2.3.1.1. Lựa chọn chất chuẩn nội
Dựa vào công thức hóa học, tính chất lý hóa của các chất để lựa chọn chất chuẩn nội (IS), đảm bảo IS bền vững, có thể tách chiết cùng chuẩn, đồng thời phù hợp khi phân tích cùng FEL. Dự kiến nội chuẩn lựa chọn gồm NIF và AMLO. Hai chất này đƣợc pha trong MeOH (800 µg/ml) sau đó đƣợc pha loãng bằng MeOH thành nồng độ ( 4 µg/ml) và đƣợc bơm trực tiếp vào máy GC-MS để xác định mảnh phổ và thời gian lƣu cùng với FEL.
Pha hỗn hợp ba chất FEL (1µg/ml), NIF (4µg/ml) và AMLO (4µg/ml) trong MeOH và đƣợc bơm trực tiếp vào máy GC để xác định diện tich pic và hình ảnh pic của ba chất, từ đó lựa chọn IS cho phù hợp.
2.3.1.2. Khảo sát chương trình sắc ký
Qua nghiên cứu các tài liệu tham khảo, tiến hành khảo sát phƣơng pháp phân tích trên hệ thống GC-MS với các điều kiện sắc ký nhƣ:
+ Cột mao quản, nhiệt độ cột, chƣơng trình nhiệt độ.
+ Thể tích tiêm mẫu.
+ Detector, nhiệt độ detector. +Lựa chọn khí mang: N2, H2, He. +Tốc độ khí mang.
2.3.1.3. Khảo sát quy trình xử lí mẫu
Dựa vào các tài liệu tham khảo, tiến hành khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu, chiết tách FEL từ huyết tƣơng trên các mẫu chuẩn pha trong dung môi phù hợp; mẫu huyết tƣơng trắng và các mẫu FEL trong huyết tƣơng có nồng độ xấp xỉ Cmax, bằng phƣơng pháp chiết lỏng-lỏng bằng dung môi hữu cơ (toluen, n-hexan, hỗn hợp toluen-n- hexan(1:1)…).
Từ kết quả khảo sát, sơ bộ tiến hành lựa chọn phƣơng pháp phân tích FEL gồm lựa chọn chất chuẩn nội, điều kiện sắc ký và quy trình xử lý mẫu phù hợp.