3.1. Xử lí mẫu, chiết tách, phân lập các họp chất
Vỏ cây Tetradỉum glabrifolium được phơi khô, nghiền nhỏ thu được
2,4 kg bột khô. Bột này được ngâm chiết metanol nóng (3 lần X 5 lít) trên thiết bị chiết siêu âm (ở 50°C, mỗi làn 1 giờ). Các dịch chiết được gom lại, lọc qua giấy lọc và cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được (127 g) cặn chiết metanol. Cặn chiết này được hòa tan vào 2 lít nước cất và tiến hành chiết phân bố lần lượt với hexan, etyl axetat. Các dịch chiết hexan, etyl axetat được cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được các cặn dịch hexan (TGV-H, 61g), etyl axetat (TGV-E, 52g) và lớp nước (TGV-N).
Cặn chiết etyl axetat TGV-E (52 g) được hòa tan bằng metanol, tẩm silica gel (tỉ lệ 1:1,2), cất loại dung môi đến khô, nghiền mịn. Hỗn họp này được phân tách thành bốn phân đoạn TGV-E1, TGV-E2, TGV-E3 và TGV- E4 trên cột sắc ký silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải gradient có độ phân cực tăng dàn hexan/axeton: 50/1 —> 1/1 (v/v). Phân đoạn TGV-E1 (13 g) tiếp tục được phân tách thành 4 phân đoạn TGV-E1A, TGV-E1B, TGV-E1C và TGV-E1D trên cột sắc ký silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải hexan/axeton: 10/1 (v/v). Họp chất 1 thu được sau khi tinh chế phân đoạn TGV-E1D (1,8 g) trên cột sắc ký silica gel pha thường sử dụng hệ dung môi rửa giải hexan/etylaxetat: 6/1 (v/v) kết hợp với sắc ký cột silica gel pha đảo với hệ dung môi rửa giải bằng metanol/axeton/nước: 8/1/2 (v/v/v).
r
Phân đoạn TGV-E4 (17 g) tiếp tục được phân tách thành 4 phân đoạn TGV-E4A, TGV-E4B, TGV-E4C và TGV-E4D bằng sắc ký cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải clorofoc/metanol: 30/1 (v/v). Hợp chất 2 thu được sau khi tinh chế phân đoạn TGV-E4B (2,3 g) bằng cột sắc ký silica gel pha thường sử dụng hệ dung môi rửa giải hexan/axeton: 4/1 (v/v) kết hợp
r
Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tôt nghiệp
với sắc ký cột silica gel pha thường sử dụng hệ dung môi rửa giải hexan/etylaxetat: 2/1 (v/v).
Sơ đồ 3.1: Sơ đồ phân lập họp chất 1
r
Sơ đồ 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất 2 3.2. Hằng số vật lý và dữ liệu phổ các họp chất [3]