3. 2 Nghiên cứu SKD nang Salbutamol TSKD và so sánh vớ
3.2. 1 Xây dựng phương pháp định lượng Salbutamol
3.2.1.1. Xử lý mẫu huyết tương:
Theo phương pháp mô tả ở mục 2.2.3.2, qua khảo sát đã lựa chọn phương pháp chiết pha rắn. Chúng tôi xử lý mẫu huyết tương và chiết xuất salbutamol từ huyết tương theo các bước sau đây.
Chiết tách salbutamol từ huyết tương chó bằng chiết xuất pha rắn: - Cột SPE: Strata X-C 500 mg/6 ml.
- Hoạt hoá cột: 6 mL MeOH x 2 lần.
6 mL đệm phosphat pH 6.5 x 2 lần
- Nạp mẫu: 1 mL mẫu huyết tương + 2 mL đệm phosphat pH 6.5 cho chảy chậm qua cột trong khoảng thời gian 10 phút.
- Rửa tạp: 3 mL đệm phosphat pH 6.5 x 2 lần.
1 mL MeCN
3 mL MeOH.
Hút chân không (-15 Bar x 5 phút).
- Rửa giải salbutamol: 3 mL NH4OH 5% (v/v) trong MeOH cho chảy chậm qua cột trong vòng 15 phút. Hút chân không.
Dung môi rửa giải thu được, tiến hành cô đuổi dung môi (600C, khí N2) thu cắn. Hoà tan cắn trong 1 mL pha động. Lọc qua màng lọc 0,45 àm. Dịch lọc thu được dùng để tiêm sắc ký.
Xử lý các mẫu huyết tương trắng, chuẩn bằng phương pháp xử lý mẫu đã lựa chọn ở trên. Sắc ký dịch thu được bằng các điều kiện sắc ký khác nhau như: cột C18 của một số hãng; thành phần, tỷ lệ pha động khác nhau, kết quả cho thấy điều kiện sắc ký dưới đây là phù hợp nhất trong điều kiện phòng thí nghiệm hiện có:
- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Shimadzu Prominence. - Cột: Gemini C18e, 250 x 4 mm; 5àm. Nhiệt độ 400C
- Pha động: MeCN : MeOH : Đệm phosphat pH 3,0 (chứa 25mM amoni dihydrophosphat, 2mM natri octan sulfonic acid; triethylamin 0,1%) tỷ lệ 14 : 10: 76. Tốc độ dòng 1 ml/phút.
- Detector huỳnh quang: λex = 265 nm; λem = 310 nm; Sens.: Medium; Gain x 4.
- Thể tích tiêm mẫu: 50 àL.