i) Phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
2.2.2. Tách, chiết bằng dung môi hữu cơ
* Sơ đồ thực hiện:
* Quy trình thực hiện:
-Hoa sữa tươi được phơi khô, tránh ánh nắng trực tiếp, tránh ẩm mốc, tạp chất làm ảnh hưởng đến các chất có trong thành phần hoa sữa, tránh các phản ứng hóa học làm biến đổi các chất trong đó, làm sai lệch ảnh hưởng đến kết quả nghiên cứu.
-Mẫu hoa sau khi được phơi khô, đến độ ẩm còn khoảng 10%, ngâm ngập trong etanol 95o. Bình được đậy kín.
-Lọc dịch etanol, loại bã. Lắp hệ thống cô đuổi, thu hồi dung môi, chưng đuổi dung môi trong bình cầu thể tích 250ml. Hệ thống tương tự chưng cất lôi cuốn hơi nước hoa sữa tươi. Nhiệt độ đặt đuổi dung môi khoảng 60 - 70oC. Đuổi dung môi trong bình cầu đến thể tích còn khoảng 1/3 bình, chuyển sang cốc thủy tinh, chưng cất thủy để đuổi hết dung môi. Thu được cao etanol; chứa Ancaloit và rất nhiều chất hữu cơ khác.
-Chiết n-hexan: Pha cao etanol với nước cất trong bình tam giác; sau đó thêm n-hexan, lắc, để yên, chiết. Sử dụng pipet để lấy dịch n-hexan ở phía trên. Thao tác cẩn thận để không lẫn nước vào dịch chiết. Chiết nhiều lần cho đến khi nhạt màu.
Lần đầu tiên, pha cao etanol với 150ml nước cất, thêm 50 ml n-hexan, lắc, để yên, chiết; dịch n-hexaxn ở phía trên, dịch nước ở phía dưới, chiết lấy n-hexan. Sau lần chiết thứ nhất, thêm tiếp 50ml nước cất và 50 ml n-hexan, lắc, chiết n- hexan. Sau lần chiết thứ 2, thêm 50ml n-hexan, chiết tiếp. Thêm tiếp 25ml n- hexan cho lần chiết thứ 4, 5, 6. Các dịch chiết nhạt màu dần: dịch nước dần dần có màu vàng, dịch n-hexan trong dần, có màu xanh lục.
a) b)
Hình 5: Chiết n-hexan: 5-a) Hỗn hợp chiết lần đầu; 5-b) Hỗn hợp chiết lần cuối
-Dịch n-hexan sau khi chiết được cô đuổi thu hồi dung môi trong bình cầu, đun trên bếp với nhiệt độ 50 – 60oC. Đuổi n-hexan đến thể tích còn khoảng 1/3 V, sau đó chưng cách thủy để đuổi hết n-hexan, thu được cao n-hexan.
-Dịch nước sau khi chiết n-hexan, lọc, chiết với clorofom. Chiết nhiều lần cho đến khi dịch clorofom nhạt màu. Lần chiết thứ nhất, thêm 25ml clorofom vào dịch nước, lắc chiết lấy clorofom ở phần dưới, thao tác cẩn thận, để nước không lẫn vào dịch clorofom khi chiết, dịch clorofom ở lần chiết đầu tiên có màu vàng. Ở lần chiết thứ 2, thêm tiếp 25ml clorofom, lắc, để yên, chiết dịch clorofom. Cũng tương tự cho lần chiết thứ 3, thêm 25ml CHCl3. Ở lần chiết cuối (lần thứ 3) thì dịch clorofom không màu.Dịch clorofom thu được sau khi chiết, cô đuổi dung môi thu được dịch clorofom đậm đặc.