Glucosamin là chất phân cực chứa poliancol và nhóm amino, vì vậy trong quá trình xử lý mẫu rất khó để tách và làm sạch nó từ các nền mẫu phức tạp đặc biệt là các dung dịch sinh học. Mặt khác, glucosamin không có các nhóm mang màu mạnh, hấp thụ yếu trong vùng tử ngoại. Vì vậy, để tăng cường khả năng hấp thụ (phân tích bằng phương pháp HPLC-UV, PDA), hấp phụ trên pha đảo và tăng độ nhạy của phương pháp phân tích, người ta tiến hành dẫn xuất hóa glucosamin (qua nhóm amino) với các thuốc thử: 9- fluorenylmethyl chloroformat (FMOC-Cl), 1-napthyl isothiocyanate (NITC), phenylisothiocyanat (PITC), 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamat (AQC), axit 8-aminopyrenesulfonic (APTS), o-phthalaldehyd /acid 3- mercaptopropionic (OPA/3-MPA) và N-(9-fluorenyl-methoxycarbonyloxy) succinimid (FMOC-Su). [21, 26]
Zhu X, ZhangL.J và cộng sự tiến hành tạo dẫn xuất giữa glucosamin với thuốc thử FMOC-Cl, điều kiện tối ưu cho quá trình dẫn xuất hóa xảy ra ở 20oC, tại pH=7 trong khoảng thời gian 30 phút. Tuy nhiên, nhược điểm của phương pháp này là đồng thời với quá trình tạo dẫn xuất còn xảy ra các phản ứng phụ khác, đặc biệt là phản ứng thủy phân của thuốc thử tạo ra sản phẩm ancol, làm giảm hiệu suất phản ứng tạo dẫn xuất.
Ali Aghazadeh-Habashi và cộng sự đã sử dụng NITC như là thuốc thử tạo dẫn xuất và xác định glucosamin trong huyết tương thỏ bằng phương pháp HPLC-UV. Theo phương pháp này, quá trình tạo dẫn xuất được thực hiện bằng cách thêm 0,2ml 1-naphthyl isothiocyanat (88mg/ml) được hòa tan trong hỗn hợp methanol-acetonitril-triethylamin, 1:1:0,3). Phản ứng được thực hiện tại nhiệt độ phòng trong thời gian 20 phút, kết thúc phản ứng thêm 0,4ml dung dịch acid acetic 1,5%. Tuy nhiên, nhược điểm của phương pháp này là khi xác định bằng phương pháp HPLC-UV, thành phần pha động phức tạp (acetonitril: nước: acid acetic: triethylamin (4,5: 95,5:0,1:0,05; pH=4,5), thời gian phân tích kéo dài (thời gian lưu 29 phút đối với glucosamin).
Wang X và các cộng sự sử dụng AQC như là thuốc thử tạo dẫn xuất huỳnh quang với glucosamin và xác định bằng phương pháp HPLC-FD, quá trình tạo dẫn xuất được thực hiện trong môi trường đệm borat 0,2M, pH=8,8:
Guan và cộng sự sử dụng OPA/3-MPA tạo dẫn xuất với glucosamin, quá trình được thực hiện trong môi trường đệm borat 0,05M (pH=9,3), tại nhiệt độ phòng và kéo dài trong thời gian 15 phút.
Zhou và các cộng sự đã thiết lập phương pháp tiêu chuẩn AOAC 2005.01, theo phương pháp này trước khi phân tích bằng HPLC-UV, glucosamin được tạo dẫn xuất với thuốc thử FMOC-Su trong môi trường triethylamin ở 50oC với thời gian 30 phút. Đây là phương pháp được sử dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm để xác định glucosamin trong các đối tượng khác nhau.
Trong nghiên cứu của mình, chúng tôi sử dụng phương pháp AOAC 2005.01 như là một phương pháp tiêu chuẩn để so sánh với phương pháp mới HPLC-ELSD.
