Khảo sát đa hình gen CYP2C93 và VKORC1 trên bệnh nhân thay van tim sử dụng thuốc chống đông acenocoumarol

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Đỗ Thị Lệ Hằng KHẢO SÁT ĐA HÌNH GEN CYP2C9*3 VÀ VKORC1 TRÊN BỆNH NHÂN THAY VAN TIM SỬ DỤNG THUỐC CHỐNG ĐÔNG ACENOCOUMAROL Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi Đỗ Thị Lệ Hằng, học viên cao học khóa 25 (2016-2018), chuyên ngành Sinh học Thực nghiệm, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn của: TS Vũ Thị Thơm PGS.TS Hồng Thị Mỹ Nhung Cơng trình không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp nhận sở nơi nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm Ngƣời viết cam đoan Đỗ Thị Lệ Hằng LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Thị Thơm PGS.TS Hoàng Thị Mỹ Nhung người hướng dẫn khoa học, người Thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Tôi xin cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp Đại học Quốc Gia Hà Nội, mã số: QG.17.29 cung cấp kinh phí, tạo điều kiện để tơi hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn PGS.TS Phạm Trung Kiên, chủ nhiệm đề tài hỗ trợ tạo điều kiện cho thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Thầy cô, nhà Khoa học Hội Đồng chấm đề cương luận văn tốt nghiệp đóng góp ý kiến q báu, giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời biết ơn tới Ban Giám Hiệu nhà trường, phòng Đào Tạo sau Đại Học, Thầy Cô Khoa Sinh học Thầy Cô môn Sinh học Tế Bào Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội cho kiến thức quý báu, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: Các cán Bộ môn Y Dược học sở, Ban lãnh đạo Khoa Y Dược - Đại học Quốc Gia Hà Nội giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập Các bác sĩ nhân viên Bệnh viện Tim Hà Nội giúp đỡ nhiều q trình hồn thành luận văn Xin bày tỏ lòng biết ơn Bố Mẹ người thân gia đình với bạn bè đồng nghiệp chỗ dựa vững tôi, thương yêu, khuyến khích, động viên tạo điều kiện tốt tinh thần giúp tơi hồn thành tốt chương trình học tập thực thành cơng luận văn Cuối xin gửi lời tri ân tới bệnh nhân tham gia vào nhóm nghiên cứu, đóng góp bệnh nhân giúp tơi có thành cơng MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Bệnh lý van tim thay van tim 1.2 Sử dụng thuốc chống đông sau thay van tim 1.3 Dược di truyền học acenocoumarol 1.4 Tổng quan đa hình di truyền gen CYP2C9*3 gen VKORC1 1.4.1 Khái niệm đa hình đơn nucleotide 1.4.2 Vị trí, cấu trúc gen CYP2C9 mối liên quan tới liều thuốc acenocoumarol .11 1.4.3 Vị trí, cấu trúc gen VKORC1 mối liên quan tới liều thuốc acenocoumarol .15 1.4.4 Các phương pháp phân tích xác định kiểu gen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 18 1.5 Tình hình nghiên cứu mối liên quan di truyền học liều thuốc acenocoumarol giới nước .21 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 21 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 24 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 26 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 26 2.1.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 26 2.2 Phương pháp nghiên cứu 27 2.3 Nguyên liệu phương tiện nghiên cứu 27 2.3.1 Hóa chất 27 2.3.2 Thiết bị 28 2.3.3 Dụng cụ 28 2.3.4 Mẫu nghiên cứu 28 2.4 Các bước nghiên cứu 29 2.4.1 Quy trình nghiên cứu 29 2.4.2 Thu thập, xử lý bảo quản mẫu 30 2.4.3 Tách chiết kiểm tra chất lượng DNA tổng số 30 2.4.4 Trình tự mồi cho phản ứng khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 .32 2.4.5 Khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 phương pháp PCR 32 2.4.6 Tinh sản phẩm PCR 33 2.4.7 Xác định kiểu gen SNP CYP2C9*3 sử dụng phương pháp giải trình tự gen 34 2.4.8 Xác định kiểu gen SNP rs9923231 SNP rs9934438 gen VKORC1 sử dụng phương pháp RFLP có đối chiếu với phương pháp giải trình tự gen 35 2.4.9 Kết tần số phân bố alen, kiểu gen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 37 2.5 Xử lý phân tích số liệu 37 2.6 Các loại sai số cách khắc phục 37 2.6.1 Sai số mắc phải 37 2.6.2 Cách khắc phục sai số 37 2.7 Đạo đức nghiên cứu 38 Chƣơng KẾT QUẢ 39 3.1 Một số đặc điểm nhóm bệnh nhân nghiên cứu 39 3.2 Kết phân tích kiểu gen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKOCR1 40 3.2.1 Kết tách chiết DNA tổng số 40 3.2.2 Tối ưu quy trình PCR khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 41 3.2.3 Kết khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 47 3.2.4 Kết phân tích kiểu gen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 50 3.3 Kết tần số phân bố alen, kiểu gen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 55 3.3.1 Kết tần số phân bố alen, kiểu gen SNP CYP2C9*3 55 3.3.2 Kết tần số phân bố alen, kiểu gen SNP rs9923231 rs99 rs9934438 gen VKORC1 56 3.4 Tỷ lệ kiểu gen phối hợp SNP rs9923231 SNP rs9934438 gen VKORC1 57 Chƣơng BÀN LUẬN 58 4.1 Một số đặc điểm nhóm bệnh nhân tham gia nghiên cứu 59 4.2.Phân tích kiểu gen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 60 4.3 Xác định tần số phân bố alen, kiểu gen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934348 gen VKORC1 62 KẾT LUẬN 66 KIẾN NGHỊ 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 PHỤ LỤC 76 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT AHA American Heart Association: Hiệp hội Tim mạch Mỹ AVK Anti Vitamin K : Kháng vitamin K AF Atrial Fibrillation: Rung nhĩ bp Base pair (cặp bazơ) cs cộng COA Thuốc chống đông máu đường uống họ Coumarinic DVT Deep Venous Thrombosis: Huyết khối tĩnh mạch sâu dNTP Deoxyrinucleotide Triphosphate ddNTP Dideoxynucleotide Triphosphate DNA Deoxyribonucleic Acid (Acid deoxyribonucleic) HVR Heart Valve Replacement: Thay Van Tim EDTA Ethylenediaminetetraacetic Acid INR International Normalized Ratio: Chỉ số bình thường hoá Quốc Tế NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase Chain Reaction: Phản ứng chuỗi polymerase PT Prothrombin RE Restriction Enzym: enzym cắt giới hạn RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism: Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn SNP Single Nucleotide Polymorphism: Đa hình đơn nucleotide TAE Tris base, acetic acid and EDTA DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Mối liên quan đa hình gen CYP2C9 với liều dùng acenocoumarol 14 Bảng 1.2 Mối liên hệ kiểu gen VKORC1 với liều thuốc acenocoumarol 16 Bảng 1.3 Tần số phân bố alen gen CYP2C9 quần thể người 23 Bảng 1.4 Tần số phân bố alen gen CYP2C9 quần thể người 23 Bảng 2.1 Trình tự mồi khuếch đại đoạn gen chứa alen .32 Bảng 2.2 Quy trình RFLP phân tích kiểu gen rs9923231 gen VKORC1 35 Bảng 2.3 Quy trình RFLP phân tích kiểu gen rs9923231 gen VKORC1 36 Bảng 3.1 Một số đặc điểm chung nhóm bệnh nhân tham gia nghiên cứu 39 Bảng 3.2 Kết kiểm tra nồng độ độ tinh DNA tổng số 41 Bảng 3.3 Quy trình khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3 .47 Bảng 3.4 Quy trình khuếch đại đoạn gen chứa SNP rs9923231 gen VKORC1 .48 Bảng 3.5 Quy trình khuếch đại đoạn gen chứa SNP rs9934438 gen VKORC1 .48 Bảng 3.6 Kết tần số phân bố alen, kiểu gen SNP CYP2C9*3 55 Bảng 3.7 Kết tần số phân bố alen, kiểu gen SNP rs9923231 SNP rs9934438 gen VKORC1 56 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Buồng tim vị trí van tim Hình 1.2 Cấu trúc hoá học acenocoumarol Hình 1.3 Ảnh hưởng gen CYP2C9 gen VKORC1 tới acenocoumarol Hình 1.4 Mơ tả Single nucleotide polymorphisms Hình 1.5 Mơ tả Haplotype 10 Hình 1.6 Vị trí nhiễm sắc thể số 10 NST người 12 Hình 1.7 Vị trí gen CYP2C9 nhiễm sắc thể số 10 12 Hình 1.8 Vai trị Cytochrome P450 chuyển hố thuốc 13 Hình 1.9 Vị trí nhiễm sắc thể số 16 NST người 15 Hình 1.10 Vị trí gen VKORC1 nhiễm sắc thể số 16 .15 Hình 1.11 Gen VKORC1 .15 Hình 1.12 Giải trình tự gen máy tự động .19 Hình 1.13 Enzym cắt tạo đầu dính cắt tạo đầu 20 Hình 3.1 Hình ảnh điện di DNA tổng số gel agarose 0,7% 40 Hình 3.2 Kết PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi cho phản ứng khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3 42 Hình 3.3 Kết PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi cho phản ứng khuếch đại đoạn gen chứa SNP rs9923231 gen VKORC1 42 Hình 3.4 Kết PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi cho phản ứng khuếch đại đoạn gen chứa SNP rs9934438 gen VKORC1 43 Hình 3.5 Kết PCR tối ưu nồng độ mồi (A) nồng độ DNA (B) cho phản ứng khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3 44 Hình 3.6 Kết PCR tối ưu nồng độ mồi (A) nồng độ DNA (B) cho phản ứng khuếch đại đoạn gen chứa SNP rs9923231 gen VKORC1 45 Hình 3.7 Kết PCR tối ưu nồng độ mồi (A) nồng độ DNA (B) cho phản ứng khuếch đại đoạn gen chứa SNP rs9934438 gen VKORC1 46 Hình 3.8 Điện di sản phẩm phản ứng PCR khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3, SNP rs9923231, SNP rs9934438 .49 Hình 3.9 Kết giải trình tự SNP CYP2C9*3 50 Hình 3.10 Sản phẩm RFLP SNP rs9923231 gen VKORC1 .51 Hình 3.11 Sản phẩm RFLP SNP rs9934438 gen VKORC1 .52 Hình 3.12 Kết giải trình tự SNP rs9923231 gen VKORC1 53 Hình 3.13 Kết giải trình tự SNP rs9934438 gen VKORC1 54 53 Reitsma P H., van der Heijden J F., Groot A P et al (2005), "A C1173T dimorphism in the VKORC1 gene determines coumarin sensitivity and bleeding risk", PLoS Med, 2(10): e312 54 Sullivan P W., Arant T W., Ellis S L., Ulrich H (2006), "The cost effectiveness of anticoagulation management services for patients with atrial fibrillation and at high risk of stroke in the U", Pharmacoeconomics, 24(10), pp 1021-33 55 Eberhard Passarge (2007) Color Atlas of Genetics, Thieme Stuttgart - New York 56 Riley R S., Rowe D., Fisher L M (2000), "Clinical utillization of the international normalized ratio (INR)", J Clin Lab Anal, 14(3), pp 101-14 57 Hart R G., Pearce L A., Aguilar M I (2007), "Meta-analysis: antithrombotic therapy to prevent stroke in patients who have nonvalvular atrial fibrillation", Ann Intern Med, 146(12), pp 857-67 58 Saraevaf R B., Paskaleva I D., Doncheva E et al (2007)," Pharmacogenetics of acenocoumarol: CYP2C9, CYP2C19, CYP1A2, CYP3A4, CYP3A5 and ABCB1 gene polymorphisms and dose requiments", J Clin Pharm Ther, 32(6), pp 6419 59 Montes R., Nantes O., Alonso A et al (2008), "The influence of polymorphisms of VKORC1 and CYP2C9 on major gastrointestinal bleeding risk in anticoagulated patients", Br J Haematol, 143(5), p 727-33 60 Van Schie R M., Wessels J A., et al (2011), "Loading and maintenance dose algorithms for phenprocoumon and acenocoumarol using patient characteristics and pharmacogenetic data", Euro Heart J, 32(15), p 1909-17 61 Nashimura R A., Catherin M Otto, Paul Soraja et al (2014), "Guideline for the Management of Patients With Valvular Heart Disease", J of the Ameriacan College of Cardilogy, 63(22) 62 Cannegieter S C., Rosendaal F R., Briet E (1994), "Thromboembolic and bleeding complications in patients with mechanical heart valve prostheses", Circulation, 89(2), pp 635-41 63 Nishimura R A., Catherine M Otto (2017), "AHA/ACC Focused Update of the 2014 AHA/ACC Guideline for the Management of Patients With Valvular Heart Disease", J of the Ameriacan College of Cardilogy, 70(2) 64 Little S H., Massel D R (2003), "Antiplatelet and anticoagulation for patients with prosthetic heart valves", Cochrane Database Syst Rev, 4:CD003464 65 Schalekamp T., van Geest-Daalderop J H., de Vries-Goldschmeding H et al (2004), "Acenocoumarol stabilization is delayed in CYP2C93 carriers", Clin Pharmacol Ther, 75(5), pp 394-402 66 Treasure T (2006), "From anecdote to EBM", J R Soc Med, 99(5), p 267-70 67 Bourguignon T., Bergöend E., Mirza A et al (2011), "Risk factors for valverelated complications after mechanical heart valve replacement in 505 patoents with long-term follow up", J Heart Valve Dis, 20(6), pp 673-80 68 Verhoef T I., Redekop W K., Buikema M M et al (2012), "Long-term anticoagulant effects of the CYP2C9 and VKORC1 genotypes in acenocoumarol users", J Thromb Haemost, 10(4), pp 606-14 69 The Human Hepatic Cytochromes P450 Involved in Drug Metabolism (n.d.) Available at: https://ncbi.nlm.nih.gov/labs/articles/1616599/ [Accessed 29 July 2018] 70 Pérez-Andreu V., Roldan V., Anton A l et al (2009), ''Pharmacogenetic relevance of CYP4F2 V433M polymorphism on acenocoumarol therapy", Blood, 113, pp 4977-79 71 Alec Vahanican, Ottavio Alfrieri, Felicita Andreotti et al (2012), "Guideline on the management of valvular heart disease", European Heart Journal, 19(33), pp 2451-2496 72 Jeremy W Dale, Malcolm von Schantz, Nicholas Plant (2002), From genes to genomes: Concepts and Applications of DNA technology, John Wiley & Sons Ltd 73 Houdijk W P., Van A M (2004), "International multicenter international sensitivity index (ISI) calibration of a new human tissure factor thromboplastin reagent derived from cultured human cells", Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2(2), pp 266-70 74 Jeremy W Dale, Malcolm von Schantz, Nick Plan (2012), "From genes to genomes: concepts and applications of DNA technology", In Restriction endonucleases (3th ed) UK: University of Surrey, pp 36-74 75 Francis Lam Y W., Larisa H C (2013), Pharmacogenomics, Academic press.Ltd, USA, p 1-44 76 Chua Y A., Abdullah W Z., Yusof Z et al (2015), "VKORC1 and CYP2C9 genotypic data-based dose prediction alone does not accurately predict warfarin dose requirements in some Malaysian patients", Turk J Med Sci, 45(2), p 913-8 77 Verde Z., Ruiz J B., Santiago C et al (2010), "A novel, single algorithm approach to predict acenocoumarol dose based on CYP2C9 allele variants", Plos One, 5, pp 11210 PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN THAM GIA NGHIÊN CỨU BỆNH VIỆN TIM HÀ NỘI STT Họ tên Mã số đề tài Mã bệnh án Tuổi Giới theo năm tính Dương Thị L Đt 01 PT163 52 Nữ Trương Việt Q Đt 02 PT1039 63 Nam Đỗ Thị M Đt 03 PT610 55 Nữ Đỗ Thị M Đt 04 PT1688 60 Nữ Nguyễn Thị L Đt 05 PT 668 59 Nữ Đinh Thị V Đt 06 PT641 58 Nữ Đỗ Thị H Đt 07 PT499 52 Nữ Nguyễn Văn T Đt 08 PT1222 62 Nam Nguyễn Thị T Đt 09 PT126 46 Nữ 10 Nguyễn Văn D Đt 10 PT1480 54 Nam 11 Nguyễn Thị Tường V Đt 11 PT1275 47 Nữ 12 Phan Thị C Đt 12 PT941 56 Nữ 13 Đặng Thị T Đt 16 PT95/15 57 Nam 14 Nguyễn Thị T Đt 17 PT33/15 52 Nữ 15 Nguyễn Văn L Đt 18 PT460 53 Nam 16 Nguyễn Thị H Đt 19 PT401/15 46 Nữ 17 Nguyễn Văn T Đt 21 PT1298 55 Nam 18 Vũ Thị H Đt 22 PT1390 54 Nữ 19 Nguyễn Thị H Đt 23 PT518 32 Nữ 20 Nguyễn Thạc Q Đt 24 PT747/15 51 Nam 21 Nguyễn Thị H Đt 25 PT137 62 Nữ 22 Nguyễn Thị D Đt 26 PT1090 65 Nữ 23 Trịnh Thị H Đt 27 PT1011 52 Nữ 24 Nguyễn Văn D Đt 28 PT343 41 Nam 25 Nguyễn Công L Đt 31 PT1405 35 Nam 26 Nguyễn Thị N Đt 32 PT295/16 54 Nữ 27 Hoàng Thị M Đt 33 PT1912 49 Nữ 28 Đặng Văn H Đt 34 PT969 53 Nam 29 Hà Văn M Đt 35 PT1198/16 37 Nam 30 Trần Thị H Đt 36 PT17 39 Nữ 31 Nguyễn Văn N Đt 38 PT419 50 Nam 32 Nguyễn Thị L Đt 39 PT 748 62 Nữ 33 Vũ Thị D Đt 40 PT635 49 Nữ 34 Vũ Thị T Đt 42 PT1923 42 Nữ 35 Phạm Thị T Đt 44 PT1127 60 Nữ 36 Ngô Thị L Đt 46 PT1683 56 Nữ 37 Vương Thị V Đt 48 ST100 60 Nữ 38 Nguyễn Thị N Đt 49 PT1485 60 Nữ 39 Đặng Văn L Đt 51 PT167 39 Nam 40 Nguyễn Ngọc C Đt 52 PT786 53 Nam 41 Đỗ Thị V Đt 53 PT915 33 Nữ 42 Phạm Văn T Đt 58 ST953 31 Nam 43 Nguyễn Văn D Đt 61 PT1162/17 42 Nam 44 Nguyễn Thị B Đt 65 PT699 62 Nữ 45 Đỗ Minh Đ Đt 67 PT960 58 Nam 46 Lê Văn S Đt 68 PT1048 52 Nam 47 Trịnh Thị K Đt 69 PT882 60 Nữ 48 Phạm Khắc X Đt 71 PT368 62 Nam 49 Đặng Thanh B Đt 72 PT676 37 Nam 50 Nguyễn Văn H Đt 73 NT1501 59 Nam 51 Nguyễn Gia Q Đt 74 PT8152/15 65 Nữ 52 Đỗ Thị V Đt 75 PT573 42 Nữ 53 Đặng Thị V Đt 78 PT1244/16 53 Nữ 54 Phùng Thị T Đt 79 PT144 43 Nữ 55 Nguyễn Văn H Đt 80 PT1228 64 Nam 56 Hoàng Thị C Đt 82 ST1610 52 Nữ 57 Dương Văn B Đt 84 PT203 61 Nam 58 Nguyễn Thị V Đt 85 PT860/16 62 Nữ 59 Đỗ Trọng T Đt 86 PT1060 59 Nam 60 Trịnh Thị H Đt 87 PT311 54 Nữ 61 Phùng Thế H Đt 88 PT1098/16 59 Nam 62 Nguyễn Thị C Đt 89 PT127 54 Nữ 63 Nguyễn Văn D Đt 90 PT1162/17 42 Nam 64 Phạm Văn T Đt 92 PT257 36 Nam 65 Nguyễn Thị H Đt 93 PT684 38 Nữ 66 Đinh Thị V Đt 94 PT880 47 Nữ 67 Bùi Đức C Đt 95 PT928 46 Nam 68 Nguyễn Thị K Đt 96 PT1412 63 Nữ 69 Nguyễn Thị H Đt 97 PT245 44 Nữ 70 Phùng Thị Đ Đt 98 PT1066 53 Nữ 71 Nguyễn Thị Ư Đt 99 PT525 62 Nữ 72 Phan Thị Q Đt 100 PT270 34 Nữ 73 Nguyễn Đức T Đt 101 PT461 54 Nam 74 Nguyễn Thành C Đt 102 PT26 45 Nam 75 Bùi Khánh T Đt 103 PT202 52 Nam 76 Nguyễn Văn N Đt 104 PT253 47 Nam 77 Nguyễn Thị S Đt 105 PT1630 58 Nữ 78 Phạm Đắc T Đt 107 PT1062 50 Nam 79 Nguyễn Thị N Đt 109 PT776 56 Nữ 80 Đỗ Thị H Đt 110 PT1626 45 Nữ 81 Nguyễn Văn C Đt 113 PT1623 45 Nam 82 Triệu Thị S Đt 114 PT1382 47 Nữ 83 Vũ Đình S Đt 115 PT76 50 Nam 84 Nguyễn Thị N Đt 117 PT1041 56 Nữ 85 Dương Thị L Đt 118 PT515 41 Nữ 86 Trần Quốc B Đt 123 PT249/15 66 Nam 87 Phạm Văn L Đt 124 PT193 57 Nam 88 Phùng Thị T Đt 126 PT874 49 Nữ 89 Phạm Thị K Đt 127 PT865 56 Nữ 90 Trần Thị L Đt 128 PT38 48 Nữ 91 Nguyễn Văn Đ Đt 129 PT29 52 Nam 92 Hoàng Thế Q Đt 130 ST897 32 Nam 93 Nguyễn Thị N Đt 132 PTVT1091 47 Nữ 94 Kiều Duy T Đt 136 PTVT 584 52 Nam 95 Đặng Văn C Đt 140 PTVT1080 63 Nam 96 Vi Thị N Đt 141 PTVT1704 57 Nữ 97 Đinh Đăng C Đt 145 PTVT241 44 Nam 98 Đinh Thị H Đt 146 PTVT887 35 Nữ 99 Phạm Thị H Đt 147 PTVT308 42 Nữ 100 Triệu Hồng L Đt 148 PTVT1650 61 Nam PHỤ LỤC DANH SÁCH KẾT QUẢ ĐO OD CỦA CÁC MẪU NGHIÊN CỨU STT Mẫu Nồng độ DNA (ng/μl) A260/A280 01 ĐT 01 78,85 1,957 02 ĐT 02 63,35 1,931 03 ĐT 03 80,15 1,964 04 ĐT 04 72,10 1,970 05 ĐT 05 64,40 2,051 06 ĐT 06 89,65 1,960 07 ĐT 07 99,55 1,807 08 ĐT 08 48,60 1,808 09 ĐT 09 54,00 1,983 10 ĐT 10 41,15 1,892 11 ĐT 11 61,50 2,026 12 ĐT 12 62,25 1,853 13 ĐT 16 50,90 1,950 14 ĐT 17 73,40 1,984 15 ĐT 18 56,15 2,052 16 ĐT 19 96,15 1,985 17 ĐT 21 69,20 1,838 18 ĐT 22 63,20 1,904 19 ĐT 23 114,95 1,874 20 ĐT 24 73,65 1,872 21 ĐT 25 48,90 1,970 22 ĐT 26 63,55 1,903 23 ĐT 27 41,75 2,016 24 ĐT 28 93,65 1,862 25 ĐT 31 57,55 1,927 26 ĐT 32 95,85 1,861 27 ĐT 33 43,00 2,275 28 ĐT 34 59,65 2,138 29 ĐT 35 62,50 2,155 30 ĐT 36 48,25 2,271 31 ĐT 38 71,85 2,074 32 ĐT 39 101,15 1,940 33 ĐT 40 69,10 2,107 34 ĐT 42 106,50 1,873 35 ĐT 44 88,20 1,964 36 ĐT 46 42,80 1,860 37 ĐT 48 63,55 2,021 38 ĐT 49 46,00 1,970 39 ĐT 51 49,45 2,181 40 ĐT 52 41,80 1,922 41 ĐT 53 46,25 2,024 42 ĐT 58 53,95 2,017 43 ĐT 61 46,10 1,921 44 ĐT 65 52,85 2,052 45 ĐT 67 54,10 2,386 46 ĐT 68 57,50 2,223 47 ĐT 69 59,45 2,424 48 ĐT 71 46,25 2,102 49 ĐT 72 75,85 2066 50 ĐT 73 55,20 2,095 51 ĐT 74 43,10 2,096 52 ĐT 75 61,90 1,910 53 ĐT 78 48,80 2,148 54 ĐT 79 58,15 2,125 55 ĐT 80 63,25 2,196 56 ĐT 82 57,75 2,172 57 ĐT 84 46,30 2,020 58 ĐT 85 45,45 2,135 59 ĐT 86 46,00 2,162 60 ĐT 87 41,60 2,002 61 ĐT 88 50,70 2,079 62 ĐT 89 45,60 2,027 63 ĐT 90 53,20 2,022 64 ĐT 92 65,50 2,115 65 ĐT 93 56,50 2,181 66 ĐT 94 55,75 2,185 67 ĐT 95 48,90 1,962 68 ĐT 96 50,65 1,985 69 ĐT 97 57,25 2,035 70 ĐT 98 51,30 2,015 71 ĐT 99 43,40 2,136 72 ĐT100 45,56 1,925 73 ĐT101 65,20 2,038 74 ĐT102 52,30 2,135 75 ĐT103 86,62 1,956 76 ĐT104 66,30 1,985 77 ĐT105 46,78 2,015 78 ĐT107 66,50 2,200 79 ĐT109 40,95 1,963 80 ĐT110 110,52 1,895 81 ĐT113 110,25 2,185 82 ĐT114 55,96 2,015 83 ĐT115 209,10 2,065 84 ĐT117 56,51 1,982 85 ĐT118 69,12 2,158 86 ĐT123 85,78 2,085 87 ĐT124 54,62 1,986 88 ĐT126 49,65 2,017 89 ĐT127 55,12 2,056 90 ĐT128 56,85 2,019 91 ĐT129 78,19 2,185 92 ĐT130 49,65 2,019 93 ĐT132 51,65 1,841 94 ĐT136 66,70 1,944 95 ĐT140 47,90 1,855 96 ĐT141 94,90 1,833 97 ĐT145 47,70 1,980 98 ĐT146 46,50 1,865 99 ĐT147 43,65 1,968 100 ĐT148 72,55 1,896 PHỤ LỤC DANH SÁCH KẾT QUẢ KIỂU GEN CỦA CÁC MẪU NGHIÊN CỨU Kết kiểu gen STT Kí hiệu mẫu CYP2C9*3 rs9923231 rs9934438 gen VKORC1 gen VKORC1 Đt 01 AA AG AA Đt 02 AA AA AA Đt 03 AA AG AA Đt 04 AC AA AA Đt 05 AA AA AA Đt 06 AA AA AA Đt 07 AA AA AA Đt 08 AA AG AG Đt 09 AA AA AA 10 Đt 10 AA AA AA 11 Đt 11 AA AA AA 12 Đt 12 AA AA AA 13 Đt 16 AA AG AA 14 Đt 17 AA AG AA 15 Đt 18 AA AA AA 16 Đt 19 AA AA AA 17 Đt 21 AA AA AA 18 Đt 22 AA AG AA 19 Đt 23 AA AG AG 20 Đt 24 AA AA AA 21 Đt 25 AA AG AG 22 Đt 26 AA AA AA 23 Đt 27 AC AA AA 24 Đt 28 AA AG GG 25 Đt 31 AA AA AA 26 Đt 32 AA AA AA 27 Đt 33 AA AA AA 28 Đt 34 AA AA AA 29 Đt 35 AA AA AA 30 Đt 36 AA AA AA 31 Đt 38 AA AG GG 32 Đt 39 AA AG AG 33 Đt 40 AA AA AA 34 Đt 42 AC AG AA 35 Đt 44 AA AA AA 36 Đt 46 AA AG AG 37 Đt 48 AA AA AA 38 Đt 49 AA AA AA 39 Đt 51 AA AG AG 40 Đt 52 AA AA AA 41 Đt 53 AA AG AA 42 Đt 58 AA AG AA 43 Đt 61 AA AG AA 44 Đt 65 AA AA AA 45 Đt 67 AA AA AA 46 Đt 68 AA AA AA 47 Đt 69 AA AA AA 48 Đt 71 AA AG AA 49 Đt 72 AA AA AA 50 Đt 73 AA AG AA 51 Đt 74 AA AA AA 52 Đt 75 AA AA AA 53 Đt 78 AA AA AA 54 Đt 79 AA AA AA 55 Đt 80 AA AA AA 56 Đt 82 AA AA AA 57 Đt 84 AA AA 58 Đt 85 AA AG AA 59 Đt 86 AA AA AA 60 Đt 87 AA AA AA 61 Đt 88 AA AA AA 62 Đt 89 AA AG AA 63 Đt 90 AA AA 64 Đt 92 AA AG AA 65 Đt 93 AA AA AA 66 Đt 94 AA AA AA 67 Đt 95 AA AA AA 68 Đt 96 AA AA AA 69 Đt 97 AA AA AA 70 Đt 98 AA AG AA 71 Đt 99 AA AG AG 72 Đt 100 AA AA AA 73 Đt 101 AA AA AA 74 Đt 102 AA AA AA 75 Đt 103 AA AA AA 76 Đt 104 AA AA AA 77 Đt 105 AA AA AA 78 Đt 107 AA AA AA AA AA 79 Đt 109 AA AG AG 80 Đt 110 AA AA AA 81 Đt 113 AA AA AA 82 Đt 114 AA AA AA 83 Đt 115 AC GG GG 84 Đt 117 AA AA AA 85 Đt 118 AA AA AA 86 Đt 123 AA AA AA 87 Đt 124 AA AG AG 88 Đt 126 AA AG AG 89 Đt 127 AA AA AA 90 Đt 128 AA AG AA 91 Đt 129 AA AG AA 92 Đt 130 AA AA AA 93 Đt 132 AA AG AA 94 Đt 136 AA AA AA 95 Đt 140 AA AA AG 96 Đt 141 AA AA AA 97 Đt 145 AA AG AA 98 Đt 146 AA AA AA 99 Đt 147 AA AG AA 100 Đt 148 AA AA AA ... thuật, hoạt động van nhân tạo, biến chứng hay gặp việc sử dụng thuốc chống đơng máu sau thay van tim Có thể nói thay van tim thay ? ?bệnh van tim? ?? ? ?bệnh van tim nhân tạo” Nguyên nhân van tim thể người... rs9934438 gen VKORC1 Khảo sát đƣợc tần số phân bố alen SNP CYP2C9*3 SNP rs9923231, SNP rs9934438 gen VKORC1 quần thể bệnh nhân thay van tim sử dụng thuốc chống đông Acenocoumarol Bệnh Viện Tim Hà... QUAN 1.1 Bệnh lý van tim thay van tim Bệnh lý van tim bệnh phổ biến Việt Nam cấu bệnh lý tim mạch nói chung Nguyên nhân gây tổn thương van tim phần lớn di chứng bệnh lý thấp tim [2] Bệnh nhân có