... THỰC HÀNH.
Ø Phân lập visinh vật.
1. Phân lập vi khuẩn.
Sinh vi n thực hành phân lập visinhvật bằng kỹ thuật hộp ria
từ hỗn tạp visinhvật do phòng thí nghiệm cung cấp.
2. Phân lập nấm ... tập visinh cơ sở - Trường Đại học Mở Tp. HCM
Nguyễn Văn Minh
38
BÀI 5: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP VISINHVẬT
I. KHÁI NIỆM
Phân lập visinhvật là quá trình tách riêng cácloàivi ... lạc riêng
rẽ, cách biệt nhau.
II. PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP VISINHVẬT THUẦN KHIẾT.
Với hầu hết cácloại mẫu nghiên cứu, quá trình phân lập visinh
vật ở dạng thuần khiết gồm các bước cơ bản...
... theo một trong 3
cách sau để định danh hay xác định visinh vật: Lai với visinhvật (in situ), lai
trong dịch thể và lai với chất mang (solid support).
a. Kỹ thuật lai với visinhvật (in situ), ... hiện vi khuẩn Helicobacter pylori.
Kỹ thuật này được thực hiện để định vị chuỗi acid nucleic trong vi sinh
vật sau khi đã được cố định trong các tiêu bản hiển vi. Tuy nhiên, do hầu hết
các visinh ... bộ gene của cácvisinhvật có mang
các đoạn gene bảo thủ này. Sau khi điện di có thể phát hiện được trên agarose
các đoạn gene có kích thước khác nhau từ các nguồn visinhvật khác nhau. Kỹ
thuật...
...
Gram Negative Rods ID Flowchart
Aeromonas, Pseudomonas, Vibrio
Enterobacteriaceae
(See Separate Flowchartt)
Vibrio spp., Aeromonas spp.
Vibrio spp.
Aeromonas spp.
V. fischeri
V. logei
V. orientalis
V. ... (citrate neg.)
B. pantothenticus
(acid via arabinose neg.)
B. circulans
(acid via arabinose pos.)
B. macerans
B. macquariensis
B. alcalophilus
B. brevis
B. circulans
B. polymyxa
(manitol pos.)
B. ... (Colony)
Glucose Fermentation
Novobiocin Sensitivity
Bile Esculin
(growth with esculin hydrolysis)
Growth w/ Tellurite
Hemolysis
Optochin Sensitivity
Pyrrolidonearylamidase
(PYR Test)
Yes
No
+
-
+
+
+
+
+
+
Yes
No
-
-
-
-
-
-
-
Gamma...
...
Các ph ng pháp phân ươ
Các ph ng pháp phân ươ
lo iạ
lo iạ
- Phânloại theo số lượng các tính chất sinh học
- Phânloại theo số lượng các tính chất sinh học
- Phânloại theo phương pháp phân ... cấu trúc phân tử protein
Đ
Đ
ị
ị
nh nghĩa
nh nghĩa
Vi khuẩn là những visinhvậtđơn bào rất nhỏ mà
Vi khuẩn là những visinhvậtđơn bào rất nhỏ mà
mắt thường không nhìn thấy được,muốn ...
tấn công của virus ký sinh
tấn công của virus ký sinh
trong vi khuẩn
trong vi khuẩn
Vách t bào vi khu n ế ẩ
Vách t bào vi khu n ế ẩ
Gram(-)
Gram(-)
Peptidogycan chiếm 5-10% vật liệu cấu tạo...
...
gene của cácvisinhvật có mang
các đoạn gene bảo thủ này. Sau khi
điện di có thể phát hiện được trên
agarose các đoạn gene có kích
thước khác nhau từ các nguồn vi
sinh vật khác nhau. ... tắc nhân các
đoạn gene lặp lại. Thuật ngữ rep-
PCR là chỉ phương pháp chung sử
dụng cặp mồi đặc hiệu để nhân các
chuỗi lặp lại phổ biến trong cácvi
sinh vật thuộc cơ thể nhân sơ. Các
chuỗi ...
Vi c ứng dụng kỹ thuật RFLP
với sản phẩm PCR có thể là cách
nhanh chóng để tìm sự khác biệt
đối với các gene khác nhau. Với
cách này yêu cầu sản phẩm PCR
phải sạch và đồng nhất. Theo cách...
... của
phương pháp này là không đạt
được sự thích hợp cần thiết cho các
thí nghiệm chẩn đoán liên quan tới
xác định mẫu visinh vật, ví dụ thời
gian bán huỷ mẫu dò ngắn, nguy
hiểm cho người sử ... dấu
phi phóng xạ:
1, Dùng cơ chất hoá phát xạ
và sinh phát xạ, trong trường hợp
này thì cả cơ chất hoá và sinh phát
quang đều tạo ra các bức xạ ánh
Dinitrophenyl/antinitrophenyl
Poly(dA)/poly(dT) ... sử dụng
rộng rãi.
Vietsciences- Dương Văn Hợp,
Nguyễn Lân Dũng
sáng và sau đó là phương pháp phát
hiện bức xạ này.
* Với nguồn cơ chất hoá phát
quang có loại như AMPPD
(Bronstein,...
...
nghiệm chuẩn đoán visinh vật.
Vi c kết hợp giữa phân tích
plasmid với sử dụng enzym cắt hạn
chế sẽ tạo được sự phân tích chính
xác với các thông tin đáng tin cậy
đối với các mẫu phân tích. Tuy ... khác nhau (xem bảng 1.3).
Bảng 1.3. Minh hoạ các chủng vi
sinh vật được phân tích dựa trên
kết quả PFGE thu được từ các
đoạn nhiễm sắc thể.
Vi sinhvật nghiên
cứu
Tài liệu
tham khảo
1. Acinetobacter ... ý là các
plasmid có thể bị mất qua các thế
hệ phân chia, dẫn đến sai lệch các
kết quả nghiên cứu. Khi thực hiện
phép phân tích PFGE với các
plasmid lớn sẽ khắc phục được hạn
chế của các...
... này là giúp cho vi c
đổ gel dễ dàng hơn và gel không bị dính vào các bản kính.
Bài 12 Phânloạivisinh bằng Sinh Học Phân Tử
1. Khái quát về các phương pháp phânloạivisinhvật
truyền thống:
Trước ... chế của các phương pháp phânloại truyền thống dẫn đến nhiều
trường hợp phải xác định lại tên phânloại của một số visinh vật. Từ trước đến
nay, đơnvị cơ bản của định tên visinhvật là loài, ... nhiều
nghiên cứu tập trung vào cácphản ứng sinh hóa đặc trưng cho cácvisinhvật
riêng biệt. Sự khác biệt của cácphản ứng có ý nghĩa cho phânloạicácvisinh
vật.
- API20E KIT,
nguyên tắc:...
... Bài 12 Phânloạivisinh bằng Sinh Học Phân Tử
1. Khái quát về các phương pháp phânloạivisinhvật
truyền thống:
Trước đây công tác phânloạivisinhvật vẫn dựa căn bản trên các đặc tính ... phânloại truyền thống dẫn
đến nhiều trường hợp phải xác định lại tên phânloại của một số visinh vật. Từ
trước đến nay, đơnvị cơ bản của định tên visinhvật là loài, bao gồm nhóm
các cơ ...
lai với các nguồn ADN khác có mặt trong mẫu lai. Khi phân tích các mẫu visinh
vật với nhau thì mẫu dò nên là đoạn nucleotid đặc trưng cho các mẫu phân tích
để phân biệt với cácsinhvật khác....
... loạivisinh bằng Sinh Học Phân Tử
1. Khái quát về các phương pháp phânloạivisinhvật
truyền thống:
Trước đây công tác phânloạivisinhvật vẫn dựa căn bản trên các đặc tính
hình thái, sinh ... phânloại truyền thống dẫn đến nhiều
trường hợp phải xác định lại tên phânloại của một số visinh vật. Từ trước đến
nay, đơnvị cơ bản của định tên visinhvật là loài, bao gồm nhóm các cơ ... lai với các
nguồn ADN khác có mặt trong mẫu lai. Khi phân tích các mẫu visinhvật với
nhau thì mẫu dò nên là đoạn nucleotid đặc trưng cho các mẫu phân tích để phân
biệt với cácsinhvật khác....
... Tử
1. Khái quát về các phương pháp phânloạivisinhvật
truyền thống:
Trước đây công tác phânloạivisinhvật vẫn dựa căn bản trên các đặc tính
hình thái, sinh lý và hóa visinh vật: nhuộm, hình ... với vi khuẩn Borrelia và
Streptomyces). Plasmid được tìm thấy hầu hết ở cácvi khuẩn và một số ít cácvi
sinh vật nhân thực bậc thấp như nấm men.
Bài 12 Phânloạivisinh bằng Sinh Học Phân ... lai với các
nguồn ADN khác có mặt trong mẫu lai. Khi phân tích các mẫu visinhvật với
nhau thì mẫu dò nên là đoạn nucleotid đặc trưng cho các mẫu phân tích để phân
biệt với cácsinhvật khác....
... chính [40]. Thứ
ba, sinhvật chỉ thị có sự phân bố địa lý rộng, dễ dàng so sánh mức độ ô nhiễm ở cácvị trí
khác nhau [30,46]
*
Điều kiện lựa chọn sinhvật tích tụ:
Các sinhvật tích tụ được ... sản phẩm. Thứ
hai, các nhà sản xuất sẽ buộc phải thiết kế các sản phẩm “sạch” hơn bằng cách loại bớt các
chất nguy hiểm, thay thế các chất gây hại bằng cách sử dụng cácvật liệu thay thế an ... cầu và khả năng chống chịu của đối tượng sinhvật đó.”
Sinh vật chỉ thị ở trong bản luận văn này chúng tôi sử dụng là sinhvật tích tụ:là
những sinhvật chỉ thị, không những có tính chất chỉ...
... được từ các mảnh cắt.
b. Phân tích ADN nhiễm sắc thể:
Phương pháp phân tích ở đây bao gồm vi c tách ADN của nhiễm
sắc thể và cắt bằng enzym cắt hạn chế để phân biệt giữa cácvisinhvật
với ... sinh vật. Vi c kết hợp
giữa phân tích plasmid với sử dụng enzym cắt hạn chế sẽ tạo được sự
phân tích chính xác với các thông tin đáng tin cậy đối với các mẫu phân
tích. Tuy nhiên, khi phân ... với các chuỗi ADN trong các
vi khuẩn nghiên cứu. Gene RNA ribosom được tổ chức thành các operon
mà các gene riêng rẽ mã cho các RNA kích thước 5S, 16S và 23S chúng
được cách nhau bằng các...