Một số đặc điểm sinh học và khả năng gây bệnh thực nghiệm của vi khuẩn Riemerella anatipestifer phân lập từ vịt mắc bệnh nhiễm trùng huyết ở Việt Nam

Trong nghiên cứu này, một số đặc tính nuôi cấy và sinh hóa của các chủng vi khuẩn Riemerella anatipestifer (RA) phân lập được từ mẫu bệnh phẩm vịt mắc bệnh nhiễm trùng huyết tại Việt Nam được kiểm tra. Đồng thời, khả năng gây bệnh thực nghiệm trên vịt 2 tuần tuổi của các chủng vi khuẩn này cũng được đánh giá. Mời các bạn tham khảo!

KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM CỦA VI KHUẨN RIEMERELLA ANATIPESTIFER PHÂN LẬP TỪ VỊT MẮC BỆNH NHIỄM TRÙNG HUYẾT Ở VIỆT NAM Võ Thành Thìn*, Đặng Văn Tuấn, Lê Đình Hải Phân viện Thú y Miền Trung *Email: vothanhthin@gmail.com TÓM TẮT Trong nghiên cứu này, số đặc tính ni cấy sinh hóa chủng vi khuẩn Riemerella anatipestifer (RA) phân lập từ mẫu bệnh phẩm vịt mắc bệnh nhiễm trùng huyết Việt Nam kiểm tra Đồng thời, khả gây bệnh thực nghiệm vịt tuần tuổi chủng vi khuẩn đánh giá Kết cho thấy, vi khuẩn phát triển tốt môi trường BHI, thạch máu Chocolate hình thành khuẩn lạc có đường kính khoảng - mm, trịn lồi, rìa gọn, nhầy ướt điều kiện 37oC sau 24 – 48 giờ, đặc biệt vi khuẩn không mọc môi trường MacConkey Vi khuẩn không lên men tất loại đường mơi trường sinh hóa, phản ứng Catalase Oxidase dương tính Vi khuẩn RA có độc lực cao vịt thí nghiệm, liều LD50 từ 1,5 x 108 – 6,4 x 108 CFU/con Đường gây nhiễm tốt vịt tiêm bắp thịt da Từ khóa: Bệnh nhiễm trùng huyết vịt, vi khuẩn Riemerella anatipestifer, vịt Some biological characteristics and experimental pathogenicity of riemerella anatipestifer isolated from duck septicaemia in vietnam Vo Thanh Thin, Dang Van Tuan, Le Dinh Hai SUMMARY In this study, some culture and biochemical properties of Riemerella anatipestifer (RA) strains isolated from samples that taken in ducks with septicaemia in Vietnam were examined Meanwhile, the ability of these strains to cause experimental disease in 2-week-old ducks was also evaluated The results showed that, the bacteria grew well on BHI broth medium, on blood agar and chocolate agar, forming colonies with a diameter of about 1-2 mm, round convex, compact edges, slightly wet mucus in the condition of 37oC after 24 - 48 hours, especially bacteria not grow on MacConkey Bacteria did not ferment all sugars in biochemical medium, but Catalase and Oxidase reactions were positive The RA is highly virulent in experimental ducks, LD50 from 1.5 x 108 - 6.4 x 108 CFU/duck The best routes to infect ducks is intramuscular or subcutaneous Keywords: Duck, duck septicaemia, Riemerella anatipestifer I ĐẶT VẤN ĐỀ Ngành chăn nuôi gia cầm đầu tư phát triển mạnh mẽ Theo Cục Chăn ni, tính đến cuối năm 2020, nước có khoảng 500 triệu gia cầm Trong đó, có khoảng 82 triệu vịt chăn nuôi rải nước (Cục Chăn nuôi, 2020) Tuy nhiên, vấn đề đặt cho ngành chăn ni vịt tình hình dịch bệnh gây ảnh hưởng lớn đến hiệu kinh tế Một bệnh xuất phổ biến Việt Nam quan tâm nhiều bệnh nhiễm trùng huyết vi khuẩn Riemerella anatipestifer (RA) gây Nhiễm trùng huyết vi khuẩn RA bệnh truyền nhiễm vịt nuôi, ngỗng, gà tây 29 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 số loài gia cầm khác Bệnh phát lần vịt vào năm 1932 New York (Mỹ) (Ruiz Sandhu, 2013) Bệnh thường xảy thể cấp tính nhiễm trùng huyết mạn tính (chronic septicemia) với triệu chứng đặc trưng rối loạn thị giác, rối loạn vận động, sưng phù đầu – cổ, ngoẹo cổ, rung đầu – cổ, viêm khớp Vịt mắc bệnh bị suy gan, suy thận nội tạng khác thể làm cho vịt chết nhanh với tỷ lệ chết cao, lên đến 90% (Li cs., 2011) Ở nước ta, bệnh nhiễm trùng huyết RA gây vịt thường xuyên xảy trang trại hộ chăn nuôi vịt, gây thiệt hại đáng kể cho người chăn nuôi Theo Bùi Hữu Dũng cs (2016), xác định diện vi khuẩn RA từ mẫu bệnh phẩm vịt mắc bệnh nhiễm trùng huyết số tỉnh phía nam phương pháp PCR cho thấy có 53,94% mẫu dương tính với vi khuẩn RA Nghiên cứu Lý Thị Liên Khai Nguyễn Hiền Hậu (2018) cho thấy có 50,6% mẫu bệnh phẩm vịt nghi mắc bệnh nhiễm trùng huyết tỉnh Bến Tre dương tính với vi khuẩn RA Năm 2020, Võ Thành Thìn cs tiến hành phân lập định danh vi khuẩn RA từ mẫu bệnh phẩm vịt bệnh nhiễm trùng huyết nhiều địa phương nước Trong nghiên cứu này, số đặc tính ni cấy, sinh hóa khả gây bệnh thực nghiệm vịt chủng RA đánh giá để có sở tiếp tục nghiên cứu lựa chọn chủng giống đủ tiêu chuẩn dùng cho sản xuất vắc-xin phòng bệnh II NGUYỆN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu - Chủng vi khuẩn RA: Võ Thành Thìn cs (2020) phân lập từ mẫu bệnh phẩm vịt mắc bệnh nhiễm trùng huyết Việt Nam - Môi trường dùng nuôi cấy vi khuẩn RA: BHI, thạch máu, thạch Chocolate MacConkey - Mơi trường, hóa chất dùng để xác định đặc tính sinh hóa vi khuẩn RA: Kit API 20 NE (BioMerieux), NaCl 0,85%, James (BioMerieux, 70.542), NIT + NIT 30 (BioMerieux, 70.442), Zn (BioMerieux, 70.380), Oxidase (BioMerieux, 55.635) - Động vật thí nghiệm: vịt tuần tuổi, khỏe mạnh 2.2 Nội dung nghiên cứu - Xác định đặc tính ni cấy số tính chất sinh hóa vi khuẩn RA; - Đánh giá khả gây bệnh thực nghiệm vịt số chủng vi khuẩn RA: + Độc lực vi khuẩn vịt; + Liều gây chết 50% (LD50) đường gây nhiễm tối ưu vịt + Đánh giá số bệnh tích đại thể vi thể vịt gây nhiễm 2.3 Phương pháp nghiên cứu Đặc tính ni cấy vi khuẩn RA kiểm tra cách nuôi cấy vi khuẩn môi trường thạch máu, thạch Chocolate, MacConkey BHI điều kiện hiếu khí 37oC sau 24 – 48 Sau đó, quan sát hình thái khuẩn lạc khả phát triển vi khuẩn mơi trường Đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn RA xác định kit API 20NE Quy trình thực dánh giá kết theo hướng dẫn nhà cung cấp kit (BioMerieux, Pháp) Kiểm tra tính chất Catalase Oxidase theo Markey cs (2013) Độc lực vi khuẩn RA vịt đánh giá dựa theo Seo cs (2013) Vi khuẩn RA nuôi cấy môi trường BHI/ 37oC/ 24 Pha loãng canh khuẩn, đếm số lượng vi khuẩn tiến hành gây nhiễm cho vịt tuần tuổi theo đường tiêm bắp, chủng vi khuẩn gây nhiễm cho Theo dõi vịt thí nghiệm ngày để đánh giá thời gian nung bệnh, phát bệnh triệu chứng lâm sàng đến ngày Vịt chết mổ khám để đánh giá bệnh tích phân lập lại vi khuẩn RA Liều gây chết 50% vịt thí nghiệm (LD50) đánh giá dựa theo Cammayo cs (2020) Vi khuẩn RA nuôi cấy môi trường KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 BHI/ 37oC/ 24 giờ, xác định số lượng vi khuẩn, sau pha lỗng canh khuẩn nồng độ khác Tiến hành gây nhiễm cho vịt tuần tuổi theo đường tiêm da, tiêm bắp, tiêm tĩnh mạch, nhỏ mũi cho uống với liều 0,2 ml/con Theo dõi vịt thí nghiệm ngày để đánh giá thời gian nung bệnh, khởi phát phát bệnh, số lượng vịt sống/ chết đến 10 ngày để tính LD50 Giá trị LD50 vi khuẩn vịt xác định theo Reed Muench (1938) Căn vào giá trị LD50 để đánh giá độc lực vi khuẩn lựa chọn đường gây nhiễm tối ưu vịt Tất vịt chết trình thí nghiệm mổ khám đánh giá bệnh tích đại thể vi thể (tim, gan, lách, não, phổi), phân lập lại vi khuẩn RA Mẫu xét nghiệm vi thể bảo quản formalin 10% Mẫu sau cố định vùi parafin, đúc khối parafin, cắt, dán mảnh cắt nhuộm Hematoxylin – Eosin Quá trình phân tích đánh giá bệnh tích vi thể thực Bộ môn Bệnh lý – Khoa Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam a III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đặc tính ni cấy đặc tính sinh hóa vi khuẩn RA Các chủng vi khuẩn RA phân lập từ mẫu bệnh phẩm vịt mắc bệnh nhiễm trùng huyết phát triển tốt môi trường thạch máu, thạch Chocolate điều kiện hiếu khí 37oC sau 24 – 48 giờ, không phát triển môi trường MacConkey Trên môi trường thạch máu, vi khuẩn hình thành khuẩn lạc có đường kính khoảng - mm, trịn lồi, trắng trong, rìa gọn, nhầy ướt khơng gây dung huyết (hình 3.1a) Trên thạch Chocolate, vi khuẩn hình thành khuẩn lạc rìa gọn, màu trắng xám, nhầy ướt, có kích thước từ – mm (hình 3.1b) Như vậy, khả phát triển môi trường thạch máu Chocolate chủng vi khuẩn RA phân lập giống nghiên cứu khác mô tả (Krieg cs., 2011; Majhi cs., 2020) Trên môi trường BHI, vi khuẩn phát triển tốt, không lắng cặn gây đục nhẹ ống nghiệm Đặc biệt, vi khuẩn kết thành sợi đặc trưng lắc ống nghiệm (hình 3.2) – phát khả phát triển vi khuẩn mơi trường BHI mà chưa có tài liệu cơng bố b Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc vi khuẩn RA thạch máu (a) Chocolate (b) a b Hình 3.2 Vi khuẩn RA phát triển môi trường BHI a) trước lắc; b) sau lắc 31 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Một số đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn RA phân lập tiến hành kiểm tra kit API 20NE Kết thể bảng 3.1 minh họa hình 3.3 Bảng 3.1 Kết kiểm tra số đặc tính sinh hóa vi khuẩn RA TT Chỉ tiêu kiểm tra Số chủng kiểm tra Số chủng dương tính Glucose 69 Mannitol 69 Arabinose 69 Mannose 69 Maltose 69 NO3 (chuyển nitrate  nitrites; chuyển nitrate  nitrogen) 69 Tryptophane/ sinh Indol 69 Arginine dihydrolase 69 Urease 69 10 Hóa lỏng Gelatin 69 67 11 β-glucosidase 69 12 β-galactosidase 69 13 N-acetyl-glucosamine 69 14 Potassium gluconate 69 15 Capric acid 69 16 Adipic acid 69 17 Malic acid (malate) 69 18 Trisodium citrate 69 19 Phenylacetic acid 69 20 Catalase 69 69 21 Oxidase 69 69 Hình 3.3 Kiểm tra đặc tính sinh hóa vi khuẩn RA API 20NE a) Vi khuẩn RA, trước bổ sung NIT NIT vào ống NO3; b) Vi khuẩn RA, sau bổ sung NIT NIT vào ống NO3; c) Đối chứng: vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 32 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Kết bảng 3.1 cho thấy, tất chủng vi khuẩn RA phân lập từ vịt khơng có khả lên men loại đường Glucose, Mannitol, Arabinose, Mannose, Maltose; khơng có khả chuyển nitrate thành nitrites hay nitrate thành nitrogen; không sinh Argine dihydrolase, Urease, H2S; âm tính với β-galactosidase; khơng sử dụng N-acetyl-glucosamine, Potassium gluconate, Capric acid, Adipic acid, Malic acid (malate), Trisodium citrate, Phenylacetic acid; có có 4/69 chủng (5,79%) sinh Indol, 5/69 chủng (7,24%) dương tính với β-glucosidase, 67/69 chủng (97,1%) hóa lỏng Gelatin Tất chủng có phản ứng Catalase Oxidase dương tính Theo Hinz cs (1998a), vi khuẩn RA không lên men đường mơi trường ni cấy, hóa lỏng Gelatin, không sinh Indol H2S Một số chủng RA có phản ứng Indol dương tính (Hinz cs., 1998b) Chỉ có vài chủng RA sinh Urease Arginine dihydrolase; hầu hết chủng âm tính với α- β-galactosidases, β-glucuronidase, β-glucosidase, α-mannosidase, β-glucosaminidase, Lipase C14, Fucosidase, Ornithine Lysine decarboxylases Vi khuẩn RA không chuyển Nitrate thành Nitrite, không thủy phân tinh bột; vi khuẩn sinh Oxidase, Catalase (Krieg cs., 2011) Nghiên cứu Cha cs (2015), Surya cs (2016) cho thấy vi khuẩn RA phân lập từ chim (tại Hàn Quốc) vịt (tại Ấn Độ) mang số đặc tính sinh hóa tương tự Tất chủng RA phân lập cho phản ứng Catalase Oxydase dương tính, hóa lỏng Gelatin; vi khuẩn khơng chuyển Nitrate thành Nitrite, khơng sinh Indol; khơng có khả lên men 12 loại đường, có Glucose, Mannitol, Arabinose, Mannose, Maltose Nghiên cứu gần Shancy cs (2018) cho thấy đặc tính sinh hóa đặc trưng vi khuẩn RA không động, Catalase Oxydase dương tính, khơng sinh Indol H2S, khơng chuyển hóa Nitrate, hóa lỏng Gelatin, khơng lên men nhiều loại đường Dextrose, Galactose, Lactose, Fructose, Sucrose, Xylose, Mannose, Maltose, Mannitol, Sorbitol, Dulcitol, Adonitol, Inositol, Salicin, Inulin, Arabinose, Trehalose, Melibiose, Cellobiose, Rhamnose, Raffinose Như vậy, đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn RA phân lập nghiên cứu phù hợp với kết nhiều nghiên cứu trước mô tả 3.2 Đánh giá khả gây bệnh thực nghiệm vịt số chủng vi khuẩn RA Khả gây bệnh vịt số chủng vi khuẩn RA phân lập thể bảng 3.2 Kết cho thấy, tất chủng RA có khả gây bệnh vịt Trong đó, 19/24 chủng gây chết 100%, 3/24 chủng gây chết 80% 2/24 chủng gây chết 60% vịt thí nghiệm Kết phân lập lại vi khuẩn từ mẫu bệnh phẩm vịt chết cho thấy có vi khuẩn RA Điều chứng tỏ vịt thí nghiệm chết vi khuẩn RA Theo dõi vịt thí nghiệm nhận thấy vịt xuất triệu chứng sau 24 gây nhiễm chết vòng 24 – 48 Các triệu chứng điển hình xuất tất vịt sau gây nhiễm vịt lờ đờ, bỏ ăn, tiêu chảy phân xanh, chảy nước mũi, sưng phù đầu – cổ (hình 3.4a); rung đầu – cổ, ngoẹo cổ, thường nằm ngữa, chân duỗi – đạp (hình 3.4b); lại khó khăn, vịt nằm chân duỗi bơi (hình 3.4c) Mổ khám vịt mắc bệnh chết cho thấy số bệnh tích đại thể điển hình quan sát xác vịt còi cọc, gầy; gan sưng to, bở, màng bao gan bị viêm có màu trắng đục (hình 3.5a); viêm màng ngồi bao tim có sợi huyết (hình 3.5b); lách sưng to có vết chấm lốm đốm; phổi khơng thể bệnh tích đặc trưng, số có phổi xung huyết, viêm có mũ lẫn sợi huyết; khớp sưng, phù nề Một số bệnh tích vi thể chủ yếu quan sát mẫu bệnh phẩm phổi gan vịt gây nhiễm phổi xuất huyết, hồng cầu tràn ngập lịng phế nang (hình 3.6a), phổi xuất huyết, rải rác có nhiều đám hemoshiderin màu nâu đậm hồng cầu màu đỏ (hình 3.6b), viêm phổi, thâm nhiễm tế bào viêm lòng 33 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 phế nang, phế quản (hình 3.6c); tế bào gan thối hóa khơng bào (hình 3.6d), gan sung huyết, hồng cầu tràn ngập mạch quản vi quản xuyên tâm (hình 3.6e), thâm nhiễm Bảng 3.2 Độc lực vi khuẩn RA vịt STT Chủng vi khuẩn Liều gây nhiễm (CFU/con) Đường gây nhiễm Số lượng (con) Số phát bệnh (con) Số chết (con) Tỷ lệ chết (%) Phân lập lại vi khuẩn ĐN14 2,2 x 109 Bắp thịt 5 100,00 + ĐN16 1,7 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + VTB1 1,5 x 109 Bắp thịt 5 100,00 + VTB3 1,3x 10 Bắp thịt 5 100,00 + VTB7 3,4x 10 Bắp thịt 5 100,00 + VTH7 2,6 x 109 Bắp thịt 5 100,00 + VTH14 3,5 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + VTH15 2,1 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + VTH16 1,9 x 109 Bắp thịt 5 100,00 + 10 VTH17 1,4 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + 11 62L 1,8 x 109 Bắp thịt 5 100,00 + 12 116L 1,5 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + 13 LA2 2,2 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + 14 VTB2 2,7 x 109 Bắp thịt 5 100,00 + 15 VTH6 2,6 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + 16 36T 1.6 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + 17 VTB10 1,9 x 109 Bắp thịt 5 100,00 + 18 VTH12 1,8 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + 19  VTH4 1,8 x 10 Bắp thịt 5 100,00 + 20 VTB5 2,1 x 109 Bắp thịt 5 80,00 + 21 VTB13 1,6 x 10 Bắp thịt 5 80,00 + 22 LA5 2,4 x 109 Bắp thịt 5 80,00 + 23 VTH8 3,2 x 10 Bắp thịt 5 60,00 + 24 VBĐ1 2,4 x 10 Bắp thịt 5 60,00 + 25 Đ chứng không tiêm Bắp thịt 0 0,00 - Hình 3.5 Một số triệu chứng thường gặp vịt gây nhiễm a) Vịt sưng phù đầu; b) Vịt nằm ngữa, chân duỗi – đạp, ngoẹo cổ; c) Vịt nằm, chân duỗi bơi 34 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Hình 3.6 Một số bệnh tích đại thể vịt gây nhiễm a) Gan sưng to, bở, màng bao gan bị viêm có màu trắng đục; b) Viêm màng bao tim có sợi huyết Hình 3.6 Một số bệnh tích vi thể vịt gây nhiễm a) phổi xuất huyết, hồng cầu tràn ngập lòng phế nang, HE x 100; b) phổi xuất huyết, rải rác có nhiều đám hemoshiderin màu nâu đậm hồng cầu màu đỏ, HE x 200; c) viêm phổi, thâm nhiễm tế bào viêm lòng phế nang, phế quản, HE x 200; d) tế bào gan thối hóa khơng bào, HE x 200; e) gan sung huyết, hồng cầu tràn ngập mạch quản vi quản xuyên tâm, HE x 400; f) thâm nhiễm tế bào viêm gan, HE x 400; g) tế bào gan thối hóa mỡ, HE x 400; h) phổi vịt đối chứng: lòng phế nang rỗng, sáng, HE x 400; i) gan vịt đối chứng: tế bào gan xếp trật tự, bắt màu hồng đều, HE x 400 tế bào viêm gan (hình 3.6f), tế bào gan thối hóa mỡ (hình 3.6g) Các biến đổi bệnh lý vi thể tim, não lách không rõ ràng Đây công bố Việt Nam triệu chứng, bệnh tích đại thể vi thể bệnh nhiễm trùng huyết vi khuẩn RA gây vịt 35 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Như vậy, chủng vi khuẩn RA phân lập có khả gây bệnh vịt Theo Ruiz Sandhu (2013), vịt – tuần tuổi xem mẫn cảm vi khuẩn RA thường chết vòng – ngày sau xuất triệu chứng Nghiên cứu Seo cs (2016) cho thấy với liều gây nhiễm x 109 CFU/con đường tiêm bắp, vi khuẩn RA gây chết 80 – 100% vịt thí nghiệm vịng ngày sau gây nhiễm Để đánh giá xác liều gây nhiễm đường gây nhiễm tối ưu vi khuẩn RA vịt, tiến hành xác định giá trị LD50 10 chủng vi khuẩn RA đại diện Kết trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3 Kết xác định LD50 đường gây nhiễm vi khuẩn RA vịt LD50 (CFU/0,2ml/con) STT Chủng vi khuẩn Dưới da Bắp thịt Tĩnh mạch Nhỏ mũi Cho uống VTH16 2,3 x 108 4,0 x 108 3,5 x 108 > 1010 > 1010 VTH17 4,0 x 10 2,7 x 10 1,5 x 10 > 10 10 > 1010 36T 5,0 x 108 2,1 x 108 4,0 x 108 > 1010 > 1010 DN14 6,0 x 10 3,0 x 10 6,0 x 10 > 10 10 > 1010 LA2 5,2 x 108 2,9 x 108 2,5 x 108 > 1010 > 1010 116L 6,0 x 108 3,0 x 108 4,3 x 108 > 1010 > 1010 VTB1 5,6 x 10 6,4 x 10 4,2 x 10 > 10 10 > 1010 VTB7 2,3 x 108 3,7 x 108 4,5 x 108 > 1010 > 1010 VTH14 2,5 x 108 2,7 x 108 4,8 x 108 > 1010 > 1010 10 62L 3,4 x 10 3,8 x 10 6,2 x 10 > 10 > 1010 8 8 Kết bảng 3.3 cho thấy, giá trị LD50 10 chủng RA gây nhiễm cho vịt qua đường da giao động từ 2,3 x 108 – 6,0 x 108 CFU/0,2ml/con, đường tiêm bắp thịt từ 2,1 x 108 – 6,4 x 108 CFU/0,2ml/con, đường tĩnh mạch từ 1,5 x 108 – 6,2 x 108 CFU/0,2ml/con Đối với đường gây nhiễm qua nhỏ mũi cho uống, giá trị LD50 > 1010 CFU/0,2ml/con Giá trị LD50 chủng vi khuẩn vịt gây nhiễm qua đường da, bắp thịt tĩnh mạch có khác nhau, sai khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), ngoại trừ thời gian chết gây nhiễm qua đường tĩnh mạch Vịt gây nhiễm vi khuẩn RA đường tĩnh mạch thường chết nhanh (trong khoảng 24 sau gây nhiễm) nên khó để đánh giá triệu chứng bệnh tích Vì vậy, đường gây nhiễm vi khuẩn RA cho vịt thích hợp tiêm da tiêm bắp thịt 36 8 8 8 8 10 Đã có nhiều nghiên cứu đánh giá độc lực giá trị LD50 vi khuẩn RA vịt Các kết không đồng nhất, tùy thuộc vào độc lực, nguồn gốc vi khuẩn thời điểm nghiên cứu Một số nghiên cứu Trung Quốc cho thấy, giá trị LD50 chủng RA độc lực cao Th4 4,41 x 108 CFU (Hu cs., 2011), chủng CH3 4,46 x 107 CFU (Yu cs., 2016), chủng CH1 1,44 x 108 CFU (Yuan cs., 2019) Năm 2016, Ni cs xác định chủng Yzb1 Trung Quốc có độc lực cao gấp 1.000 lần chủng Th4 (LD50 = 5,71 x 105 CFU) Các chủng vi khuẩn RA đột biến làm giảm độc lực thường có giá trị LD50 vịt cao (> 1010 CFU) chủng RA∆604 (Yu cs., 2016), Yb2∆pncA (Wang cs., 2016), CH1∆gldK (Yuan cs., 2019) Theo Gong cs (2020), chủng vi khuẩn RA có độc lực cao vịt thường có giá trị LD50 vào khoảng 108 CFU, số chủng có LD50 thấp Đối với chủng độc lực KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 yếu khơng có độc lực, giá trị LD50 ≥ 1010 CFU Như vậy, kết thu độc lực giá trị LD50 khẳng định chủng vi khuẩn RA phân lập nghiên cứu có độc lực cao vịt có khả gây bệnh thực nghiệm vịt với triệu chứng, bệnh tích điển hình bệnh nhiễm trùng huyết IV KẾT LUẬN Các chủng vi khuẩn RA phân lập tư mẫu bệnh phẩm vịt mắc bệnh nhiễm trùng huyết phát triển tốt môi trường thạch máu, thạch Chocolate điều kiện 37oC sau 24 – 48 giờ, không mọc môi trường MacConkey Vi khuẩn tạo thành sợi đặc trưng nuôi cấy môi trường BHI Vi khuẩn không lên men tất loại đường môi trường sinh hóa, có phản ứng Catalase Oxidase dương tính chun đề: Nơng nghiệp), 90-97 Võ Thành Thìn, Đặng Văn Tuấn, Lê Đình Hải, 2020 Phân lập vi khuẩn Riemerella anatipestifer từ mẫu bệnh phẩm vịt có triệu chứng nghi mắc bệnh nhiễm trùng huyết Khoa học kỹ thuật thú y, 27(3), 26-31 BioMerieux, API 20NE (Ref 20 050) Identification system for non-fastidious, non-enteric gram-negative rods Cammayo, P.L.T., Fernandez-Colorado, C.P., Flores, R.A., Roy, A., Kim, S., Lillehoj, H.S., Kim, W.H., Min, W., 2020 IL-17A treatment influences murine susceptibility to experimental Riemerella anatipestifer infection Developmental and Comparative Immunology, 106, 103633 Vi khuẩn RA có độc lực cao vịt Vịt xuất triệu chứng sau 24 gây nhiễm chết vòng 24 – 48 Các triệu chứng điển hình xuất vịt gây nhiễm bao gồm lờ đờ, bỏ ăn, tiêu chảy phân xanh, chảy nước mũi, sưng phù đầu – cổ, ngoẹo cổ, rung đầu – cổ, lại khó khăn, thường nằm ngữa, chân duỗi bơi Liều gây chết LD50 vịt từ 1,5 x 108 – 6,4 x 108 CFU/con Đường gây nhiễm tốt vịt tiêm bắp thịt da Cha, S.Y., Seo, H.S., Wei, B., Kang, M., Roh, J.H., Yoon, R.H., Kim, J.H., Jang, H.K., 2015 Surveillance and characterization of Riemerella anatipestifer from wild birds in South Korea Journal of Wildlife Diseases, 51(2), 341-347 TÀI LIỆU THAM KHẢO Hinz, K.H., Ryll, M and Köhler, B., 1998a Detection of acid production from carbohydrates by Riemerella anatipestifer and related organisms using the buffered single substrate test Veterinary Microbiology, 60, 277-278 Cục Chăn nuôi, 2020 (http://cucchannuoi gov.vn/nganh-chan-nuoi-lam-duoc-dieuma-the-gioi-chua-lam-duoc/) Bùi Hữu Dũng, Đỗ Tiến Duy, Nguyễn Tất Toàn, Nguyễn Thị Thu Năm, Lê Thanh Hiền, Nguyễn Thị Phước Ninh, 2016 Xác định diện Duck circovirus Riemerella anatipestifer từ ca bệnh bại huyết vịt kỹ thuật PCR Khoa học kỹ thuật thú y, 23(6), 14-21 Lý Thị Liên Khai Nguyễn Hiền Hậu, 2018 Bệnh bại huyết vịt Riemerella anatipestifer gây tỉnh Bến Tre Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 54 (số Gong, Y., Yang, Y., Chen, Y., Sun, B., Xue, Y., Xu, X., Wang, X., Islam, N., Du, X., Hu, Q., 2020 Characterization of the hemolytic activity of Riemerella anatipestifer Microbiology, 166(5), 436-439 10 Hinz, K.H., Ryll, M., Köhler, B and Glünder, G., 1998b Phenotypic characteristics of Riemerella anatipestifer and similar micro-organisms from various hosts Avian Pathology, 27, 33-42 11 Hu, Q., Han, X., Zhou, X., Ding, C., Zhu, Y., Yu, S., 2011 OmpA is a virulence factor of Riemerella anatipestifer Veterinary Microbiology, 150, 278-283 37 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 12 Krieg, N.R., Staley, J.T., Brown, D.R., Hedlund, B.P., Paster, B.J., Wad, N.L., Ludwig, W., Whitman, B., 2011 Genus XLIV, Riemerella In: Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, 2nd edition, Vol Edited by Krieg, N.R., Ludwig, W., Whitman, W., Hedlund, B.P., Paster, B.J., Staley, J.T., Ward, N., Brown, D Springer, 253-264 13 Li, J.X., Tang, Y., Gao, J.Y., Huang, C.H., and Ding, M.J., 2011 Riemerella anatipestifer infection in chickens Pakistan Veterinary Journal, 31(1), 65-69 14 Majhi, C., Jena, G.R., Dash, L., Kumar, D., Mishra, S.K., Mishra, A., Elmorsy, M.A, and Das, M.R., 2020 Isolation and identification of Riemerella anatipestifer from Duck in Odisha, and its susceptibility to antibiotics and therapeutic management Journal of Entomology and Zoology Studies, 8(2), 133137 15 Markey, B., Leonard, F., Archambault, M., Cullinane, A., Maguire, D., 2013 Chapter 2: Bacterial pathogens: Microscopy, culture and identification In: Clinical veterinary microbiology, 2nd edition Edited by Markey, B., Leonard, F., Archambault, M., Cullinane, A., Maguire, D Elsevier, 29 16 Ni, X, Jiang, P., Xing, L., Ou, C., Yu, H., Qi, J., Sun, B., Cui, J., Wang, G., Hu, Q., 2016 Genome-wide mining of potential virulenceassociated genes in Riemerella anatipestifer using random transposon mutagenesis Veterinary Microbiology,189, 52-58 17 Reed, L.J., and Muench, H., 1938 A simple method of estimating fitty percent endpoins The American Journal of Hydrogene, 27(3), 493-497 18 Ruiz, J.A and Sandhu, T.S., 2013 Riemerella anatipestifer infection In: Diseases of poultry, 13th edition Edited by 38 Swayne, D.E., Glisson, J.R., McDougald, L.R., Nolan, L.K., Suarez, D.,L., and Nair, V., Wiley Blackwell, 824-828 19 Seo, H.S., Cha, S.Y., Kang, M., Jang, H.K., 2013 Chicken embryo lethality assay for determining the virulence of Riemerella anatipestifer isolates Avian Pathology, 42(4), 387-392 20 Shancy, C., Priya, P.M., Sabnam, V.S., Syam, R and Mini, M., 2018 Rapid detection of Riemerella anatipestifer isolates using 16S rRNA based PCR and species- specific assay International Journal of Science, Environment and Technology, 7(5), 18021812 21 Surya, P.S., Priya, P.M and Mini, M., 2016 Biotyping and antibiogram of Riemerella anatipestifer from ducks in Kerala Bioscience Biotechnology Rerearch Communications, 9(3), 457-462 22 Yuan, H., Huang, L.,  Wang, M., Jia, R., Chen, S., Liu, M., Zhao, X., Yang, Q., Wu, Y., Zhang, S., Liu, Y., Zhang, L., Yu, Y., You, Y., Role of the gldK gene in the virulence of Riemerella anatipestifer Poultry Science, 98(6), 2414-2421 Chen, X., Zhu, D., Cheng, A., 2019 23 Yu, G., Wang, X., Dou, Y., Wang, S., Tian, M., Qi, J., Li, T., Ding, C., Wu, Y., Yu, S., 2016 Riemerella anatipestifer M949_1360 gene functions on the Lipopolysaccharide biosynthesis and bacterial virulence PLoS One., doi: 10.1371/journal.pone.0160708 24 Wang, X., Liu, B., Dou, Y., Fan, H., Li, T., Ding, C., Yu, S., ,2016 The Riemerella anatipestifer AS87_01735 gene encodes Nicotinamidase PncA, an important virulence factor Applied Environmental Microbiology, 82(19), 5815-5823 Ngày nhận 1-6-2021 Ngày phản biện 15-6-2021 Ngày đăng 15-8-2021 ... Vi? ??t Nam triệu chứng, bệnh tích đại thể vi thể bệnh nhiễm trùng huyết vi khuẩn RA gây vịt 35 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Như vậy, chủng vi khuẩn RA phân lập có khả gây bệnh vịt. .. đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn RA phân lập nghiên cứu phù hợp với kết nhiều nghiên cứu trước mô tả 3.2 Đánh giá khả gây bệnh thực nghiệm vịt số chủng vi khuẩn RA Khả gây bệnh vịt số chủng vi. .. chủng vi khuẩn RA phân lập nghiên cứu có độc lực cao vịt có khả gây bệnh thực nghiệm vịt với triệu chứng, bệnh tích điển hình bệnh nhiễm trùng huyết IV KẾT LUẬN Các chủng vi khuẩn RA phân lập tư