2.2.4.I. Chiết Soxhlet và làm sạch theo TCVN 6134:1996 (Áp dụng quy trình chiết 2,4-D từ mẫu đất)
- Cách chiết
Cân 5 g dược liệu vào túi đựng mẫu và đặt vào ống Soxhlet, chiết vói 40 mL hỗn hợp aceton-hexan (1:1) trong 3 giờ. Chuyển dịch chiết vào bình cầu, tráng bình Soxhlet bằng 5 mL X 2 lần hỗn hợp dung môi. Cất quay ở áp suất giảm và ở nhiệt độ không quá 40°c tói khi dung môi hầu như bay hơi hoàn toàn. Thêm 1 mL aceton vào cắn, lắc nhẹ và tiếp tục làm bay hơi cho tới khi dung môi được loại bỏ hầu như hoàn toàn, hoà tan cắn trong 5mL aceton. - Làm sạch:
Lót một ít bông thấm nước vào đáy cột sắc ký bằng thuỷ tinh đường kính trong 1,2 cm. Chuyển 5 g natri sunfat khan vào cột. Cho tiếp 5 g silicagel hoạt hóa (loại dùng cho sắc ký có kích thước hạt 0,250 mm). Cho tiếp 5g natri suníat khan. Gõ nhẹ cột để lèn chặt các chất nhồi. Đặt một ít bông thấm nước lên mặt cột. Tẩm ướt cột bằng 10 mL dung môi aceton. Chuyển dịch chiết thu dược vào cột, dùng 5 mL aceton để tráng bình và chuyển hết vào cột. Bỏ phần dung môi dư chảy qua cột. Rửa giải hoạt chất bị hấp phụ trong cột bằng 30 mL hỗn hợp dung môi metanol-aceton (1:9). Hứng dung dịch chảy qua cột vào bình cầu. Cất quay làm bay hơi dung môi dưới áp suất giảm, nhiệt độ
40°c. Tiếp tục làm bay hơi bằng dòng khí khô.
2.2.4.2. Chiết lạnh và làm sạch bằng cột chiết pha rắn - Cách chiết
Cân 2,5 g bột dược liệu vào một bình nón nút mài 100 mL, thêm 15 mL aceton, lắc kỹ và để yên 30 phút, sau đó lắc trên máy siêu âm trong 10 phút. Chuyển vào bình chứa của máy khuấy trộn siêu tốc, tráng bình nón bằng 5 mL
X 2 lần aceton. Khuấy trộn trong 3 phút để làm đồng nhất. Lọc và tráng bình
chứa bằng 5 mL X 2 lần aceton. Cất quay ở áp suất giảm và ở nhiệt độ không
quá 40°c tới khi dung môi hầu như bay hơi hoàn toàn. Thêm 1 mL aceton vào cắn, lắc nhẹ và tiếp tục làm bay hoi cho tới khi dung môi được loại bỏ hoàn toàn. Hoà tan cắn trong 2,5 mL aceton.
- Làm sạch
Cột SPE (3mL; 0,5 g silicagel). Dung môi rửa giải là hỗn hợp aceton- methanol (9:1). Thêm 1 lớp Na2S04 khan dày khoảng 1 cm vào cột chiết, luyện cột bằng 2 mL hexan và 2 mL toluen. Chuyển 1 mL dịch chiết trên vào cột đã luyện. Để dịch chảy tự nhiên, sau đó tiến hành tráng, rửa cốc thêm với lmL x3 lần hỗn hợp dung môi rửa giải, chuyển lên cột. Thu hồi dịch rửa giải. Làm bay hơi dung môi dưới luồng khí nitơ tới cắn. Hòa tan cắn trong 1 mL pha động.