Trong 91 con chim sẻ được xét nghiệm ở thung lũng Jordan (Israel), người ta xác định tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon là 79% [36].
Ở một số gà con 9 - 20 ngày tuổi tại Stewart Island, đã phát hiện 100% số mẫu xét nghiệm dương tính với đơn bào Leucocytozoon [37].
Ở Liên Xô, Nikitin N. K. và Artemenko M. N. (1927) trong khi kiểm tra máu chim trời ở Ucrain đã tìm thấy Leucocytozoon ở 7% số chim (trích Orlov F. M.1975, [17]).
Huchzermeyer F. W. và Sutherland B. (1978) [25] lần đầu tiên đã phát hiện được Leucocytozoon smithi ở phía bắc Châu Phi và tác giả cho rằng Simulium nigritarse là ký chủ trung gian của ký sinh trùng này.
Morii T. và cs (1984) [40] đã thử nghiệm lây nhiễm những thoi trùng
Leucocytozoon được chiết từ tuyến nước bọt của dĩn, kết quả nhận thấy: các thoi trùng được phân lập vào ngày thứ 2 sau khi dĩn hút máu gia cầm bệnh thì không lây nhiễm được cho gà. Các thoi trùng được phân lập vào ngày thứ 3 thì có khả năng gây nhiễm cho gà.
Morii T. và cs (1986) [30] đã phân lập các thoi trùng từ tuyến nước bọt của Culicoides arakawa và gây bệnh cho gà. Kết quả thấy thoi trùng
xuất hiện trong ngoại vi máu gia cầm vào ngày thứ 15 và biến mất vào ngày thứ 26 sau khi gây nhiễm. Kháng nguyên hòa tan được tìm thấy trong huyết thanh của gà gây nhiễm trong khoảng 10 - 17 ngày và kháng thể tương đồng xuất hiện ở ngày thứ 17 sau gây nhiễm.
Nakamura K. và cs (2001) [32] nghiên cứu ảnh hưởng của
Leucocytozoon trên đàn gà đẻ thấy: Leucocytozoon ảnh hưởng nghiêm trọng đến khả năng sản xuất trứng của gà, thậm chí có thể ngừng đẻ. Tìm thấy một số lượng lớn thể phân liệt thế hệ 2 trong buồng trứng và ống dẫn trứng. Gây phù và làm giảm áp lực của các mô lân cận với các mô có đơn bào ký sinh.
Steele E. J. và cs (2001) [37] cho biết: sự phát triển của
Leucocytozoon smithi có những nét tương đồng với sự phát triển của các
loài Plasmodium và Haemoproteus trong ký chủ trung gian
Bằng phương pháp sử dụng chuỗi polimerasa (PCR) giao thức là sự kết hợp của 3 chuỗi PCR riêng biệt của các loài Haemoproteus, Plasmodium và
Leucocytozoon, Hellgren O. và cs (2004) [23] đã tìm thấy 22 loài ký sinh trùng khác nhau gồm có 4 loài Haemoproteus, 8 loài Plasmodium và 10 loài
Leucocytozoon trong 6 loài chim tước được nghiên cứu.
Shane S. M. (2005) [36] cho biết: việc kết hợp Clopidol anticoccidial trong thức ăn chăn nuôi với các hàm lượng khác nhau từ 125 - 150 ppm đã ngăn chặn được Leucocytozoon ở gà tây tại Hoa Kỳ.
Omori S. và cs (2008) [33] đã phân tích bộ gen của Leucocytozoon
caulleryi. Kết quả đã mô tả được bộ gen nhiễm sắc thể của Leucocytozoon
caulleryi với chiều dài 5,959 bp.
Có thể sử dụng kết hợp pyrimethamine (1 ppm) với sulfadimethoxin (10 ppm) trong thức ăn chăn nuôi để phòng bệnh do Leucocytozoon
caulleryi và sử dụng Clopidol (0,0125 - 0,025%) trong thức ăn để phòng bệnh do Leucocytozoon smithi gây ra [39].
Hoạt động chăn nuôi vịt tại các bán đảo phía Bắc của Michigan - Seney đã bị ngừng trệ do Leucocytozoon đã làm chết một số lượng lớn vịt, gây thiệt hại nghiêm trọng về kinh tế cho người chăn nuôi [40].
đang bị đe dọa tấn công bởi một loài ký sinh trùng đường máu thuộc giống
Leucocytozoon, gây nhiều thiệt hại nghiêm trọng.
Omori S. và cs (2010) [34] đã sử dụng phương pháp phân tích đếm tế bào dòng chảy, tách giao bào Leucocytozoon để xác định sự có mặt của đơn bào trong máu. Phương pháp này có thế xác định được những mẫu máu bị nhiễm ký sinh trùng đường máu mà các phương pháp thông thường khác không tìm thấy được.
Hill A. G. và cs (2010) [24] sử dụng phương pháp PCR để kiểm tra 107 mẫu máu chim cánh cụt mắt vàng từ 4 khu vực riêng biệt trên khu vực phía nam đảo Oamaru. Kết quả kiểm tra thấy 83% số mẫu kiểm tra là dương tính với Leucocytozoon.
Phần 3
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1. Đối tượng nghiên cứu
- Gà nuôi tại 4 xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
- Bệnh đơn bào Leucocytozoon ở gà.
3.2. Vật liệu nghiên cứu
* Vật liệu nghiên cứu
- Gà khỏe và gà bị bệnh Leucocytozoonosis để thử nghiệm hiệu quả điều trị của một số phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà.
- Mẫu máu gà ( để xác dịnh tình nhiễm Leucocytozoon )
* Dụng cụ và hoá chất
- Kính hiển vi quang học, kính lúp - Bộ kim lấy máu
- Thuốc điều trị bệnh Leucocytozoon ở gà. - Thuốc nhuộm giemsa
- Dầu Bạch dương, cồn 960, cồn methanol - Hoá chất và các dụng cụ thí nghiệm khác
3.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
3.3.1. Địa điểm nghiên cứu
- Đề tài được thực hiện ở các nông hộ, các trại chăn nuôi gà gia đình và tập thể với các quy mô khác nhau tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
- Địa điểm xét nghiệm mẫu:
Phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
3.3.2. Thời gian nghiên cứu:
3.4. Nội dung nghiên cứu
3.4.1. Xác định thành phần loài Leucocytozoon ký sinh ở gà nuôi tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
Các tiêu bản máu sau khi xét nghiệm thấy có đơn bào đường máu ký sinh, chúng tôi tiến hành phân loại theo căn cứ vào hình thái, kích thước, của các loại đơn bào đã phát hiện được theo khóa định loại của Levine N. D. (1985).
3.4.2. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh Leucocytozoon ở gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà tại các xã và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo địa hình
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tháng trong năm - Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tuổi gà
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo phương thức chăn nuôi - Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo điều kiện vệ sinh thú y - Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo loại gà
3.4.3. Nghiên cứu phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà tại
3.4.3.1. Thử nghiệm một số phác đồđiều trị bệnh Leucocytozoon cho gà
Diễn giải Lô 1 Lô 2 Lô 3
Số gà thí nghiệm 5 5 5 Phác đồ sử dụng và liều lượng - Daimentol Soda (1 - 2 g/ 1lít nước) - Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước) - Sutrim - NT (1 g/1lít nước) - Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước) - T - coryzin (1,5 - 2g/ lít nước) - Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước) Nghiên cứu độ an toàn của 3 phác đồ thử nghiệm điều trị bệnh
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.1. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
3.5.1.1. Bố trí thu thập mẫu
- Bố trí lấy mẫu máu gà theo phương pháp lấy mẫu phân tầng.
- Huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên: chọn 4 xã, mỗi xã lấy 4 thôn, mỗi thôn lấy 5 hộ, mỗi hộ lấy 4 - 5 mẫu, mỗi gà làm 3 tiêu bản máu.
- Trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên: lấy 80 mẫu, mỗi gà làm 3 tiêu bản máu.
3.5.1.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Lecocytozoon ở gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường
Đại học Nông Lâm Thái Nguyên * Phương pháp thu thập mẫu
Mẫu máu được thu thập ngẫu nhiên từ gà nuôi tại các nông hộ, các trại chăn nuôi gà ở các xã của huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
Chuẩn bị những phiến kính mới đã được tẩy mỡ bằng cách ngâm và rửa xà phòng trong một ngày, sau đó ngâm trong cồn 960 trong 3 giờ rồi lau khô bằng khăn mềm không có xơ. Đồng thời, chọn những lamen kích thước 2 x 2 cm, rìa thật phẳng và nhẵn.
Trước khi lấy mẫu máu xét nghiệm, quan sát kỹ các biểu hiện lâm sàng của gà. Dùng kim lấy 1 giọt máu tươi của gà tại tĩnh mạch cánh, đặt lên phiến kính, cách bờ phiến kính khoảng 1 cm. Đặt cạnh của một lamen lên giọt máu, nghiêng 450 với phiến kính. Khi giọt máu đã tràn ra khắp cạnh của lamen thì đẩy lamen về phía trước, làm cho máu được dàn thành một lớp mỏng và đều trên phiến kính. Cố định tiêu bản bằng cồn methanol. Làm 3 tiêu bản máu/ gà. Tiêu bản được ghi số thứ tự bằng bút chì mỡ. Ghi nhật ký thí nghiệm các thông tin: chủ hộ, địa chỉ, ngày lấy mẫu, giống gà, tuổi gà, phương thức chăn nuôi, điều kiện vệ sinh thú y, các biểu hiện lâm sàng (nếu có).
* Chuẩn bị thuốc nhuộm giemsa cơ bản
- Giemsa bột: 3,8 gam
- Cồn etylic tuyệt đối: 375 ml - Glycerin: 125 ml
Dùng đũa thủy tinh khuấy kỹ rồi để vào tủ ấm 37oC với thời gian 48 h, sau đó lọc qua giấy lọc, bỏ cặn và bảo quản trong lọ thủy tinh màu trung tính, có nút kín.
* Phương pháp nhuộm giemsa
Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008)[8] cho biết: Nhuộm tiêu bản máu bằng thuốc nhuộm giemsa gồm 3 bước như sau:
- Bước 1: Pha thuốc nhuộm giemsa + Giemsa cơ bản: 1 phần
+ Nước cất trung tính (pH = 7,2): 9 phần
Nước cất để sẵn trong 1 cốc nhỏ có mỏ (100 ml), lấy dung dịch giemsa cơ bản bằng 1 pipet, nhỏ chậm giemsa vào cốc nước, không được lắc cốc.
- Bước 2: Đổ chậm dung dịch nhuộm vào hộp nhuộm cho ngập các tiêu bản, đậy nắp hộp nhuộm để tránh bụi
Thời gian nhuộm 45 - 50 phút - Bước 3: lấy tiêu bản
Dùng 1 pince kẹp, cặp lần lượt từng tiêu bản và để nghiêng dưới vòi nước cất chảy nhẹ (pH = 7,2) cho trôi hết thuốc nhuộm dư thừa. Sau đó dựng nghiêng tiêu bản vào cạnh 1 cái hộp, để khô tự nhiên.
* Phương pháp kiểm tra tìm Leucocytozoon trên tiêu bản máu nhuộm giemsa
Nhỏ 1 giọt dầu bạch dương lên tiêu bản, kiểm tra tiêu bản dưới kính hiển vi vật kính dầu, độ phóng đại 10 x 90 hoặc 10 x 100 để tìm Leucocytozoon.
Những mẫu máu tìm thấy đơn bào Leucocytozoon được xác định là có nhiễm, ngược lại là không nhiễm.
Cường độ nhiễm được xác định bằng tỷ lệ % số hồng cầu có đơn bào ký sinh và quy định các mức cường độ nhiễm: nhẹ, trung bình và nặng.
≤ 5% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm nhẹ (+)
> 5% - 10% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm trung bình (++) > 10% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm nặng (+++)
3.5.2. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tháng trong năm
3.5.2.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi dự kiến thu thập mẫu máu gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên theo tháng trong thời gian nghiên cứu gồm:
- Tháng 6 - Tháng 7 - Tháng 8 - Tháng 9 - Tháng 10
3.5.2.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tháng trong năm
Tiến hành thu thập mẫu máu gà, phết kính, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon trong máu gà ở các tháng khác nhau theo phương pháp như đã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.3. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tuổi gà
3.5.3.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi dự kiến thu thập mẫu máu gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên theo 4 lứa tuổi như sau:
≤ 2 tháng tuổi > 2 - 4 tháng tuổi > 4 - 6 tháng tuổi > 6 tháng tuổi
3.5.3.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo các lứa tuổi
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các lứa tuổi khác nhau theo phương pháp như đã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.4. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo phương thức chăn nuôi
3.5.4.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi dự kiến thu thập mẫu máu gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên theo 3 phương thức chăn nuôi như sau:
- Phương thức nuôi nuôi công nghiệp - Phương thức nuôi bán công nghiệp - Phương thức nuôi truyền thống
3.5.4.2 Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo phương thức chăn nuôi
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các phương thức chăn nuôi khác nhau theo phương pháp như đã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.5. Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tình trạng vệ sinh thú y
3.5.5.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi dự kiến thu thập mẫu máu gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên theo 3 mức tình trạng vệ sinh thú y (VSTY) như sau:
- VSTY tốt: chuồng trại cao ráo, thoáng mát, sạch sẽ, thường xuyên quét dọn chuồng nuôi và khu vực xung quanh chuồng nuôi, định kỳ phun thuốc khử trùng, tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi, phát quang cây cỏ, khơi thông cống rãnh.
- VSTY trung bình: không thường xuyên quét dọn chuồng nuôi, khu vực xung quanh chuồng nuôi còn có những vũng nước đọng, không thường xuyên tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi và phát quang cây cỏ, không thường xuyên khơi thông cống rãnh ở gần khu vực chăn nuôi.
- VSTY kém: Chuồng nuôi và khu vực xung quanh chuồng nuôi ẩm thấp, có nhiều vũng nước đọng, có nhiều bụi cây rậm rạp, không tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi, không khơi thông cống rãnh.
3.5.5.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo tình trạng VSTY
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các tình trạng VSTY khác nhau theo phương pháp như đã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.6. Bố trí theo dõi và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo loại gà
3.5.6.1. Bố trí lấy mẫu
Chúng tôi dự kiến thu thập mẫu máu gà tại một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên và trại gà tại trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên theo 3 loại gà: gà ngoại, gà địa phương, gà lai.
3.5.6.2. Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo loại gà
Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm đơn bào Leucocytozoon ở gà theo từng loại gà theo phương pháp như đã trình bày ở mục 3.5.1.2
3.5.7. Phương pháp đánh giá hiệu lực và độ an toàn của 3 phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon trên gà thí nghiệm
* Bố trí thí nghiệm
Bố trí thí nghiệm sử dụng 3 phác đồ điều trị cho những gà có kết quả xét nghiệm máu là nhiễm Leucocytozoon với cường độ nhiễm nặng theo sơ đồ sau:
Diễn giải Lô 1 Lô 2 Lô 3
Số gà thí nghiệm 5 5 5 Phác đồ sử dụng và liều lượng