Tiến hành :
- Pha dung dịch chuẩn:
Cân chính xác khoảng 25mg Acid corosolic cho vào bình định mức 25,0ml. Tiêm khoảng 10ml MeOH vào, lắc siêu âm trong 15 phút, thêm MeOH đến vạch (dung dịch gốc). Từ dung dịch gốc này pha loãng thành dung dịch chuẩn có nồng độ khoảng 0,02mg/ml, lọc qua màng lọc 0,45 m.
- Pha dung dịch thử:
Cân khoảng 5g bột dược liệu đã xay phá, cho vào ống chiết Soxhlet, ngâm với 80ml EtOH 70% trong khoảng 30 phút. Cho vào bình tròn 500ml khoảng 280ml EtOH 70%, lắp bộ chiết Soxhlet, đun trên bếp, chiết đến khi dịch trong ống chiết không màu. Dịch chiết được cất quay chân không đến khi thu được khoảng 50ml dịch, cô dịch trên bếp cách thủy đến khi thu được cắn khô. Hòa tan nóng lượng cắn khô với khoảng 20ml MeOH, tráng rửa cắn, gộp vào bình định mức 50ml. Lắc siêu âm dịch khoảng 15 phút, bổ sung MeOH vừa đủ bình định mức 50ml. Lọc dịch qua giấy lọc, bỏ dịch lọc đầu. Lấy chính xác 5,0 ml dịch lọc cho vào bình định mức 20ml, thêm MeOH tới vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 m.
- Áp dụng phương pháp trên 14 mẫu nghiên cứu. Tiêm sắc ký dung dịch chuẩn acid corosolic 0,02 mg/ml và 13 dung dịch thử trong cùng điều kiện sắc ký, kết quả sắc ký đồ thu được thể hiện trong hình 3.1 và bảng 3.1
Mẫu chuẩn acid corosolic nồng độ 0,02mg/ ml
Mẫu chuẩn acid corosolic nồng độ 0,05mg/ ml
Mẫu chuẩn acid corosolic nồng độ 0,1mg/ ml
Mẫu chuẩn acid corosolic nồng độ 0,3mg/ ml
Mẫu chuẩn acid corosolic nồng độ 0,5mg/ ml Mẫu thử BLL- NA Mẫu thử BLO- ĐL Mẫu thử BLN- ĐL
Mẫu thử BLN- QN
Mẫu thử BLN- NĐ
Mẫu thử BLN- HN1
Mẫu thử BLN- HN3
Mẫu thử BLN- HN4
Mẫu thử BLN- HN6
Mẫu thử BLN- HN7
Mẫu thử BLN- HN8
Hình 3.1.Sắc ký đồ dịch chiết lá Bằng lăng
Các thông số mô tả sắc ký đồ của mẫu chuẩn acid corosolic 0,02 mg/ml và 13 mẫu thử được thể hiện trong bảng 3.1:
Bảng 3.1. Các thông số mô tả sắc ký đồ của 13 mẫu nghiên cứu
STT Ký hiệu mẫu Thời gian lưu (phút)
Diện tích pic (mAU.s)
1 Mẫu chuẩn acid
corosolic 0,02mg/ml 19,1 236,33
2 Mẫu chuẩn acid
corosolic 0,05mg/ ml 19,1 596,23
3 Mẫu chuẩn acid
corosolic 0,1mg/ ml 19,1 1202,34
4 Mẫu chuẩn acid
corosolic 0,3mg/ ml 19,1 3141,09
5 Mẫu chuẩn acid
corosolic 0,5mg/ ml 19,1 5783,16 6 BLL- NA 19,1 1899,19 7 BLO- ĐL 19,1 1527,58 8 BLN- ĐL 19,1 873,98 9 BLN- QN 19,1 248,41 10 BLN- NĐ 19,3 13696,60 11 BLN- HN1 19,1 420,86 12 BLN- HN2 19,2 1701,49 13 BLN- HN3 19,1 1269,91 14 BLN- HN4 19,1 216,07 15 BLN- HN5 19,1 197,32 16 BLN- HN6 19,2 3000,49 17 BLN- HN7 19,2 4913,60 18 BLN- HN8 19,3 14288,81
Nhận xét:
Tiến hành sắc ký theo chương trình đã nêu trên, xác nhận được trong cả 13 mẫu Bằng lăng đã thu hái đều có pic sắc ký tương đồng về hình dạng và tương ứng về