quantitative real time pcr

... verified experimentally in vitro or by real- time PCR Validation experiments -quantitative real time PCR Selected gene array results were verified by real- time PCR SuperScript III reverse transcriptase ... was verified by testing in BLAST searches [15] Real time PCR primer sets specific for human 18SrRNA and BMP-2 were purchased from Qiagen Real time PCR was performed using the Smart Cycler System ... were considered significant Table Sequence of primers for quantitative real time PCR Primer Orientation Sequence Annealing temp and time Accession no Qiagen QuantiTect Primer Assay 62°C, 40 sec...

Ngày tải lên: 12/08/2014, 15:22

... microarray analysis) YD: Experiments (cell culture and quantitative real- time PCR analysis) YF: Experiments (cell culture and quantitative real- time PCR analysis) MI: Experiments (analysis with antibody) ... on the report Quantitative real- time PCR (qPCR) is generally considered the “gold-standard” assay for measuring gene expression and is often used to confirm microarray data [11] qPCR is the most ... tissues and quantitative RT -PCR reliability Exp Mol Pathol 2009, 87:146-51 Provenzano M, Mocellin S: Complementary techniques: validation of gene expression data by quantitative real time PCR Adv...

Ngày tải lên: 15/02/2014, 04:20

... quantitative real time PCR (qRT -PCR) has become widely accepted for rapid and reproducible quantification of gene expression Most previous attempts to quantify Vb expression using qRT -PCR used one ... Table Specificity of the qRT -PCR qRT -PCR specificities were assessed by melting curve analysis and sequencing of amplified PCR products Melting curves of the qRT -PCR reactions observed for Vb ... techniques (PCR, flow cytometry), or the lack of reagents at the time of previous studies For example, the Vb specificity of some SAgs in two previous studies was determined by semi -quantitative PCR...

Ngày tải lên: 18/06/2014, 16:20

... IM, Arden KE, Nitsche A: Real- time PCR in virology Nucleic Acids Res 2002, 30(6):1292-1305 Pfaffl MW: A new mathematical model for relative quantification in real- time RT -PCR Nucleic Acids Res 2001, ... (Invitrogen) and diluted 1:100 before use for QPCR Quantitative PCR In order to measure housekeeping gene expression, cDNA was subject to QPCR using the platinum QPCR super mix kit (Invitrogen) and pre-designed ... Radonic A, Thulke S, Bae HG, Muller MA, Siegert W, Nitsche A: Reference gene selection for quantitative real- time PCR analysis in virus infected cells: SARS corona virus, Yellow fever virus, Human Herpesvirus-6,...

Ngày tải lên: 18/06/2014, 18:20

... were harvested at several time points (table 1) and RNA was extracted The RNA transcription level of putative reference genes was determined by quantitative real- time PCR as described below Extraction ... diluted 1:5 before use in QPCR Quantitative TaqMan PCR Primers, TaqMan probes and QPCR conditions for reference gene analysis were used as previously described [5] PCR was performed in a Perkin ... http://www.virologyj.com/content/2/1/7 The respective MOI and time of cell culture are shown in table and were chosen to allow maximal infection as determined by immunofluorescence and real- time PCR [8-11] For kinetic studies,...

Ngày tải lên: 18/06/2014, 22:20

... IM, Arden KE, Nitsche A: Real- time PCR in virology Nucleic Acids Res 2002, 30(6):1292-1305 Pfaffl MW: A new mathematical model for relative quantification in real- time RT -PCR Nucleic Acids Res 2001, ... (Invitrogen) and diluted 1:100 before use for QPCR Quantitative PCR In order to measure housekeeping gene expression, cDNA was subject to QPCR using the platinum QPCR super mix kit (Invitrogen) and pre-designed ... Radonic A, Thulke S, Bae HG, Muller MA, Siegert W, Nitsche A: Reference gene selection for quantitative real- time PCR analysis in virus infected cells: SARS corona virus, Yellow fever virus, Human Herpesvirus-6,...

Ngày tải lên: 20/06/2014, 01:20

... were harvested at several time points (table 1) and RNA was extracted The RNA transcription level of putative reference genes was determined by quantitative real- time PCR as described below Extraction ... diluted 1:5 before use in QPCR Quantitative TaqMan PCR Primers, TaqMan probes and QPCR conditions for reference gene analysis were used as previously described [5] PCR was performed in a Perkin ... http://www.virologyj.com/content/2/1/7 The respective MOI and time of cell culture are shown in table and were chosen to allow maximal infection as determined by immunofluorescence and real- time PCR [8-11] For kinetic studies,...

Ngày tải lên: 20/06/2014, 04:20

... were tested for specificity by RTPCR and also by qRT -PCR, followed by a dissociation curve and agarose gel electrophoresis Real- time PCR conditions and analysis PCR reactions were performed in ... reference genes for qRT -PCR experiments have not been reported yet Real time PCR has been done to validate other differential expression experiments using absolute qRT -PCR or using internal control ... BRA 00591 is the most apomictic accession, with 98% of aposporous embryo sacs [9] Quantitative real- time PCR (qRT -PCR) has emerged as an important technique to compare the expression profiles of...

Ngày tải lên: 12/08/2014, 03:20

... each primer and 1.25 U enzyme Real- time PCR Mitchell Real- time PCR was performed in an Mx 3005P QPCR system (Stratagene, La Jolla, CA) using a SYBR Green based PCR assay (with ROX as the optional ... results in real- time PCR Nucl Acids Res 2002, 30(9):e36 Vandesompele J, De Preter K, Pattyn F, Poppe B, Van Roy N, De Paepe AFS: Accurate normalization of realtime quantitative RT -PCR data by ... expression in rice by quantitative real- time PCR Biochem Biophys Res Commun 2006, 345(2): 646-651 Nicot N, Hausman J-F, Hoffmann L, Evers D: Housekeeping gene selection for real- time RT -PCR normalization...

Ngày tải lên: 12/08/2014, 03:21

... time It is not suitable for large-scale applications In recent times, a more sensitive, time- saving and advanced method has emerged in the field, which is fluorescent quantitative real- time PCR ... Arden KE, Nitsche A: Real- time PCR in virology Nucleic Acids Res 2002, 30:1292-1305 35 Yang F, Jia W, Yue H, Luo W, Chen X, Xie Y, Zen W, Yang W: Development of quantitative real- time polymerase chain ... proviral load by a TaqMan real- time PCR assay J Virol Methods 2002, 102:37-51 38 Yun Z, Lewensohn-Fuchs I, Ljungman P, Ringholm L, Jonsson J, Albert J: A real- time TaqMan PCR for routine quantitation...

Ngày tải lên: 12/08/2014, 04:21

Ngày tải lên: 14/08/2014, 07:21

... studies have given evidence for overall safety as well Quantitative real- time PCR (QRTPCR) is the most widely used method for specific quantitative assay of ultra low concentration of pDNA in ... for each vaccinated animal http://www.gvt-journal.com/content/6/1/11 Conclusion Quantitative real- time PCR (QRTPCR) assay was developed to assess a residual pDNA vaccine pVAX-Hsp60 TM814 in mice ... levels of plasmid DNA detected by QRT -PCR in 500 ng of isolated DNA (MC/r) ± SD (four mice per time point) The straight line represents quantification limit of QRTPCR assay (10 pDNAX copies/reaction)...

Ngày tải lên: 14/08/2014, 19:22

... publication of quantitative real- time PCR) guidelines were published in 2009 with the twin aims of providing a blueprint for good real- time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) assay design ... for the publication of quantitative real- time PCR) guidelines [1] represent a major milestone in the transformation of the real- time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) from a research ... Intercalating dye Quantitative real- time PCR (qPCR) [1] is a sensitive and robust technique directly evolved from the “end-point detection” polymerase chain reaction (PCR) [2] PCR is a polymerase-dependent...

Ngày tải lên: 05/09/2015, 10:35

... method of gene expression analysis on synovial biopsies, we evaluated and validated real- time quantitative PCR (Q -PCR) on very small synovial tissue samples using a novel cell-based standard curve ... acquired from between 24 and 100,000 cells Quantitative PCR Materials and methods Reagents All reagents required for reverse transcription PCR and Q -PCR were from Applied Biosystems (Foster City, ... technique Real- time PCR using the standard curve method can therefore be successfully applied to small samples of synovium R357 Arthritis Research & Therapy Vol No Boyle et al Figure Validation of Q-PCR...

Ngày tải lên: 09/08/2014, 01:23

... nhân lên 1.4.2 Kỹ thuật Real- time PCR 1.4.2.1 Nguyên lý Real- time PCR PCR thời điểm thực, nghĩa trình khuếch đại DNA diển theo chu kỳ nhiệt theo dõi trực tiếp Real- time PCR gồm hai trình diễn ... 1.4.2.3 Ưu điểm Real- time PCR Ưu điểm Real- time PCR so với PCR truyền thống cho phép xác định số lượng khuôn mẫu ban đầu với xác độ nhậy cao phạm vi biến thiên rộng Kết Real- time PCR kết định Viện ... Rea-ltime PCR Hình 8: Khay ELISA dùng bước tạo DNA khuôn cho phản ứng Realtime _PCR Viện Đại học Mở Hà Nội 27 Khoa CNSH Đinh Thị Thu Hằng Lớp KSCNSH 06_01 Bảng 1: Thành phần phản ứng Realtime_PCR...

Ngày tải lên: 29/10/2012, 13:26

... Đánh giá Kỹ thuật real time PCR Để chẩn đoán sớm, giá thành thấp trẻ sinh từ mẹ nhiễm HIV Agence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales Kỹ thuật « Real- time PCR » có độ nhạy, ... So sánh phương pháp chẩn đoán HIV trẻ em • • Phương pháp kinh điển nested DNA PCR So sánh với kỹ thuật real time RT PCR thực gene LTR (theo ANRS protocol) • Mẫu bệnh phẩm: • Huyết nhóm trẻ chẩn ... virales Kết 264 trẻ sinh từ mẹ nhiễm HIV Cambodia Việt Nam Kết nồng độ HIV định lượng Real RT PCR RNA + Nested DNA PCR RNA- DNA+ 69 DNA- 195 Độ đặc hiệu 100% (95% CI, 90 đến 100%) Độ nhạy 100% (95%...

Ngày tải lên: 17/11/2012, 09:05

... phương pháp Real - time PCR - Khảo sát tính định lượng phương pháp Real - time PCR - Khảo sát độ nhạy phương pháp Real – time PCR Non Stop Nested PCR - Ứng dụng phương pháp Real - time PCR để kiểm ... kiểm tra Real time PCR Non Stop Nested PCR với mức độ nhiễm nhẹ (chỉ xuất băng 221 bp Non Stop Nested PCR vài Real - time PCR) Sai lệch độ nhạy Real - time PCR Non Stop Nested PCR cao PCR thơng ... (PCR) + (Semi-Nested PCR) + (Semi-Nested PCR) + (Semi-Nested PCR) + (Semi-Nested PCR) - (PCR) - (PCR) - (Semi-Nested PCR) - (Semi-Nested PCR) Non Stop Nested PCR Real - time PCR + + + + + + + +...

Ngày tải lên: 17/11/2012, 09:45

... Thành phần phản ứng Real- Time PCR 57 8.6.4 Chương trình nhiệt thiết lập máy Real- Time PCR 57 8.6.5 Phân tích kết 58 9.Ứng dụng phƣơng pháp Real- Time PCR khảo sát số mẫu thị ... tiến hành đơn giản, thời gian ngắn Những ưu điểm giúp Real- time PCR ngày ứng dụng rộng rãi giới [42] Nguyên tắc kĩ thuật Real- time PCR Real- Time PCR xem kỹ thuật cho phép định lượng xác số lượng ... nhóm sau: Nhóm 1: Phương pháp dựa việc khuếch đại nucleotide (PCR- based method) - Quantitative competitive PCR (QC -PCR) - Real- time PCR Nhóm 2: Phương pháp dựa protein (Protein-based method) -...

Ngày tải lên: 17/11/2012, 09:48

... Bắt cặp - Kéo dài Hình 2.2: Nguyên tắc real- time PCR sử dụng TaqMan probe 2.3.6 Phương pháp tối ưu hóa phản ứng real- time PCR [17,21] Phản ứng real- time PCR thường chịu nhiều ảnh hưởng thành phần ... hay định lượng (số lượng DNA) Real- time PCR sử dụng để định lượng gọi PCR định lượng Ngược lại, PCR truyền thống xem bán định lượng Thêm vào đó, liệu real- time PCR đánh không cần phải điện di ... thống real- time PCR bao gồm máy luân nhiệt (PCR) nối với máy phát quang phổ huỳnh quang máy vi tính Nguyên lý chủ yếu real- time PCR dựa sở phát định lượng thể thông báo huỳnh quang [17] Ưu điểm real- time...

Ngày tải lên: 16/03/2013, 09:26

... Phương pháp Real- Time PCR Phản ứng Real- Time PCR sử dụng TaqMan probe thiết lập với µl DNA-CMV với 20 µl master mix pha từ iTaq DNA Polymerase (Bio-Rad), phản ứng Real- Time PCR sử dụng PCR Amp/Cycle ... 1.10 Khái niệm Real- Time PCR [1], [2], [4], [7], [10], [15], [22], [57], [64], [68] 1.10.1 Khái niệm: Real- Time PCR định tính mà định lượng, Real- Time PCR cải biên phương pháp PCR dùng để định lượng ... huỳnh quang, Real- Time PCR dùng để định lượng gọi PCR định lượng (qPCR) Tín hiệu huỳnh quang đo lường phản ánh sản phẩm khuyếch đại chu kỳ 1.10.3 Ưu điểm  Ưu điểm Real- Time PCR so với PCR truyền...

Ngày tải lên: 16/03/2013, 09:26