i) Phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
3.4. Thành phần trong dịch chiết clorofom
3.4.1. Hàm lượng
a. Chiết bằng dung môi hữu cơ:
Sau khi chiết với n-hexan, dịch nước thu được chiết với CHCl3, quá trình chiết xảy ra nhanh chỉ sau 3 lần chiết đã có thể thu được dịch clorofom không màu. Dịch clorofom thu được sau khi chiết, thực hiện cô đuổi, thu hồi dung môi ở nhiệt độ khoảng 50 - 60oC. Từ 75ml dịch clorofom thu được 5ml dịch clorofom đậm đặc.
b. Chiết bằng dung dịch axit:
Khi hòa tan cao etanol vào dung dịch HCl 5%, ngâm qua đêm, lọc bỏ bã, chiết bằng clorofom thì dịch CHCl3 thu được không màu.
3.4.2. Trạng thái vật lý
a. Chiết bằng dung môi hữu cơ:
Dịch chiết clorofom có màu vàng, dịch chiết clorofom đậm đặc có màu vàng nâu. Không có tủa xuất hiện trong dịch chiết clorofom.
Hình 13: Dịch chiết clorofom
b. Chiết trong dung dịch axit:
Dịch chiết clorofom không màu, không có kết tủa trong dịch đó. Mặc dù không có màu nhưng có thể clorofom hòa tan được những hợp chất hữu cơ mà tan tốt trong CHCl3 hơn trong axit.
3.4.3. Phản ứng với thuốc thử
a. Chiết bằng dung môi hữu cơ
Khi thử thuốc thử Mayer và Wagner với dịch chiết clorofom thì phản ứng cho kết quả khác nhau. Ở thuốc thử Wagner, có kết tủa nâu xuất hiện sau thời gian khoảng 30 phút, dung dịch tách lớp không rõ ràng, bởi vì thuốc thử Wagner là I2/KI, I2 bị hòa tan trong dung môi kém phân cực như clorofom nên sự tách lớp xảy ra không rõ ràng.
Hình 14: Dịch chiết clorofom phản ứng với thuốc thử Mayer
Thuốc thử Mayer thì xảy ra sự tách lớp rõ ràng, nhưng không có kết tủa xuất hiện.Lớp dưới màu vàng đậm là dịch chiết clorofom, lớp trên là thuốc thử Mayer. Lớp chứa dịch chiết clorofom sẫm màu hơn so với khi chưa thử thuốc thử.
Trong dịch chiết clorofom có chứa ít Ankaloit, hoặc không có. b. Chiết bằng dung dịch axit
Hòa tan cao etanol vào dung dịch HCl 5%, ngâm qua đêm rồi chiết với clorofom, thu được dịch clorofom. Phản ứng của thuốc thử với dịch clorofom cho kết quả âm tính, dịch clorofom không màu khi phản ứng với thuốc thử Mayer thì
nhưng không có kết tủa xuất hiện; với thuốc thử Wagner thì dung dịch có màu nâu đỏ, không có sự tách lớp rõ ràng. Nguyên nhân của sự tách lớp trong phản ứng với thuốc thử của dịch clorofom do trong thuốc thử Mayer là dung dịch của hai muối KI, HgCl2, đây là những chất phân cực, sẽ không tan trong dung môi kém phân cực như CHCl3; còn trong thuốc thử Wagner là hỗn hợp I2/KI, I2 vừa tan trong KI lại vừa tan trong CHCl3 nên xảy ra sự tách lớp không rõ ràng đó.