Chƣơng I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1.1. Nội bào tử vi khuẩn
1.1.2.3. CotB - yếu tố dung hợp
1.2.1. Giới thiệu chung về streptavidin
1.2.2. Cấu trúc của streptavidin
1.2.3. Cấu tạo của biotin
1.2.4. Tƣơng tác streptavidin-biotin
1.2.5. Thiết kế trạng thái đơn hóa trị của streptavidin với một vị trí gắn biotin duy nhất
1.3.1. Giới thiệu chung về bệnh đốm trắng ở tôm và virus gây bệnh đốm trắng
1.3.2. Protein vỏ VP28 của virus WSSV
1.3.3. Các phƣơng pháp phát hiện virus gây bệnh đốm trắng ở tôm
1.3.3.2. Phƣơng pháp hóa mô miễn dịch IHC
1.3.3.3. Que thử nhanh WSSV
1.3.4. Bào tử B. subtilis biểu hiện streptavidin trên bề mặt (bào tử-strep) và ứng dụng
Chƣơng II. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP
2.1.2. Các bộ kit
2.1.3. Các cặp mồi
2.1.5. Các nguyên liệu khác
2.2. PHƢƠNG PHÁP
2.2.2. Tách chiết plasmid từ vi khuẩn
2.2.3. Tách chiết ADN hệ gen của virus từ mẫu tôm nhiễm WSSV
2.2.4. Nhân bản đoạn gen đích đặc hiệu bằng kỹ thuật PCR
2.2.5. Nhân dòng các đoạn gen đích vào vector pDG364
2.2.6. Biến nạp vector chứa đoạn gen chèn vào tế bào khả biến E. coli chủng DH5
2.2.7. Xử lý plasmid bằng các cặp enzyme giới hạn
2.2.8. Phản ứng gắn đoạn gen đích (insert) vào vector bằng T4 ADN ligase
2.2.10. Kiểm tra sự có mặt của đoạn gen đích trong ADN hệ gen của B. subtilis
2.2.11. Nuôi cấy tạo bào tử
2.2.12 Kiểm tra sự biểu hiện của protein dung hợp bằng phƣơng pháp thẩm tách miễn dịch (Western blotting)
2.2.13. Biotinyl hóa kháng thể kháng VP28
2.2.14. Gắn kháng thể kháng VP28 đã đƣợc biotinyl hóa lên trên bào tử-strep
2.2.15. Nhuộm màu bào tử-strep đã gắn kháng thể kháng VP28-biotinyl
2.2.15. Thu dịch nghiền có chứa virus gây bệnh đốm trắng từ mẫu tôm sú nhiễm bệnh
2.2.16. Phản ứng ngƣng kết thụ động ngƣợc (Reverse passive latex agglutination)
2.2.17. Định lƣợng số bản copies của WSSV bằng kỹ thuật Real-time PCR