Nghiên cứu mối liên quan giữa kiểu gen và kiểu hình đặc trưng trong bảo tồn chó phú quốc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - QUAN QUỐC ĐĂNG NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA KIỂU GEN VÀ KIỂU HÌNH ĐẶC TRƯNG TRONG BẢO TỒN CHĨ PHÚ QUỐC Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Mã số: 94 202 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: TS Chung Anh Dũng PGS.TS Trần Hoàng Dũng THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu kết nêu luận án án trung thực chưa công bố cơng trình khác Các kết người tham gia thực đồng ý cho phép sử dụng luận án Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm số liệu luận án TP HCM, ngày tháng năm Nghiên cứu sinh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC HÌNH ẢNH ii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Giới thiệu Mục tiêu đề tài 3 Những đóng góp đề tài Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài Đối tượng phạm vi nghiên cứu Chương - TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC ĐỀ TÀI 1.1 Phân loại đặc điểm giống chó Phú Quốc Việt Nam 1.1.1 Phân loại : 1.1.2 Đặc điểm 1.1.3 Chó nhà tầm quan trọng chúng Việt Nam 1.2 Nguồn gốc hình thái chó Phú Quốc 11 1.2.1 Các tài liệu cổ kiểu hình chó Phú Quốc 11 1.2.2 Hình thái đặc tính chó Phú Quốc sở phân loại trước 17 1.3 Tính trạng xốy lưng chó Phú Quốc 20 1.3.1 Cơ sở hình thái di truyền tính trạng xốy lưng 20 1.3.2 Hiện tượng khiếm khuyết khép ống thần kinh 22 1.3.3 Dị tật xoang thần kinh (Dermoid sinus - DS) chó xốy châu Phi Thái Lan 23 1.3.4 Cơ sở di truyền tính trạng xốy lưng liên quan đến triệu chứng DS chó xốy châu Phi Thái Lan 24 1.4 Một số nghiên cứu hình thái di truyền chó nhà chó Phú Quốc 27 1.4.1 Các nghiên cứu di truyền chó nhà phương pháp định lượng biến thể số lượng (copy number variants - CNV) 27 1.4.2 Các nghiên cứu hình thái kiểu gen chó Phú Quốc Việt Nam gần 30 1.5 Sự cần thiết nghiên cứu hình thái kiểu gen tính trạng xốy lưng chó Phú Quốc Việt Nam 34 1.5.1 Cơ sở khoa học nghiên cứu đa dạng kiểu hình chó nhà 34 1.5.2 Các nghiên cứu hình thái di truyền chó Phú Quốc trước 40 Chương - VẬT LIỆU - NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.1 Vật liệu 44 2.2 Nội dung nghiên cứu 44 2.2.1 Nội dung 1: Nghiên cứu đánh giá số thể đặc trưng chó Phú Quốc 44 2.2.2 Nội dung 2: Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn hình thái để chọn lọc chó Phú Quốc dựa số hình thái đặc trưng 45 2.2.3 Nội dung 3: Nghiên cứu liên quan kiểu gen kiểu hình xốy lưng chó Phú Quốc 45 2.2.4 Nội dung 4: Nghiên cứu cải thiện mơ hình bảo tồn (insitu-in vivo exsitu-in vivo) chó Phú Quốc dựa tiêu chuẩn hình thái 45 2.3 Phương pháp nghiên cứu 45 2.3.1 Nội dung 01: Nghiên cứu đánh giá số thể đặc trưng chó Phú Quốc 45 2.3.2 Nội dung 02: Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn hình thái để chọn lọc chó Phú Quốc dựa số hình thái đặc trưng 50 2.3.3 Nội dung 03: Nghiên cứu liên quan kiểu gen kiểu hình xốy lưng chó Phú Quốc 51 2.3.4 Nội dung 04: Nghiên cứu cải thiện mơ hình bảo tồn (insitu-in vivo exsitu-in vivo) chó Phú Quốc dựa tiêu chuẩn hình thái 55 2.4 Xử lý số liệu 56 2.4.1 XLSTAT 56 2.4.2 Dữ liệu đối chiếu tham khảo 56 Chương - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 57 3.1 Nghiên cứu đánh giá số thể đặc trưng chó Phú Quốc 57 3.1.1 Đánh giá số đo 58 3.1.2 Kích thước đầu chó Phú Quốc với kiểu sọ, tai mõm 62 3.1.3 Tần suất dạng xốy lưng chó Phú Quốc có xốy 64 3.1.4 Tần suất dạng màu lông, kiểu lông 68 3.1.5 Tần suất kiểu đuôi 70 3.1.6 Tần suất màu mắt, kiểu tai dài tai chó Phú Quốc 72 3.1.7 Chiều dài mõm đốm lưỡi chó Phú Quốc 74 3.1.8 Móng đeo màng bơi chó Phú Quốc 76 3.1.9 Tổng kết các số đo thể chó Phú Quốc 78 3.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn hình thái để chọn lọc chó Phú Quốc dựa số hình thái (Morphological Indexes) đặc trưng 79 3.2.1 Xác định chuẩn hóa tỷ lệ hộp sọ với chiều dài mõm 79 3.2.2 Xác định chuẩn hóa tỷ lệ thân hình, ngực, bụng, sâu ngực; tỷ lệ chiều dài thân chiều cao thể 81 3.2.3 Xác định số số hình thái phổ biến chó Phú Quốc 85 3.3 Đánh giá liên quan kiểu gen kiểu hình xốy lưng đặc trưng cho chó Phú Quốc 86 3.3.1 Đánh giá hiệu mồi từ set set mồi cho gen β - actin 86 3.3.2 Đánh giá tần suất gen R r mẫu quan sát phương pháp Livak cải tiến Pfaffl 89 3.4 Nghiên cứu cải thiện mơ hình bảo tồn chó Phú Quốc dựa tiêu chuẩn hình thái 94 3.4.1 Xây dựng đồ phân bố đảo Phú Quốc 94 3.4.2 Thiết kế, xây dựng, bố trí trại ni, chuồng ni theo tập tính tự nhiên điều kiện sống tối ưu cho chó đảo Phú Quốc 97 3.4.3 Cấy gắn chip điện tử theo dõi cá thể riêng biệt 100 KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 103 Kết luận 103 Đề nghị 103 TÀI LIỆU THAM KHẢO 104 DANH MỤC CÔNG TRÌNH CƠNG BỐ 113 PHỤ LỤC 114 Số liệu thu mẫu – thống kê 114 Hóa chất – Dụng cụ - Thiết bị 129 Mẫu phiếu điều tra 132 i LỜI CẢM ƠN Hồn thành luận án cho phép tơi gửi lời cảm ơn chân thành tới: Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam giảng viên, cán nghiên cứu, chuyên viên văn phòng tận tình hỗ trợ tạo nhiều điều kiện cho tơi q trình học tập, nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Chung Anh Dũng – người hướng dẫn, người thầy, động viên hỗ trợ chuyên môn cho suốt q trình thực nghiên cứu hồn thành luận án; xin cảm ơn PGS.TS Trần Hoàng Dũng, người có hướng dẫn tận tình góp ý công tác, hoạt động tổ chức thực nội dung luận án Xin cảm ơn quan, ban ngành, đồn thể tạo điều kiện cho tơi thu thập số liệu thực nghiệm góp ý chuyên môn nội dung luận án Xin cám ơn cộng sự, người gắn bó hỗ trợ tơi thực công tác khoa học phục vụ nội dung luận án Xin cám ơn gia đình, người thân thiết động viên lúc khó khăn Cảm ơn em con, cho anh sức mạnh nghị lực vượt qua chặng đường dài Xin cám ơn quan công tác: Trung tâm Phát triển Khoa học Cơng nghệ Trẻ -Thành Đồn TP HCM Cục Cơng tác phía Nam - Bộ Khoa học Cơng nghệ hỗ trợ tạo nhiều điều kiện giúp đỡ cho tơi hồn thành q trình học tập hoàn thiện kết nghiên cứu Trân trọng./ TP.HCM, tháng năm 2021 ii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Ảnh chó Phú Quốc Việt Nam, hình ảnh nhóm nghiên cứu tự chụp Đảo Phú Quốc, Rạch Giá, Kiên Giang, Việt Nam Hình 1.2 Các dạng xốy lưng chó Phú Quốc [1] Hình 1.3 Chó Bắc Hà Việt Nam Hình 1.4 Chó H'mơng cộc trưởng thành 10 Hình 1.5 Chó Phú Quốc 11 Hình 1.6 Bài viết chó Phú Quốc báo La Nature [84] 12 Hình 1.7 Tài liệu cơng bố Tiến sĩ Baurac hoạt động kinh tế văn hóa miền Tây, Nam Kỳ, 1894 [14] 14 Hình 1.8 Bảng tiêu chuẩn mơ tả chó Phú Quốc dựa cá thể ( Xoài – Mango) Bá Tước Henri de Bylandt, xuất năm 1897 [23] 15 Hình 1.9 Chó xốy Thái Lan (http://www.dogbreedinfo.com/thairidgeback.htm) 17 Hình 1.10 Chó xốy Rhodesian châu Phi (http://www.bigdogbreeds101.com/dogs/2013/04/15/rhodesian-ridgeback/) 17 Hình 1.11 Phân tích nguồn gốc 161 giống chó giới [54] 20 Hình 1.12 Quá trình phát triển phơi thụ tinh chó [27] 21 Hình 1.13 Các vị trí khép ống thần kinh động vật có xương sống người [106] 22 Hình 1.14 Các loại triệu chứng demoid sinus (DS) chó lưng xốy [95] 23 Hình 1.15 Các loại triệu chứng DS chó lưng xốy [58] 24 Hình 1.16 Các biến thể alen R dịng chó xoáy châu Phi [109] 29 Hình 2.1 Các tham số kích thước hình thái chó Phú Quốc Cá thể khảo sát giữ đứng thẳng trình đo 48 iii Hình 2.2 Đo số tiêu kiểu hình chó Phú Quốc 49 Hình 2.3 (a) Vị trí vùng lặp hay nhân lên khoảng 133kb NST 18 chó xốy Châu Phi (b) Các set mồi sử dụng xác định NST số 18 54 Hình 3.1 Một số cá thể chó Phú Quốc huyện đảo Phú Quốc 57 Hình 3.2 Chiều cao thân tính đến vai (BHW) cân nặng (BW) chó lưng xốy Phú Quốc so với chó lưng xốy Thái Lan Châu Phi 61 Hình 3.3 Chiều dài mõm, chiều dài rộng hộp sọ quần thể 175 cá thể chó Phú Quốc Khảo sát, tính cm với hai giới tính đực (n=175) 63 Hình 3.4 Các dạng xốy lưng quan sát quần thể mẫu chó Phú Quốc (n=175) 65 Hình 3.5 Số lượng cá thể với hình dạng xốy lưng phân chia theo giới tính chó xốy Phú Quốc (n=143) 67 Hình 3.6 Số lượng tỷ lệ màu sắc lơng chó Phú Quốc phân theo nhóm lớn 69 Hình 3.7 Hình dạng chó Phú Quốc, (A) đuôi thẳng, (B) đuôi cong 1/4, (C) đuôi cong 2/4, (D) cong ¾ (n=175) 70 Hình 3.8 Hình dạng chó Phú Quốc khảo sát (n=175) 71 Hình 3.9 Màu mắt chó Phú Quốc 72 Hình 3.10 Tỷ lệ màu sắc mắt chó Phú Quốc theo giới tính; vịng trịn bên cá thể cái, bên cá thể đực 73 Hình 3.11 Một số lồi có tai nhọn đứng điển hình, từ trái qua phải: chó sói, Malamute, Basenji chó Phú Quốc 74 Hình 3.12 Đốm lưỡi chó Phú Quốc; (A) nhỏ 50% diện tích lưỡi, (B) lớn 50% diện tích lưỡi (C) chiếm 100% diện tích lưỡi (n=175) 74 Hình 3.13 Diện tích đốm lưỡi chó Phú Quốc quan sát theo giới tính; vịng trịn bên ngồi cá thể cái, bên cá thể đực 75 iv Hình 3.14 Móng đeo chó Phú Quốc 76 Hình 3.15 Móng đeo chân sau quần thể chó Phú Quốc khảo sát 77 Hình 3.16 Màng bơi chân chó Phú Quốc 78 Hình 3.17 Tương quan chiều dài mõm chiều dài hộp sọ chó Phú Quốc 80 Hình 3.18 Tương quan chiều dài thân (BL) chiều cao vai (BHW) chó Phú Quốc 81 Hình 3.19 Tương quan kích thước vịng ngực vịng hơng chó Phú Quốc 84 Hình 3.20 Kích thước vịng ngực vịng hơng chó Phú Quốc (n=175) 84 Hình 3.21 Kiểm tra trình tự đoạn mồi cá thể phân tích 88 Hình 3.22 Số biến thể gen (RCN) cá thể quan sát (hình trên) số biến thể gen trung bình kiểu gen đồng hợp trội (RR), dị hợp (Rr), đồng hợp lặn (rr) gen xốy lưng chó Phú Quốc 93 Hình 3.23 Vị trí thu mẫu xây dựng mơ hình bảo tồn Phú Quốc 94 Hình 3.24 Mơ hình trại nuôi bán bảo tồn Củ Chi Vũng Tàu 96 Hình 3.25 Mơ hình trại ni bảo tồn chó xốy lưng Phú Quốc 97 Hình 3.26 Khu vực ni chó bố mẹ làm giống khu vực nuôi ổ sau đẻ con, trại bán bảo tồn Vũng Tàu 98 Hình 3.27 Các cá thể chó Phú Quốc đồng hợp lặn tính trạng xốy lưng (mơ hình ni Vũng Tàu) 98 Hình 3.28 Ống tiêm gây mê gắn chip điện tử 100 Hình 3.29 Chip điện tử, máy dò bảng điện tử đọc số ID 101 Hình 3.30 Ổ chó mẹ bầy chó Phú Quốc trại bán bảo tồn Vũng Tàu 102 119 161 20 21 39 34 45 39 11 29 11,0 21,0 21,0 162 21 17 47 45 66 56 29 11,0 22,0 20,5 163 22 16 62 51 57 49 11 28 10,5 20,0 20,0 164 19 17 53 51 48 39 10 29 11,0 22,0 22,0 165 18 18 40 35 58 51 30 9,5 19,0 19,0 166 22 17 54 44 65 53 11 32 11,0 22,0 21,0 167 24 17 39 36 60 46 11 34 9,5 19,0 19,0 168 22 16 54 49 50 40 30 10,5 21,0 21,0 169 24 18 54 46 48 38 11 29 9,5 19,0 19,0 170 24 16 47 46 70 54 31 9,5 19,0 19,0 171 24 20 63 52 69 56 11 31 10,5 21,0 20,0 172 20 21 56 45 67 52 10 31 9,5 19,0 19,5 173 19 19 56 53 59 50 11 28 10,5 21,0 21,0 174 18 17 47 44 73 56 32 10,0 20,0 20,0 175 24 19 60 51 68 56 32 10,5 20,5 20,0 Phụ lục Số đo kiểu hình mẫu quan sát (n=175) STT Xốy Lơng Đàn Đen yếm violon trắng Bán n Chocolate Lông Thẳng Thẳng Đen chân Thẳng Cong kiếm vàng 2/4 Mũi tên Đen yếm Thẳng Cong Bán yên Đen chân Thẳng Cong ngựa 2/4 vàng Bán yên Vện Yên Hình Đốm MĐ MĐ Màng lưỡi trước sau bơi Địa điểm Nâu Thẳng 0,2 Có PQ Nâu Thẳng 0,0 Có PQ Nâu Thẳng 0,8 Có PQ Đen Thẳng 0,3 Có PQ Nâu Thẳng 0,2 Có PQ Nâu Thẳng 0,1 Có PQ Nâu Thẳng 0,1 Có PQ Nâu Thẳng 0,2 2 Có PQ 2/4 Thẳng Cong 2/4 Đen Thẳng ngựa Cong Hình ngựa Tai 2/4 trắng Cong Mắt 2/4 ngựa Đi Cong 3/4 Vàng bị Thẳng Cong 120 kiếm 2/4 Hình Vàng kiếm chân trắng Thẳng Cong Nâu Thẳng 0,0 Có PQ Thẳng 0,2 Có PQ Thẳng 0,8 Có PQ Thẳng 0,8 Có PQ Thẳng 0,3 Có PQ 2/4 yếm trắng 10 Bán yên vàng đỏ Thẳng Thẳng Vàng ngựa 11 Hình đậm Vàng đen Thẳng Thẳng Nâu kiếm 12 13 đậm Yên Vàng đậm ngựa pha đen Hình Vàng Thẳng Thẳng kiếm 14 Hình Vàng sáng Thẳng kiếm 15 Hình Hình Nâu 3/4 đậm Cong Nâu 2/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,2 2 Có PQ Nâu Thẳng 0,1 Có PQ Nâu Thẳng 0,2 Có PQ Cong Nâu Thẳng 0,2 Có PQ 2/4 đậm Nâu Thẳng 0,2 Có PQ Đen Thẳng 0,2 Có PQ Cong Nâu Thẳng 0,2 Có PQ 3/4 đậm Cong Nâu Thẳng 1,0 Có PQ 3/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,2 Có PQ 3/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,0 2 Có PQ Cong Nâu Thẳng 0,0 Có PQ 3/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,5 Có PQ Thẳng Nâu Thẳng 0,1 Có PQ 2/4 Xám Thẳng kiếm 16 Cong Cong 2/4 Vện Thẳng nốt Cong 2/4 nhạc 17 18 19 Mũi tên Vàng sáng Thẳng Hình Đen chân Thẳng Cơng kiếm trắng 3/4 Hình Đen Thẳng kiếm 20 21 Cong 3/4 Hình Đen yếm kiếm trắng Hình Đen Thẳng Thẳng nốt nhạc 22 23 24 Hình Đen pha kiếm vàng Bán yên Vện vàng ngựa sáng Hình Vàng Thẳng Thẳng 2/4 Thẳng kiếm 25 Hình Vàng nhạt Thẳng kiếm 26 Hình nốt 2/4 Vện Thẳng 121 nhạc 27 Hình Vàng đậm Thẳng kiếm 28 Hình Vện Thẳng kiếm 29 Hình Đỏ Thẳng kiếm 30 Hình Hình Vàng bị Thẳng Vàng Thẳng kiếm 32 Bán yên Vàng lợt Thẳng ngựa 33 Hình Đen Thẳng kiếm 34 Hình Vàng Thẳng kiếm 35 Yên Yên Vện Thẳng Hình Đen Thẳng Hình Vàng nhạt Thẳng Đen Thẳng Bán yên Vàng Hình Thẳng Đen Thẳng Bán yên Vàng nhạt Hình Thẳng PQ Nâu Thẳng 0,3 Có PQ Cong Vàng Thẳng 0,2 Có PQ 3/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,8 Có PQ 1/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,2 Có PQ 3/4 đậm Cong Vàng Thẳng 0,2 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,1 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,9 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,4 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 1,0 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,8 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,7 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,6 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,4 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,6 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,5 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,2 2 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Cong Cong Cong Cong Cong Cong Cong 2/4 Vện Thẳng kiếm 43 Có Nâu 2/4 ngựa 42 Cong 2/4 kiếm 41 đậm 2/4 ngựa 40 Thẳng 0,3 3/4 2/4 kiếm 39 PQ 2/4 kiếm 38 Có 2/4 ngựa 37 1/4 ngựa 36 Nâu 3/4 kiếm 31 Thẳng 0,2 Cong Cong 2/4 Mũi tên Đen Thẳng Cong 2/4 44 45 Hình Đen yếm kiếm trắng Yên Đen Thẳng 2/4 Thẳng ngựa 46 Hình Cong Cong 2/4 Đen Thẳng Cong 122 kiếm 47 Hình Đen Thẳng kiếm 48 1/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,6 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,8 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,4 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,4 2 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,2 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,8 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,6 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 0,3 2 Có TP.HCM 1/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,9 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,8 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,5 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,7 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 Có TP.HCM Vàng Thẳng 0,7 2 Có TP.HCM 2/4 Mũi tên Vện Thẳng Cong 2/4 49 Hình Đen Thẳng kiếm 50 Hình 2/4 Vảng Thẳng kiếm 51 Hình Yên Đen Thẳng Yên Vàng nhạt Thẳng Đen Thẳng ngựa 54 55 Hình Vàng Thẳng kiếm 2/4 Mũi tên Đen chân Thẳng Cong vàng 56 Hình Đen 2/4 Thẳng kiếm 57 Hình Đàn Đen Thẳng Hình Vàng Thẳng Hình Vện Thẳng Yên Vện Thẳng Đen Thẳng ngựa 62 63 Cong 2/4 kiếm 61 Cong 3/4 kiếm 60 Cong 2/4 violon 59 Cong 2/4 kiếm 58 Cong 1/4 ngựa 53 Cong 2/4 kiếm 52 Cong 3/4 Hình Đen chân Thẳng Cong kiếm trắng 2/4 Mũi tên Vện Thẳng Cong 2/4 64 Hình Đen Thẳng kiếm 65 Yên 2/4 Vện Thẳng ngựa 66 Hình Cong Cong 1/4 Đen Thẳng Cong 123 kiếm 67 68 69 Hình Đen Thẳng 74 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,2 2 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 0,5 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,6 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,1 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,7 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,9 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,2 Có TP.HCM 3/4 đậm Cong Đen Thẳng 1,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,5 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 1,0 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,6 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,3 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,4 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,5 Có TP.HCM 2/4 Hình Đen Thẳng Hình Vện Thẳng Hình 2/4 Vàng nhạt Thẳng Hình Đen Thẳng Đen yếm kiếm trắng Bán yên Đen Hình Cong 2/4 Hình Hình Cong 2/4 Thẳng Cong 2/4 Thẳng Cong 3/4 vàng đỏ Thẳng Cong 2/4 Đen Thẳng kiếm 77 trắng kiếm 76 ngựa ngựa 75 Thẳng 1,0 Cong kiếm 73 Đen Bán yên Đen chân Thẳng kiếm 72 Cong 3/4 kiếm 71 đậm kiếm kiếm 70 2/4 Cong 2/4 Mũi tên Đen Thẳng Cong 1/4 78 Hình Đen Thẳng kiếm 79 Hình Đen Thẳng kiếm 80 Hình 2/4 Vện Thẳng kiếm 81 1/4 Bán yên Vện Thẳng ngựa 82 83 Đàn Đen yếm violon vàng Hình Vện Thẳng 2/4 Thẳng kiếm 84 Hình Cong 2/4 Vện Thẳng kiếm 85 Cong Cong 2/4 Mũi tên Đen Thẳng Cong 3/4 86 Hình Vàng Thẳng Cong 124 kiếm 87 1/4 Bán yên vàng đỏ Thẳng ngựa 88 Hình Vàng Thẳng kiếm 89 Hình Hình Đen Thẳng Hình Vàng nhạt Thẳng Đen Thẳng kiếm 92 Đàn 94 95 Hình Đen Thẳng Đen Thẳng Thẳng Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,0 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,0 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 2 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 0,4 Có TP.HCM 3/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,6 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,3 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,9 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,9 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,3 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,7 Có TP.HCM Đen Thẳng 1,0 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,9 Có TP.HCM Cong Cong Hình Đàn Hình Hình Hình Yên Hình Yên Hình Hình Hình Cong 2/4 Đen Thẳng Vàng nhạt Thẳng 2/4 Vàng nhạt Thẳng Vàng Thẳng 3/4 Đen Thẳng Cong 2/4 Vàng Thẳng Cong 2/4 Đen Thẳng Cong 2/4 Đen Thẳng Cong 2/4 Vàng Thẳng Cong 2/4 Vện Thẳng kiếm 106 Đen kiếm 105 Thẳng 0,7 Hình ngựa 104 Đen Cong 3/4 kiếm 103 TP.HCM vàng ngựa 102 Có ngựa kiếm 101 Cong kiếm 100 Cong Bán yên Đen chân Thẳng kiếm 99 Thẳng 0,8 đậm 2/4 violon 98 Đen 2/4 kiếm kiếm 97 TP.HCM 2/4 kiếm 96 Có 3/4 violon 93 2/4 kiếm 91 Nâu 2/4 kiếm 90 Thẳng 0,9 Cong Cong 3/4 Đen Thẳng Cong 125 kiếm 107 Yên 2/4 Đen Thẳng ngựa 108 Hình Hình Vện Thẳng Yên Đen Thẳng Hình vàng đỏ Thẳng 113 Vện Thẳng Hình Đen yếm kiếm trắng Hình Đen Thẳng Đàn Thẳng Hình Đen Thẳng Yên Vàng Thẳng Đen Thẳng ngựa 117 Hình Hình Vàng nhạt Thẳng Hình Đen Thẳng Hình Đen Thẳng Đen Thẳng kiếm 121 Hình Hình Đen Thẳng Hình Đen Thẳng 0,4 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,5 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 0,5 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,5 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,4 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,4 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,9 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,6 2 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,3 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,4 2 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,9 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,1 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 0,6 Có TP.HCM 2/4 đậm Đen Thẳng 0,9 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,5 2 Có TP.HCM Cong Cong Cong Cong Cong Cong Cong 3/4 Vàng Thẳng kiếm 123 TP.HCM 1/4 kiếm 122 Có 2/4 kiếm 120 2/4 kiếm 119 2/4 kiếm 118 Thẳng 0,3 2/4 kiếm 116 Nâu Cong 2/4 violon 115 TP.HCM 2/4 kiếm 114 Có 2/4 kiếm 112 3/4 ngựa 111 2/4 kiếm 110 Thẳng 0,6 2/4 kiếm 109 Đen Cong Cong 2/4 Đen Thẳng nốt nhạc 124 125 Yên Đen chân Thẳng Cong ngựa vàng 2/4 Hình Vện kiếm Thẳng Cong 3/4 126 126 Hình Đen Thẳng kiếm 127 Đen Thẳng 0,8 Có TP.HCM Nâu Thẳng 1,0 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,1 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,3 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,5 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,4 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,3 Có TP.HCM Đen Thẳng 1,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,8 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 0,9 2 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,7 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,1 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,7 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Cong Nâu Thẳng 0,2 2 Có TP.HCM 3/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,5 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,1 Có TP.HCM Cong 2/4 Mũi tên Vện Thẳng Cong 3/4 128 Hình vàng đỏ Thẳng kiếm 129 Hình 2/4 Vện Thẳng kiếm 130 Hình Đen Thẳng kiếm 131 Hình 2/4 Đen Thẳng kiếm 132 Hình Cong 2/4 Đen Thẳng kiếm 133 Cong Cong 2/4 Mũi tên Vàng nhạt Thẳng Cong 2/4 134 Hình Đen Thẳng kiếm 135 Hình 3/4 Vàng Thẳng kiếm 136 Yên Đen Thẳng ngựa 137 Hình 3/4 Đen Thẳng kiếm 138 Hình Hình Vện Thẳng Vàng đậm Thẳng kiếm 140 Đàn 2/4 Đen Thẳng violon 141 142 Đen Thẳng Thẳng kiếm 143 Hình 2/4 Vàng Thẳng kiếm 144 khơng khơng xốy Cong 2/4 Vàng Thẳng xoáy 145 Cong 1/4 Mũi tên Đen Hình Cong 2/4 kiếm 139 Cong Cong 2/4 Đen Thẳng Cong 1/4 127 146 khơng Đen Thẳng xốy 147 khơng Vện Thẳng xốy 148 khơng Đen Thẳng xốy 149 khơng khơng Vện Thẳng Đen Thẳng xốy 151 khơng khơng Trắng Thẳng không Vàng Thẳng 155 156 Vàng Thẳng không đen chân xốy trắng khơng Đen yếm xốy trắng khơng Vàng nhạt không Thẳng không Thẳng không Thẳng Vàng Thẳng Vện Thẳng không Vện Thẳng không Vàng Thẳng Đen Thẳng xốy 162 khơng khơng Vện Thẳng khơng Vàng Thẳng khơng xốy Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,3 Có TP.HCM 3/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,1 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,4 2 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,3 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,1 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,1 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,0 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Vàng Thẳng 0,3 Có TP.HCM 3/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,4 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,0 2 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,1 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,1 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,5 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,0 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,5 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,0 2 Có TP.HCM Cong Cong Cong Cong Cong Cong Cong Cong Cong 1/4 Vàng đậm Thẳng xoáy 165 Thẳng 0,4 đậm 2/4 xoáy 164 Đen 3/4 3/4 xoáy 163 TP.HCM 3/4 xốy 161 Có Vàng 3/4 xốy 160 Cong 3/4 xoáy 159 đậm 3/4 xoáy 158 Thẳng 0,1 3/4 3/4 xốy 157 TP.HCM 1/4 xốy 154 Có 3/4 xoáy 153 2/4 xoáy 152 Vàng 3/4 xoáy 150 Thẳng 0,0 Cong Đen Thẳng 3/4 128 166 không Vàng Thẳng xốy 167 khơng khơng Vàng Thẳng khơng Trắng Thẳng không Vàng nhạt Thẳng không Đen Thẳng Đen Thẳng xốy 172 khơng khơng Vện Thẳng Đen Thẳng xốy 174 khơng khơng xốy Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,1 Có TP.HCM Nâu Thẳng 0,2 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,0 2 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Đen Thẳng 0,2 2 Có TP.HCM Cong Vàng Thẳng 0,1 Có TP.HCM 2/4 đậm Cong Nâu Thẳng 0,1 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Đen Thẳng 0,0 Có TP.HCM Cong Cong Cong 2/4 Vàng Thẳng xốy 175 TP.HCM 2/4 xốy 173 Có 2/4 xốy 171 3/4 xoáy 170 1/4 xoáy 169 Thẳng 0,5 1/4 xoáy 168 Nâu Cong Cong 2/4 Đen Thẳng Cong 2/4 129 Hóa chất – Dụng cụ - Thiết bị Phụ lục Các hóa chất dùng tách chiết DNA Tên Hãng sản xuất Mã hàng hoá Inc – HiMedia Canada – Ấn Độ Bio Basic Inc – Tris-HCl 10 mM 1009HLS0708B1210L Bio Basic Triton x100 1% MB031 SDS 1% 288.38 EDTA 10 mM, pH 8,0 Proteinase K (20 mg/ml) 1101SHLS1206B110L Bio CanadaBasic Inc – 00067731 Fermentas – Canada Canada Phenol FE04820250 Scharlau – Úc Chloroform 1010312 Chemsol – Mỹ Isoamyl alcohol 123-51-3 VWR – Mỹ NaCl 3M 1107NBUC21E2B1 Bio Ethanol tuyệt đối lạnh 07K270508 Ethanol 70% lạnh 07K270508 VWR Canada– Mỹ VWR – Mỹ Basic Inc – TE 1X - Tris-HCl 1M (pH 7,5) 1009HLS0708B1210L Bio Basic Inc – - EDTA 0,5 M (pH 8,0) 1101SHLS1206B110L Bio CanadaBasic Inc – Canada Phụ lục Các hoá chất dùng cho phản ứng PCR Tên My Taq TM Mix Mã hàng Hãng sản xuất BIOLINE – Taq Plus DNA polymerase PCR BIO-25041 hoá 090120 Đệm PCR 10X VG1211 ABM Quốc – Canada ABM - Canada Mồi 15412F (10 µM) 97252531 IDT – Mỹ Mồi 16625R (10 µM) 97252532 IDT – Mỹ (200mM Tris-HCl (pH 8,4), 200mM KCl,5% Tween 20 chất ổn định enzyme) Nước cất lần Anh 130 Phụ lục Các hóa chất dùng điện di Tên Mã hàng hoá Hãng sản xuất 110830BB013 Bio Basic Inc – Agarose Canada Đệm TBE 1X (Tris – Borate –111031BB024 Bio Basic Inc – Canada EDTA) Đệm nạp mẫu DNA: loading buffer APOD007102 GenOn – Đức Ethidium Bromide 6X 612-278-00-6 Merck KGaA – Đức Phụ lục Một số dụng cụ sử dụng đề tài Đầu tip đầu tip trắng (10 µl), đầu tip vàng (100 µl) đầu tip xanh (1000 µl) Eppendorf ml; 1,5 ml; 0,5 ml 0,2 ml Micropipette 100 – 1000 µl, 20 – 200 µl, 10 – 100 µl, – 20 µl 0,5 – 10 µl 131 Phụ lục Một số thiết bị sử dụng đề tài Tên Hãng sản xuất Tủ đông lạnh -20ºC KW Apparecchi Scientifici (Italia) Tủ mát 4ºC Sharp (Nhật Bản) Máy ly tâm Eppendorf (Đức) Bể ổn nhiệt Jinan Labtek Biological (Trung Quốc) Nồi hấp vô trùng Tomy Seiko (Nhật Bản) Máy đo pH Hanna (Bồ Đào Nha) Máy PCR Esco Swift Minipro Esco Micro Pte Ltd (Singapore) Bộ điện di nguồn điện Hoefer (Mỹ) Lị vi sóng nấu gel Sanyo (Nhật Bản) Tủ an toàn sinh học Esco Micro Pte Ltd (Singapore) Máy khuấy từ gia nhiệt IKA (Đức) pH kế Mettler Toledo (Thụy Sĩ) Tủ sấy Binder (Đức) 132 Mẫu phiếu điều tra Phụ lục Phiếu điều tra giống chó Phú Quốc Số phiếu:…….…………………………………………………………………… Người điều tra:…… …………………………………………………………… Đơn vị công tác:………… …………………………………………………… A Thông tin chó Ngày thu mẫu: Số ảnh chó: Số thứ tự: Tên chủ hộ: Địa thu mẫu: Tên chó: Phả hệ chó (nếu có): Là ………………… chó…………………số phiếu (nếu có):………………… B Các tính trạng định lượng: Tuổi (tháng): Vịng ngực (cm): Cân nặng (kg): Vịng hơng (cm): Giới tính: a Đực b Cái Chiều dài tai (cm): Chiều dài thân (cm): Chiều dài đuôi (cm): Chiều cao thân đến vai (cm): 10 Chiều dài mõm (cm): 11 Các dạng xoáy lưng; 12 Màu lơng kiểu lơng; 13 Hình dạng đi; 14 Màu mắt; 15 Hình dạng tai; 16 Màu sắc mõm; 17 Đốm lưỡi; 18 Móng đeo; 19 Màng bơi Cán điều tra 133 Phụ lục Phiếu điều tra sở ni nhân giống chó (Mỗi phiếu dùng cho hộ) Nhóm:…………… Xã:…………………Ấp:………………………………… Ngày:………………………… Tên chủ hộ: ………………………………………… Địachỉ:………………………………………………………………………… Số chó ni: (đực, cái, tháng, tuổi): Hình thức chăn ni: (nhốt, cột, thả, khác): Chăm sóc, vệ sinh: (tắm, chải lơng, hốt phân, bắt KST) Cách cho ăn: (máng, nồi, tô, đồ đất) Số lần/ ngày: ………………… Số lượng/ lần: …………………………… Thức ăn: • Thức ăn thừa người: cơm, cá , thịt, rau, xương, ………………… • Cho ăn thêm: cá, cua, thịt, khơ, sữa, …………………………………… • Khơng cho ăn: tự tìm thức ăn Săn mồi để ăn hàng ngày, thỉnh thoảng, mồi gì…………… • Những vật lạ chó thường ăn: phân người, dây thun, bọc nilong, ………… Sinh hoạt khác: dẫn dạo, huấn luyện, ngủ (trong nhà, giường, kệ, đất, sân, …………….) Mục đích ni: giữ nhà, săn, làm cảnh, bán, làm bạn, khơng mục đích Tiêm ngừa dại, xổ lãi, cách phịng bệnh khác Xử lý chó bệnh: cho uống thuốc nam, thuốc tây, chích, đem thú y sỹ, y tế, cho ăn loại thức ăn đặc biệt để trị bệnh, khơng can thiệp Ưu điểm: khôn giữ nhà, săn, cứu người, tự giữ vệ sinh, ………… 10 Nhược điểm: ỉa, bậy, hay cắn cười vô cớ, cắn gia súc, ăn bậy, cắn phá đồ dùng Cán điều tra ... Quốc dựa số hình thái đặc trưng 45 2.2.3 Nội dung 3: Nghiên cứu liên quan kiểu gen kiểu hình xốy lưng chó Phú Quốc 45 2.2.4 Nội dung 4: Nghiên cứu cải thiện mơ hình bảo tồn (insitu-in... 02: Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn hình thái để chọn lọc chó Phú Quốc dựa số hình thái đặc trưng 50 2.3.3 Nội dung 03: Nghiên cứu liên quan kiểu gen kiểu hình xốy lưng chó Phú Quốc ... xây dựng mơ hình bảo tồn Phú Quốc 94 Hình 3.24 Mơ hình trại ni bán bảo tồn Củ Chi Vũng Tàu 96 Hình 3.25 Mơ hình trại ni bảo tồn chó xốy lưng Phú Quốc 97 Hình 3.26 Khu vực ni chó bố mẹ làm