Chẩn đoán LXMKDH qua huyết tủy đồ và được xác định khi có sự
hiện diện của NST Ph1 và/hoặc các bản sao bcr-abl
1.6.2.1. Xét nghiệm di truyền tế bào
- Nhiễm sắc thể đồ: Sự hiện diện NST Ph1 thường được phát hiện qua
xét nghiệm NST đồ trên mẫu tủy hoặc máu ngoại vi với phương pháp nhuộm băng, trong đó băng G được sử dụng nhiều nhất. Phân tích NST đồ có thể
phát hiện các bất thường NST đi kèm và các chuyển vị NST phức tạp. Xét
nghiệm này được quan sát trên 20 tế bào đang gián phân.
- Phương pháp lai huỳnh quang tại chỗ (FISH; Fluorescence in situ
hybridization): sử dụng các đoạn dò BCR và ABL định vị đặc hiệu trên NST số 9 và 22 và các đoạn dò này gắn với chất nhuộm huỳnh quang khác nhau. Các đoạn dò được cho lai hóa với tế bào của bệnh nhân và quan sát dưới kính
hiển vi huỳnh quang. FISH rất nhạy để phát hiện chuyển đoạn NST Ph1 và
được dùng để theo dõi điều trị trong trường hợp không định lượng được số
bản sao bcr-abl. FISH phát hiện được chuyển đoạn NST phức tạp không nhận ra qua NST đồ và phát hiện mất đoạn của ABL trên NST số 9.
1.6.2.2. Các xét nghiệm sinh học phân tử
Các xét nghiệm này được dùng để xác định loại bản sao bcr-abl và định lượng số lượng bản sao để giúp theo dõi đáp ứng sinh học phân tử trong quá
- RT- PCR (Reverse transcriptase- Polymerase chain reaction)
RNA được chuyển thành cDNA gọi là phản ứng reverse transcriptase. Sau đó cDNA được khuyếch đại sử dụng các đoạn mồi xuôi và mồi ngược đặc hiệu cho BCR và ABL. Sản phẩm PCR được điện di trên thạch và kết quả được quan sát bằng tia cực tím. RT –PCR được dùng để xác định loại bản sao
bcr-abl mà bệnh nhân có như b2a2, b3a2, e1a2, e19a2. Phương pháp này không định lượng số bản sao bcr-abl.
- RQ- PCR (Real time quantitative- polymerase chain reaction)
Phương pháp RQ-PCR thường được sử dụng để chẩn đoán và theo dõi
đáp ứng của bệnh. Xét nghiệm RQ-PCR khi chẩn đoán cho biết vạch ranh
giới đặc hiệu để theo dõi đáp ứng sinh học phân tử và xác định mức độ đáp ứng điều trị. Có nhiều phương pháp RQ-PCR để phát hiện các bản sao bcr- abl, tùy vào loại máy PCR, hóa chất, nguồn gốc mẫu và chọn lựa gen chứng.
Các kết quả có thể là tỷ số của số bản sao bcr-abl/gen chứng, phần trăm tỷ số,
sự khác biệt giữa các giá trị ngưỡng, hoặc biểu diễn bằng sự giảm các bản sao
theo log so với một giá trị chuẩn. Tất cả các khác biệt này làm phức tạp cho
việc so sánh các kết quả RQ-PCR giữa các phóng xét nghiệm khác nhau. Một thang điểm quốc tế (IS: International scale) được đề nghị để diễn đạt kết quả
bệnh tồn lưu tối thiểu (MRD: minimal residual disease) theo cách chuẩn hóa. IS dựa vào 2 giá trị xác định: đường cơ bản được chuẩn hóa đại diện 100%
nồng độ bcr-abl lúc chẩn đoán và sự giảm xuống 3 log tương ứng đáp ứng tốt
về sinh học phân tử bằng với nồng độ bản sao bcr-abl 0,1% trên IS.
Khi bước sang giai đoạn chuyển cấp, việc chẩn đoán xếp loại tương tự như LXM cấp nguyên phát.