiskani et al., 1999).
Ponmurugan et al. (2007) đã nghiên cứu ảnh hưởng của các cơ chất khác nhau lên sự phát triển và chất lượng của nấm bào ngư trắng. Thí nghiệm sử dụng rơm lúa gạo, rơm lúa miến, bã mía, mùn cưa, giấy thải làm cơ chất. Kết quả cho thấy nấm phát triển mạnh nhất trên rơm lúa gạo (268,94g/kg cơ chất khô), sau đó rơm lúa miến và thấp nhất là mùn cưa (80,33g/kg), giấy thải. Song song đó, các thành phần hóa sinh có trong nấm như đường, protein, amino acid, lipit,… cũng được tìm thấy cao nhất ở các tai nấm trồng trên cơ chất rơm lúa gạo tiếp sau là bã mía, mùn cưa và giấy thải. Protein lần lượt chiếm 33,33 và 28,38mg/g, lượng đường tổng cộng chiếm 25,73 và 22,34mg/g trong lượng nấm tươi trên cơ chất rơm lúa gạo và bã mía. Các nguyên tố vi lượng như P, Na, Ca và Mg cũng được tìm thấy cao nhất trên cơ chất rơm lúa gạo so với các cơ chất khác.
Trong khi đó, Prabhakaran et al. (2009) trồng bào ngư trắng trong điều kiện phòng thí nghiệm, trên cơ chất cotton thải và cám lúa mì năng suất đạt đến 74,35g nấm tươi/200g cơ chất, và chỉ thu được 51,38g nấm tươi/200g cơ chất rơm lúa gạo và cám. Ông cũng đề nghị lượng cám lúa mì bổ sung vào các cơ chất tốt nhất trong khoảng từ 5 - 10%.
Florida tại miền tây Java trên cơ chất mùn cưa bổ sung thêm cám gạo với các tỉ lệ lần
lượt là 5, 10, 15 và 20%. Kết quả đạt được cao nhất 2317,36g nấm tươi/kg cơ chất khô ở nghiệm thức mùn cưa kết hợp 5% cám gạo so với các nghiệm thức khác. Tương tự như vậy, các cơ chất khác như lá chuối khô, cỏ khô, rơm gạo, bã mía bổ sung 5 - 15% cám gạo cho năng suất từ 600 đến 1200g nấm tươi/kg cơ chất. Bên cạnh đó, Ahmed et al. (2009) xác định hiệu suất sinh học (B.E) của Pleurotus florida khi trồng trên chất thải cây đậu nành đạt năng suất 875,66g nấm tươi/kg cơ chất khô với giá trị B.E là 87,56%, hàm lượng protein đạt cao nhất 23,5% trọng lượng nấm khô. Theo sau đó là cơ chất đậu nành và rơm lúa gạo 852g/kg cơ chất và B.E là 85,20%. Thấp nhất khi trồng trên cơ chất rơm lúa gạo và rơm lúa mì chỉ 723,66g/kg, hàm lượng protein chiếm 22,66%.
Ngoài các phụ phẩm thông thường như rơm, mùn cưa, cotton,… Vetayasuporn (2007) đã sử dụng mụn dừa phối hợp cùng mùn cưa với các tỉ lệ lần lượt 25% : 75%, 50% : 50% và 75% : 25% trồng nấm bào ngư trắng (Pleurotus florida) năng suất đạt được là 559,67g/kg, 433,98g/kg và 443,94g/kg cơ chất khô, và khi trồng trên cơ chất 100% mụn dừa chỉ cho sản lượng 278,78g/kg, cũng như 100% mùn cưa chỉ đạt 536,85g/kg cơ chất khô.
2.5.2. Trong nƣớc
Ở Việt Nam, nghề trồng nấm khó có thể được xác định chính xác có từ khi nào. Tuy nhiên nó bắt đầu được biết đến và phát triển vào khoảng cuối những năm 60 và đầu năm 70 với một số trại nấm quy mô tương đối lớn ở Đồng Nai, Hóc Môn, Củ Chi,… nhưng chủ yếu trồng nấm mèo, nấm rơm và nấm đông cô. Nấm bào ngư (Pleurotus) bắt đầu trồng đầu tiên tại Thủ Đức vào cuối những năm 70 đầu năm 80. Các trại trồng nấm ở quy mô công nghiệp chủ yếu tập chung tại các tỉnh Lâm Đồng, Tây Ninh, Bình Dương, Đồng Nai với cơ chất chính cho nấm bào ngư là mùn cưa. Tại các tỉnh thuộc khu vực Đồng bằng sông Cửu Long, nghề trồng nấm bào ngư cũng đang dần được quan tâm và phát triển trong những năm gần đây. Nguồn thu nhập từ nấm đang tăng lên và riêng các tỉnh phía nam đã đạt được gần 30 triệu USD. Thị trường tiêu thụ ngày càng đa dạng, nhiều đơn đặt hàng ở khu vực Đông nam Á còn có Đài Loan, Nhật, các nước Châu Âu và Châu Mỹ cũng đang trở thành khách hàng của Việt Nam (Lê Duy Thắng et al., 2002).
Đầu năm 2006, sở Nông nghiệp Kiên Giang sản xuất thử 1000 bịch phôi nấm bào ngư nhật trên bụi mụn dừa nhưng chỉ khoảng 828 bịch cho ra nấm với tổng lượng thu 124kg, năng suất trung bình 150g nấm/bịch. Sau mỗi vụ lúa một số nông dân đã tận dụng rơm để trồng nấm bào ngư trắng, sau 45 ngày thu hoạch được khoảng 100kg nấm/100 bịch meo. Từ năm 2008 đến tháng 8/2010, Trung Tâm Khuyến nông Long An phối hợp với Sở Khoa Học Công nghệ Long An, trung tâm Nghiên cứu Sinh học Ứng dụng Thành phố Hồ Chí Minh (TP. HCM) thử nghiệm trồng nấm bào ngư trên cơ chất rơm và lục bình tại các huyện Châu Thành, Vĩnh Hưng, Tân Hưng. Kết quả báo cáo ở nghiệm thức rơm kết hợp lục bình (tỉ lệ 1:1), năng suất nấm bào ngư đạt 160kg/100 bịch meo giống, đối với từng cơ chất riêng lẽ chỉ cho năng suất 93kg/100 bịch meo.
Phòng Nông nghiệp Mỹ Tho (Tiền Giang) đã thử nghiệm trồng nấm bào ngư Nhật (P.abalonus) trên nguyên liệu mùn cưa và bào ngư trắng (P. florida) trên nguyên liệu rơm rạ đạt năng suất trung bình 600g nấm tươi/kg cơ chất. Hai xã Tường Lộc và Hoà Hiệp cũng đã thí nghiệm trồng nấm bào ngư Nhật trên giá thể rơm đạt hiệu quả tương đối cao với khoảng 500 - 800g nấm tươi/kg cơ chất. Năm 2004, Trung tâm Nghiên cứu Khoa học và Công nghệ Vĩnh Long đã nghiên cứu kỹ thuật nuôi trồng nấm bào ngư trên cơ chất rơm rạ, kết quả đạt 650g/kg rơm khô.
Trường Đại học Khoa học Tự nhiên TP. HCM thử nghiệm nuôi trồng nấm bào ngư trên bã mía, thân và lá bắp, thu được kết quả sau: với thân bắp, hiệu suất sinh học là 55,58%, ở lá bắp là 60,47% và đạt 86,63% trên bã mía. Bên cạnh đó, năng suất nấm trung bình đối với trường hợp trồng trên mùn cưa cao su khoảng từ 300 - 400g/bịch 1,5kg, nếu là mùn cưa tạp chỉ khoảng 200 - 300g/bịch 1,5kg. Trường hợp trên bã mía kết quả khả quan hơn, năng suất có thể đạt được 300 - 500g/bịch 1kg. Tuy nhiên, khi so sánh về chất lượng thì nấm trên mùn cưa vẫn cho tai nấm tốt hơn. Trên rơm, nấm dễ ra và nhiều, nhưng tai nấm thường nhỏ và mỏng (Lê Duy Thắng, 2006).
Châu Thị Chấp Ngãnh (2010) trồng nấm bào ngư trắng (Pleurotus floria) trên ba loại cơ chất: mùn cưa cao su, bã mía và mụn dừa với sự bổ sung thêm 8% cám gạo, 8% cám bắp và 4% cám trộn với 4% cám bắp. Kết quả cho thấy năng suất nấm trồng trên mùn cưa cao su và bã mía ở những nghiệm thức có bổ sung dinh dưỡng đạt từ 270 - 300g/kg cơ chất khô và cao hơn so với đối chứng. Kết quả nghiên cứu của Trầm Thị Thanh Hương (2009) trên bốn loại cơ chất: mùn cưa, cùi bắp, bã mía và rơm rạ có sự
điều chỉnh C/N bằng phân urea cũng cho kết quả cao ở nghiệm thức trồng bằng cùi bắp và bã mía, đạt hiệu suất sinh học trên 20%. Dương Hoàng Tú (2011) cũng đã nghiên cứu trồng nấm Bào Ngư Trắng (Pleurotus floria) trên ba loại cơ chất: Mùn cưa cao su, bã mía và mụn dừa với sự bổ sung dinh dưỡng gồm: cám gạo, bột bắp, đậu nành và urea. Kết quả cho thấy hiệu suất sinh học đạt cao nhất là trên giá thể bã mía bổ sung đậu nành và mùn cưa bổ sung đậu nành (63,2 – 67,0%), kế đến là nghiệm thức mùn cưa bổ sung cám gạo và bột bắp (60,7%).
CHƢƠNG 3. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1. Phƣơng tiện nghiên cứu
3.1.1. Địa điểm - Thời gian nghiên cứu
Địa điểm tiến hành thí nghiệm: Phòng thí nghiệm Công nghệ Sinh học Phân tử
Thực vật, Viện Nghiên cứu & Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ; DNTN Nấm Việt (Tổ 16, khuc vực Bình Trung, đường Võ Văn Kiệt, Quận Bình Thủy, Thành phố (Tp) Cần Thơ).
Thời gian: Đề tài thực hiện từ tháng 8/2013 - tháng 11/2013. 3.1.2. Vật liệu nghiên cứu
a.Vật liệu
Giống nấm thuần Bào Ngư Xám Nhật (Pleurotus sajor-caju) và mạt cưa cao su (thu mua tại Bình Phước) được cung cấp từ DNTN Nấm Việt.
Cám gạo và bột bắp được thu từ cơ sở thức ăn gia súc Hồng Phúc, đường 30/4 quận Ninh Kiều. Bã đậu nành thu mua từ hộ gia đình sản xuất đậu hủ, đường 3/2, quận Ninh Kiều, Tp Cần Thơ. Bã bia được phòng thí nghiệm cung cấp (thu mua tại Nhà máy bia Phong Dinh, đường 3/2, Quận Ninh Kiều, Tp Cần Thơ).
Vôi (CaCO3), DAP thu mua tại đại lý bảo vệ thực vật Hoàng Nguyễn, phường Long Hòa, quận Bình Thủy, Tp Cần Thơ.
Hình 4. Các chất dinh dƣỡng bổ sung
DAP Bột bắp
Cám gạo
b.Thiết bị - dụng cụ
Thiết bị vô cơ mẫu Foss, thiết bị chưng cất đạm Kjeltac 2300, lò nung cao độ Nabertherm (Đức), tủ sấy, tủ cấy, nồi khử trùng, lò khử trùng, ống nghiệm, đĩa petri, chai thủy tinh, kẹp, que cấy, dao cấy, bình hút ẩm, cân điện thử, cân đồng hồ, nút nhựa, bông, giấy, thun,…
c. Hóa chất
HCl, H2O2 30%, HNO3,H2SO4 đậm đặc, H3BO3,H2SO4 0.1N, NaOH 30%, HCl 1M, NaOH 1M, HCl đậm đặc, Bromocresolgreen, Metyl đỏ,...
3.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
3.2.1. Khảo sát ảnh hƣởng của chất dinh dƣỡng hữu cơ bổ sung đến sự phát triển và chất lƣợng của nấm
Mục đích: Xác định tỷ lệ dinh dưỡng (cám gạo, bột bắp, bã đậu nành, bã bia,
DAP) bổ sung tối ưu nhất cho năng suất nấm cao và chất lượng tốt.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí theo bảng 12. Thí nghiệm 1 nhân tố: cơ
chất và 6 mức bổ sung chất dinh dưỡng. Với 3 lần lặp lại và mỗi lần là 6 bịch phôi. Tổng cộng có 108 đơn vị thí nghiệm
Bảng 12. Bảng bố trí thành phần dinh dƣỡng bổ sung vào cơ chất mạt cƣa cao su
Cơ chất Nghiệm thức Dinh dƣỡng bổ sung
Mạt cƣa cao su
Đối chứng (-) Không bổ sung dinh dưỡng
Đối chứng (+) 4% cám gạo + 2% bột bắp + 0,2% DAP 1 2% cám gạo + 1% bã đậu nành + 0,2 % DAP 2 2% cám gạo + 2% bã bia
3 1% bã đậu nành + 1% bã bia
4 3% bã bia
Quy trình trồng nấm Bào Ngư Xám Nhật (P.sajor-caju) do DNTN Nấm Việt cung cấp theo quy trình của Lê Duy Thắng (2006) có chỉnh sửa.
Quy trình thực hiện:
Hình 5. Quy trình trồng nấm Bào Ngƣ Xám Nhật
(* Nguồn: Quy trình của Lê Duy Thắng (2006) có điều chỉnh)
Để nuôi trồng nấm Bào Ngư Xám (Pleurotus sajor-caju) cần phải có giống nấm, giống nấm bao gồm tất cả các dạng mang sinh khối của loài nấm Bào Ngư Xám
(Pleurotus sajor-caju).
Các bƣớc tiến hành: Theo quy trình của Lê Duy Thắng (2006) có điều chỉnh. a. Chuẩn bị giống cấp 1
Cấy giống đã phân lập (giống thuần) lên môi trường lúa ủ ở 28 – 30oC để sợi tơ phát triển trên môi trường tạo thành giống cấp 1.
Tùy theo các loài nấm khác nhau mà thành phần dùng để nhân giống cấp 1 cũng khác nhau, ở đây ta chọn môi trường lúa là môi trường dùng để nhân giống nấm Bào Ngư Xám Nhật (Pleurotus sajor-caju).
Mạt cưa xử lý với nước vôi 1%, tỉ lệ nước vôi với cơ chất
là 3:2 Giống thuần Giống cấp 1 Ủ đống mạt cưa 1 ngày Giống cấp 2 Đóng bịch , khử trùng 950C trong 10h Tưới đón quả thể Cấy giống vào bịch
phôi
Thu Nấm
- 1kg lúa đem phơi khô rồi nấu đến khi hạt lúa vừa nở. Sau đó phơi hoặc sấy khô đến độ ẩm thích hợp rồi bổ sung bột bắp với tỷ lệ 2% so với lúa, cho hỗn hợp vào chai thủy tinh, khử trùng ở 121oC trong 90 phút, lấy ra để nguội.
- Bước tạo giống cấp 1 được thực hiện trong tủ cấy vô trùng. Que cấy inox được khử trùng trên lửa đèn cồn nhiều lần rồi cho vào ống nghiệm cắt từng mẫu agar có chứa giống gốc (giống thuần đã phân lập). Sau đó chuyển vào chai đã chuẩn bị ở trên. Đem ủ ở nhiệt độ 26 – 28oC cho đến khi sợi tơ nấm phát triển tốt và lan sâu vào môi trường hạt thóc tạo thành giống cấp 1.
b. Chuẩn bị giống cấp 2
Môi trường được sử dụng để nhân giống nấm Bào Ngư Xám Nhật (Pleurotus sajor-caju) là môi trường que khoai mì. Vì ở môi trường này tơ nấm phát triển nhanh
và tuổi meo đồng đều hơn so với môi trường hạt. Thao tác cấy đơn giản.
Thân cây khoai mì được gọt sạch vỏ, cắt thành từng đoạn nhỏ khoảng 10cm, chẻ đôi (đối với những cây lớn thì chẻ làm bốn), phơi khô. Sau đó đem nấu với vôi cho sôi (tỉ lệ 1% vôi so với khối lượng que khoai mì ban đầu, thời gian đun khoảng 4 giờ), để qua đêm, vớt ra, rửa sạch và để ráo nước. Sau đó bổ sung thêm 1% đường pha chung với nước và tưới cho đều đủ độ ẩm, bổ sung thêm 2% cám gạo. Cho hỗn hợp vào chai nước biển, đậy bằng nút gòn và đậy phủ đầu chai lại bằng giấy báo, sau đó đem khử trùng ở 121oC trong 90 phút. Sau khi khử trùng xong lấy ra để nguội và quan sát sự nhiễm vi sinh vật ở các chai sau 2 - 3 ngày, loại bỏ các chai đã bị nhiễm.
Bước tạo giống cấp 2 được tiến hành trong tủ cấy vô trùng. Dùng muỗng inox nhỏ khử trùng thật kỹ trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội và múc khoảng 3 muỗng giống cấp 1 (từ môi trường lúa đã thực hiện từ bước trên và đã lên tơ hoàn chỉnh) cho vào chai chứa que khoai mì đã được chuẩn bị, đậy bằng nút gòn và đậy phủ đầu chai lại bằng giấy báo. Ủ ở nhiệt độ từ 26 – 28oC cho đến khi sợi nấm phát triển tốt và trắng cả chai khoai mì tạo thành giống cấp 2, quan sát và loại bỏ các chai bị nhiễm.
c. Sản xuất bịch phôi Xử lý nguyên liệu Xử lý nguyên liệu
Mạt cưa cao su được ủ đống với 1% nước vôi trong 1 ngày. Sau đó phối trộn dinh dưỡng theo bảng 12 và cho vào đầy bịch nylon, bịch phôi phải được đóng sao cho có độ rắn vừa phải (khoảng 1,2kg cơ chất ướt, ẩm 40 - 60%), đậy nút bông và giấy
báo, sau đó đem khử trùng ở 92- 980C trong 10 giờ.
Cấy vào bịch phôi
Bịch phôi sau khi khử trùng để nguội 1 ngày, sau đó tiến hành cấy giống cấp 2, giống cho vào mỗi bịch phôi 1 que khoai mì, dùng bông gòn không thấm (đã được khử trùng) đốt trên đèn cồn đậy lại.