5. Điểm mới của đề tài
3.1. Phân lập chủng nấm nem có khả năng lên men rƣợu vang từ dịch
nho Cabernet sauvignon
Để phân lập các chủng nấm men ngƣời ta sử dụng môi trƣờng Haxen thanh trùng theo phƣơng pháp Pasteur sau đó chia vào các đĩa peptri đã vô trùng.
Tiến hành: Chuẩn bị 10 ống nghiệm định mức, dùng pipet hút 9ml nƣớc cất vào mỗi ống. Lấy 1ml dịch quả cho vào ống thứ nhất (dịch pha loãng ở 10- 1). Sau đó lại hút 1ml dịch ở ống thứ nhất cho vào ống thứ 2 đƣợc dung dịch có độ pha loãng 10-2. Làm tƣơng tự với các ống tiếp theo cho đến ống 9 sẽ có độ pha loãng 10-9. Có thể chọn ở các nồng độ 10-6
– 10-9. Dùng giấy báo gọi lại và nuôi trong tủ ấm ở nhiệt độ từ 25 – 300
C. Sau 4 – 5 ngày lấy ra quan sát [16]. Trên bề mặt thạch ta thấy xuất hiện những khuẩn lạc, dựa vào hình thái khuẩn lạc nấm men ta chọn những khuẩn lạc to, tròn, lồi, nhẵn bóng có màu trắng đục đặc trƣng cho nấm men.
Kết quả phân lập, chúng tôi chọn đƣợc ra 15 mẫu nấm men (kí hiệu từ T1 đến T15). Sau khi đo kích thƣớc khuẩn lạc chúng tôi chia số mẫu trên thành các nhóm đƣợc miêu tả tại bảng sau:
Bảng 3.2. Đặc điểm hình thái và kích thước của nấm men trong các mẫu phân lập
Nhóm Mẫu nấm men Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Kích thƣớc
1 T2, T8, T13, T14
Tròn, màu trắng ngà, bề mặt trơn nhẵn, nhìn nghiêng lồi, không có tâm, bờ không có răng cƣa
1.5 – 2mm
2 T3, T6, T7, T10, T12, T15
Tròn, màu trắng ngà, bề mặt trơn nhẵn, nhìn nghiêng lồi, không có tâm, bờ không có răng cƣa
2 – 2.5mm
3 T1, T4, T5, T9, T11
Tròn, màu trắng ngà, bề mặt trơn nhẵn, nhìn nghiêng lồi, không có tâm, bờ không có răng cƣa
>2.5mm
Từ kết quả thể hiện qua bảng trên, chúng tôi tiến hành tuyển chọn đƣợc 5 mẫu khuẩn lạc có kích thƣớc lớn đƣờng kính >2mm, trơn, bóng, nhẵn đƣợc kí hiệu là T1, T4, T5, T9, T11dùng làm đối tƣợng nghiên cứu tiếp theo và tạm gọi là các chủng nấm men.
Sau đó các khuẩn lạc này đƣợc cấy sang các ống thạch nghiêng đã có sẵn môi trƣờng Hansen vô trùng để giữ giống, sau 2 – 3 ngày lấy ống thạch nghiêng ra quan sát.
Hình 3.2. Cấy truyền chủng nấm men T1, T4, T5, T9, T11 trên môi trường thạch nghiêng
Kết quả, chúng tôi đã phân lập 15 mẫu nấm men, dựa vào hình thái và kích thước khuẩn lạc tôi chọn sơ bộ được 5 chủng là T1, T4, T5, T9, T11.