để chẩn ựoán chắnh xác các lợn nghiên cứu có nhiễm PCV2 hay không sau khi nghiên cứu các biến ựổi ựại thể và vi thể, chúng tôi tiến hành phản ứng PCR ựể chẩn ựoán chắnh xác.
Từ những mẫu bệnh phẩm tương ứng với 5 nhóm lợn nghiên cứu, chúng tôi tiến hành tách chiết DNA tổng số bằng bộ kit DNeasy Blood & Tissue (Qiagen). Sản phẩm DNA tổng số của các chủng PCV2 nghiên cứu thu ựược sau khi tách chiết sẽ ựược khuếch ựại bằng phản ứng PCR với bộ kắt giành cho phản ứng PCR (Invitrogen) và cặp mồi ựặc hiệu với PCV2 (VF2 và VR2) cho phép xác ựịnh ựoạn gen ORF1 của PCV2 có kắch thước dự kiến là 380bp. Sản phẩm sau khi khuếch ựại trong máy PCR (Icycler Thermal Cycler) ựược ựiện di trên thạch agarose 1,5% và chụp ảnh trong máy phát tia UV. Kết quả phản ứng PCR ựược trình bày ở bảng 4.5 và hình 4.25.
Bảng 4.5. Kết quả phản ứng PCR STT Nhóm lợn Mẫu bệnh phẩm Kết quả phản ứng PCR 1 Nhóm HN Hạch bẹn + 2 Nhóm TB Hạch phổi + 3 Nhóm BG Hạch màng treo ruột + 4 Nhóm HD Hạch amidan + 5 Nhóm HY Máu + Hình 4.25. Kết quả ựiện di sản phẩm phản ứng PCR
(Thang chuẩn Marker:100bp; giếng từ 1-5 là mẫu bệnh phẩm của 5 lợn nghiên cứu; giếng 6 là ựối chứng âm (DW); giếng 7 là ựối chứng dương).
Kết quả ựiện di cho thấy tất cả 5 mẫu ựược chọn làm thắ nghiệm ựều cho kết quả dương tắnh với PCV2. Sản phẩm ựiện di cho vạch DNA tương ứng với 380bp ựúng theo thiết kế mồi
Như vậy, bằng phương pháp PCR ựã chẩn ựoán chắnh xác PCV2 và tất cả các lợn có biến ựổi ựại thể và vi thể trong nghiên cứu này ựều nhiễm PCV2.
Phần V
KẾT LUẬN VÀ đỀ NGHỊ