Luận văn thạc sĩ nghiên cứu xác định terpin hydrat và paracetamol trong một số dược phẩm bằng phương pháp trắc quang

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN *** NGUYỄN VĂN ĐỒNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TERPIN HYDRAT VÀ PARACETAMOL TRONG MỘT SỐ DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP TRẮC QUANG Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 60.44.29 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS HỒNG THỌ TÍN Hà Nội - 2011 MỤC LỤC MỞ ĐẦU TỔNG QUAN PHẤN 1: NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH PARACETAMOL .2 1.1 Đặc điểm tính chất vật lý Paracetamol 1.2 Tính chất dƣợc học Paracetamol .2 1.2.1 Dƣợc lý chế tác dụng 1.2.2 Dƣợc động học 1.3 Vai trò ứng dụng Paracetamol .4 1.4 Sự tƣơng tác Paracetamol với loại thuốc 1.5 Một số phƣơng pháp xác định Paracetamol .8 1.5.1 Phƣơng pháp trắc quang .8 1.5.2 Phƣơng pháp điện hóa 10 1.5.3 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) .12 PHẦN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TERPIN HYDRAT 13 2.1 Đặc điểm tính chất Terpin hydrat (TEP) 14 2.2 Ứng dụng TEP 14 2.3 Thành phần tác dụng thuốc 14 2.4 TEP tƣơng tác với loại thuốc khác 17 2.5 Dƣợc lý chế tác dụng 17 2.5.1 Dƣợc lực học .17 2.5.2 Dƣợc động học 17 2.6 Các phƣơng pháp xác định TEP .17 2.6.1 Phƣơng pháp GC .17 2.6.2 Phƣơng pháp UV – VIS 18 THỰC NGHIỆM 19 PHẦN 1: HÓA CHẤT - DỤNG CỤ - THIẾT BỊ 19 PHẦN 2: TIẾN HÀNH THỰC NGHIỆM .21 Xác định Paracetamol phƣơng pháp trắc quang .21 1.1 Quét phổ khảo sát bƣớc sóng cho cực đại hấp thụ 21 1.2 Khảo sát thứ tự cho thuốc thử nồng độ thuốc thử 21 1.3 Khảo sát độ bền phức theo thời gian 22 1.4 Khảo sát ảnh hƣởng số ion 23 1.5 Khảo sát tuân theo định luật Lambert – Beer .24 1.6 Lập đƣờng chuẩn xác định PA 25 1.7 Độ lặp lại 28 1.8 Xác định PA mẫu thuốc 29 1.8.1 Xác định PA mẫu thuốc Pacemin 30 1.8.2 Xác định PA mẫu thuốc Panadol Extra 33 1.8.3 Xác định PA mẫu thuốc Tiffy FU .35 1.8.4 Xác định PA mẫu thuốc Efferalgan 38 1.8.5 Xác định PA mẫu thuốc Siro Tiffy 40 Sử dụng phƣơng pháp HPLC để xác định PA 43 2.1 Khảo sát xuất peak PA 43 2.2 Khảo sát ảnh hƣởng đệm 44 2.3 Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ dòng 44 2.4 Khảo sát ảnh hƣởng thể tích tiêm 45 2.5 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ pha động 46 2.6 Khảo sát ảnh hƣởng pH pha động 47 2.7 Lập đƣờng chuẩn xác định PA 49 2.8 Độ lặp lại 53 2.9 Xác định PA mẫu thuốc 56 2.9.1 Xác định PA mẫu thuốc Pacemin 56 2.9.2 Xác định PA mẫu thuốc Panadol Extra .56 2.9.3 Xác định PA mẫu thuốc Tiffy FU .63 2.9.4 Xác định PA mẫu thuốc Efferalgan 66 2.9.5 Xác định PA mẫu thuốc Siro Tiffy 69 2.10 Kiểm chứng kết hai phƣơng pháp 72 Xác định TEP phƣơng pháp trắc quang 73 3.1 Khảo sát bƣớc sóng cực đại phức TEP 73 3.2 Khảo sát thứ tự cho thuốc thử 73 3.3 Khảo sát thời gian đun tạo phức 74 3.4 Khảo sát độ bền phức .75 3.5 Khảo sát ảnh hƣởng số ion 76 3.6 Khảo sát tuân theo định luật Lambert – Beer .77 3.7 Lập đƣờng chuẩn xác định TEP .78 3.8 Độ lặp lại 81 3.9 Xác định TEP số mẫu thuốc 82 3.9.1 Cách tiến hành 82 3.9.2 Xác định TEP mẫu thuốc Pharcoter 83 3.9.3 Xác định TEP mẫu thuốc Khaterban 86 3.9.4 Xác định TEP mẫu thuốc Acodine 88 KẾT LUẬN 92 TÀI LIỆU THAM KHẢO 93 DANH MỤC BẢNG Stt Trang Bảng 1: khảo sát ảnh hưởng nồng độ thuốc thử tới độ hấp thụ quang PA 22 Bảng 2: khảo sát ảnh hưởng ion tới độ hấp thụ quang PA 23 Bảng 3: Khảo sát tuân theo định luật Lambert – Beer Bảng 4: Kết xác định đường chuẩn PA Bảng 5: Các giá trị thống kê xử lý phần mềm Excel Bảng 6: Kết khảo sát độ lặp lại nồng độ PA Bảng 7: kết độ lặp lại nồng độ PA Bảng 8: chuẩn bị mẫu phân tích Bảng 9: kết mật độ quang xác định PA mẫu Pacemin 24 25 27 28 29 30 30 10 Bảng 10: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Pacemin 33 11 Bảng 11: kết mật độ quang xác định PA mẫu Panadol Extra 33 12 Bảng 12: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Panadol Extra 35 13 Bảng 13: kết mật độ quang xác định PA mẫu Tiffy FU 35 14 Bảng 14: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Tiffy FU 38 15 Bảng 15: kết mật độ quang xác định PA mẫu Efferalgan 38 16 Tên bảng Bảng 16: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Efferalgan 40 17 Bảng 17: kết mật độ quang xác định PA mẫu Siro Tiffy 41 18 Bảng 18: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Siro Tiffy 43 19 Bảng 19: kết khảo sát ảnh hưởng tốc độ dòng 20 Bảng 20: kết khảo sát ảnh hưởng thể tích tiêm 21 Bảng 21: kết khảo sát tỷ lệ pha động 22 Bảng 22: kết ảnh hưởng pH pha động 23 Bảng 23: kết lập đường chuẩn xác định PA 45 45 46 47 49 52 53 55 56 56 24 Bảng 24: Các giá trị thống kê xử lý phần mềm Excel 25 Bảng 25: Kết khảo sát độ lặp lại nồng độ PA 26 Bảng 26: kết độ lặp lại nồng độ PA 27 Bảng 27: Khối lượng cân mẫu: 28 Bảng 28: kết diện tích peak xác định PA mẫu Pacemin (HPLC) 29 Bảng 29: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Pacemin 59 30 Bảng 30 : kết diện tích peak xác định PA mẫu Panadol Extra 60 31 Bảng 31: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Panadol Extra (HPLC) 62 32 Bảng 32: kết diện tích peak xác định PA mẫu Tiffy FU 63 33 Bảng 33: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Tiffy FU (HPLC) 66 34 Bảng 34: kết diện tích peak xác định PA mẫu Efferalgan 66 35 Bảng 35: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Efferalgan (HPLC) 69 36 Bảng 36: kết diện tích peak xác định PA Siro Tiffy 69 37 38 39 Bảng 37: hiệu suất thu hồi trình xác định PA mẫu thuốc Siro Tiffy (HPLC) Bảng 38: thống kê kết xác định PA hai phương pháp UV – VIS HPLC Bảng 39: khảo sát phụ thuộc mật độ quang TEP vào nồng độ thuốc thử 40 Bảng 40: Ảnh hưởng thời gian đun nóng đến hình thành phức 41 Bảng 41: khảo sát ảnh hưởng ion tới độ hấp thụ quang TEP 42 Bảng 42: Khảo sát tuân theo định luật Lambert – Beer TEP 43 Bảng 43: kết lập đường chuẩn xác định TEP 44 Bảng 44: Các giá trị thống kê xử lý phần mềm Excel 45 Bảng 45: kết khảo sát độ lặp lại TEP nồng độ 46 Bảng 46: kết độ lặp lại nồng độ TEP 47 Bảng 47: kết mật độ quang xác định TEP mẫu PCT 48 Bảng 48: hiệu suất thu hồi trình xác định TEP mẫu thuốc PCT 72 72 74 75 76 77 78 80 81 82 83 86 49 Bảng 49: kết mật độ quang xác định TEP mẫu KTB 50 Bảng 50: hiệu suất thu hồi trình xác định TEP mẫu thuốc KTB 51 Bảng 51: kết mật độ quang xác định TEP mẫu ACD 52 Bảng 52: hiệu suất thu hồi trình xác định TEP mẫu thuốc ACD 86 88 89 91 DANH MỤC HÌNH Stt Trang 21 Hình 1: đồ thị khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại PA Hình 2: đồ thị phụ thuộc mật độ quang PA vào nồng độ thuốc thử 22 Hình 3: đồ thị khảo sát đồ bền phức PA 23 Hình 4: đồ thị khảo sát ảnh hưởng ion tới mật độ quang PA 24 25 Hình 5: đồ thị khảo sát tuân theo định luật Lambert – beer Hình 6: đồ thị đường chuẩn xác định PA 26 Hình 7: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA Pacemin Hình 8: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Pacemin Hình 9: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA mẫu Panadol Extra Tên hình 10 Hình 10: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Panadol Extra 11 Hình 11: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA mẫu Tiffy FU 12 Hình 12: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Tiffy FU 13 Hình 13:đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA mẫu Efferalgan 14 Hình 14: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Efferalgan 15 Hình 15: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA Siro Tiffy 16 Hình 16: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Siro Tiffy 17 Hình 17: đồ thị ảnh hưởng pH tới thời gian lưu 18 Hình 18: đồ thị đường chuẩn xác định PA 19 Hình 19: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA mẫu Pacemin 20 Hình 20: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Pacemin 21 Hình 21: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA Panadol Extra 22 Hình 22: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Panadol Extra 23 Hình 23: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA Tiffy FU 24 Hình 24: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Tiffy FU 25 Hình 25: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA Efferalgan 26 Hình 26: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Efferalgan 27 Hình 27: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA Siro Tiffy 31 31 33 34 35 36 38 39 41 42 48 51 57 58 61 61 64 64 67 68 70 28 Hình 28: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA Siro Tiffy 29 Hình 29: khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại TEP 30 Hình 30: đồ thị phụ thuộc độ hấp thụ quang TEP vào nồng độ thuốc thử 31 Hình 31: đồ thị khảo sát thời gian tạo phức 32 Hình 32: khảo sát độ bền phức TEP theo thời gian 33 Hình 33: đồ thị khảo sát ảnh hưởng ion đến độ hấp thụ quang TEP 34 Hình 34: đồ thị biểu diễn sư tuân theo định luật Lambert – Beer TEP 35 Hình 35: đồ thị đường chuẩn xác định TEP 36 Hình 36: đồ thị đường thêm chuẩn xác định TEP PCT 37 Hình 37: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ TEP PCT 38 Hình 38: đồ thị đường thêm chuẩn xác định TEP KTB 39 Hình 39: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ TEP KTB 40 Hình 40: đồ thị đường thêm chuẩn xác định TEP ACD 41 Hình 41: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ TEP ACD 71 73 74 75 76 77 78 79 84 84 86 87 89 90 MỞ ĐẦU Từ xƣa, ngƣời ta sử dụng liễu làm thuốc hạ sốt, mà sau chiết xuất đƣợc aspirin Thế kỷ 19, canh ki na chất chiết xuất từ quinin đƣợc sử dụng để làm hạ sốt bệnh sốt rét [16] Khi canh kina dần khan vào năm 1880, ngƣời ta bắt đầu tìm thuốc thay Khi thuốc hạ sốt đƣợc tìm acetanilide năm 1886 phenacetin năm 1887 Năm 1878 Harmon Northrop Morse tổng hợp đƣợc paracetamol từ nguyên liệu ban đầu p-nitrophenol với thiếc giấm đóng băng [18] Tuy nhiên, paracetamol không đƣợc dùng làm thuốc điều trị suốt 15 năm sau Năm 1893, paracetamol đƣợc tìm thấy nƣớc tiểu ngƣời uống phenacetin, đƣợc cô đặc thành chất kết tinh màu trắng có vị đắng Năm 1899, paracetamol đƣợc khám phá chất chuyển hóa acetanilide Khám phá bị lãng quên vào thời gian Năm 1946, Viện nghiên cứu giảm đau thuốc giảm đau (the Institute for the Study of Analgesic and Sedative Drugs) tài trợ cho Sở y tế New York để nghiên cứu vấn đề xung quanh thuốc điều trị đau Bernard Brodie Julius Axelrod đƣợc định nghiên cứu thuốc non-aspirin lại liên quan đến tình trạng gây methemoglobin, (tình trạng làm giảm lƣợng oxy đƣợc mang hồng cầu gây tử vong) Năm 1948, Brodie Axelrod kết nối việc sử dụng acetanilide với methemoglobin xác định đƣợc rằng, tác dụng giảm đau acetanilide paracetamol - chất chuyển hóa gây Họ chủ trƣơng sử dụng paracetamol điều trị từ khơng xuất độc tính nhƣ acetanilide [10] Sản phẩm paracetamol đƣợc McNeil Laboratories bán năm 1955 nhƣ thuốc giảm đau hạ sốt cho trẻ em với tên Tylenol Children's Elixir [8] Sau này, paracetamol trở thành thuốc giảm đau hạ sốt đƣợc sử dụng rộng rãi với nhiều tên biệt dƣợc đƣợc lƣu hành Terpin hydrat loại hoạt chất có nguồn ngốc từ nguồn nhƣ nhựa thông, thyme, oregano, bạch đàn đƣợc nghiên cứu sinh lý lần Lepine năm 1855 terpin hydrat tác động trực tiếp lên tế bào tiết phế quản đƣờng hơ hấp để hóa lỏng tạo điều kiện thuận lợi cho việc loại bỏ chất tiết phế quản chống viêm phế quản cấp mãn tính Nó tạo nên tác dụng sát trùng yếu vào nhu mô phổi [33] terpin hydrat đƣợc phổ biến rộng rãi Mỹ kể từ - 10 - X= Y= ∑ Yi A = 73,13 (ppm) B = 0,450 Sy SX = B Y  B(2 X X )i = 0,423 Tra bảng ta có t(0,95;4) = 2,776 nên X ± t.SXE = 73,13 ± 0,423.2,776 = 73,13 ±1,17 (ppm) Nhƣ lƣợng TEP có 0,0897g thuốc cân ban đầu xác định theo công thức (1) : mTEP = (73,13 ±1,17) × 50 × 25 1,5 ×10−6 = 0,0609 ± 0,975.10−3 (g) So với hàm lƣợng đƣợc nhà sản xuất cơng bố nhãn thuốc 100mg/viên khối lƣợng TEP có viên thuốc là: 100.4 = 0,4 (g) Nhƣ hàm lƣợng TEP m(g) thuốc tính theo cơng thức: %TEP = m TEP mthuoc ×100% Ứng với nhãn thuốc nhà sản xuất hàm lƣợng là: %TEP = (0,4/0,5904).100% = 67,75% Hàm lƣợng đo đƣợc là: % TEP = (0,0609/0,0897).100% = 67,89% Nhƣ trình xác định TEP mẫu thuốc PCT sai số hàm lƣợng so với kết in nhãn là: S= %TEPsx − %TEPdo %TEPsx ×100% = 0,21% Đánh giá hiệu suất thu hồi xác định mẫu thuốc PCT phƣơng pháp thêm chuẩn với số liệu thu đƣợc từ bảng giá trị thêm chuẩn ta có: Gọi Cx nồng độ TEP dung dịch PCT ban đầu chƣa thêm TEP chuẩn Cs nồng độ đƣợc thêm vào lƣợng dung dịch chuẩn ∆C sau Ax As mật độ quang trung bình dung dịch tƣơng ứng Ta có theo xác định đƣợc nồng độ Cx = 73,13 ppm nên Cs = As.Cx/Ax Khi ta tính đƣợc lƣợng TEP thêm vào ∆C' = Cs – Cx (ppm) Hiệu suất thu hồi %H = (∆C' /∆C).100% Vậy áp dụng qui trình cho nồng độ ∆C thêm vào khác Cs ta thu đƣợc bảng kết sau (xem bảng 48) Bảng 48: hiệu suất thu hồi trình xác định TEP mẫu thuốc PCT ∆C (ppm) 10 20 30 40 50 A(Abs) 0,336 0,382 0,427 0,474 0,519 0,563 Cx(ppm) 73,13 73,13 73,13 73,13 73,13 73,13 Cs(ppm) Cs-Cx (ppm) H% 83,14 92,93 103,16 112,96 122,53 10,01 19,80 30,03 39,83 49,40 100,10 99,0 100,10 99,58 98,80 Vậy độ thu hồi trung bình là: Htb = ( ∑H )/5 = 99,52%, RSD = 0,61% 3.9.3 Xác định TEP mẫu thuốc Khaterban (KTB) Tiến hành đo dãy dung dịch chuẩn bị nhƣ với thể tích mẫu KTB lấy ban đầu 1,5 ml ta thu đƣợc kết nhƣ sau: Bảng 49: kết mật độ quang xác định TEP mẫu KTB Vml thêm vào ∆C (ppm) A1 (Abs) A2 (Abs) ATB (Abs) 0 0,342 0,343 0,343 10 0,389 0,389 0,389 20 0,434 0,434 0,434 30 0,479 0,480 0,480 40 0,529 0,528 0,529 0.60 0.55 0.50 Ab s 0.45 0.40 0.35 0.30 10 20 30 40 50 C (ppm) Hình 38: đồ thị đường thêm chuẩn xác định TEP KTB 50 0,577 0,576 0,577 Các thông số máy : Parameter Value Error A 0.34181 0.00113 B 0.00467 3.71795E-5 R SD N P 0.99987 0.00156