Khóa luận nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn n – hexan của lá cây khôi đốm (sanchezia nobilis hook f)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC PHẠM THỊ HÀ NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N – HEXAN CỦA LÁ CÂY KHƠI ĐỐM (Sanchezia nobilis Hook.f) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2019 NU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an d PHẠM THỊ HÀ Ph arm ac y ,V KHOA Y DƯỢC ed ici ne NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN fM N – HEXAN CỦA LÁ CÂY KHÔI ĐỐM (Sanchezia nobilis Hook.f) Sc ho ol o KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2014.Y Co py rig ht @ Người hướng dẫn: TS Vũ Đức Lợi ThS Bùi Thị Xuân Hà Nội – 2019 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma NU LỜI CẢM ƠN Em Phạm Thị Hà - sinh viên khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà ,V Nội Lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Vũ Đức Lợi Ph arm ac y - Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, khoa Y Dược - Đại học Quốc Gia Hà Nội định hướng, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành khóa luận Khơng vậy, Thầy truyền cho em kiến thức, kĩ bổ ích hành trang giúp em thêm tự tin bước sang ngưỡng cửa sống an d Em xin cảm ơn ThS Bùi Thị Xuân, giảng viên khoa Y Dược Đại học Quốc Gia Hà Nội trực tiếp hướng dẫn tận tình, chu đáo, truyền tập hồn thành khóa luận ed ici ne đạt kinh nghiệm thiết thực, giúp đỡ em nhiều q trình học Để hồn thành khóa luận này, em xin cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp Đại học Quốc Gia Hà Nội mã số: QG.18.20 hỗ trợ kinh phí fM tạo điều kiện tốt cho em bạn nhóm Sc ho ol o Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban chủ nhiệm khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên khoa Y Dược thầy cô giáo sở khoa Y Dược liên kết đạo tạo tạo điều kiện cho em suốt thời gian năm học tập nghiên cứu chuyên ngành Dược học Trong thời gian làm khóa luận học tập Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, ht @ hướng dẫn, bảo thầy cô, em cố gắng nỗ lực học tập nghiên cứu, nhiên kiến thức hạn hẹp, thời gian nghiên cứu Co py rig khơng nhiều nên khóa luận em khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận lời nhận xét, góp ý q báu thầy để khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ em hoàn thiện PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Cuối cùng, em xin kính chúc thầy cô mạnh khỏe, hạnh phúc NU thành cơng sống ,V Em xin chân thành cảm ơn! Ph arm ac y Hà Nội, ngày 28 tháng 04 năm 2019 Sinh viên Co py rig ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an d Phạm Thị Hà PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT Tên đầy đủ Ký hiệu, viết NU STT ORAC Khả hấp thụ gốc tự Ph arm ac y ,V tắt (Oxygen radical absorbance capacity) IC50 Nồng độ ức chế 50% CC Sắc ký cột TLC Sắc ký lớp mỏng pTLC Sắc ký lớp mỏng điều chế S Singlet Dd EtOH ed ici ne Doublet of doublet Ethanol Sc ho ol o ESI-MS 10 DEPT 11 m/z Co py rig ht @ 12 an d fM (Half maximal inhibitory concentration) NMR Phổ khối ion hóa phun mù điện tử Detortionless Enhancement by Polarization Transfer Khối lượng/điện tích Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Hình vẽ NU DANH MỤC HÌNH ẢNH Tên hình vẽ Trang Hình ảnh Khơi đốm Hình 1.2 Hình ảnh quan sinh sản Khơi đốm Hình 1.3 Hình vẽ mơ tả vi phẫu thân Hình 1.4 Đặc điểm vi phẫu thân Hình 1.5 Hình vẽ mơ tả vi phẫu Hình 1.6 Đặc điểm vi phẫu Hình 1.7 Hình vẽ mơ tả bột 10 Hình 1.8 Đặc điểm vi phẫu bột 11 Hình 1.9 Hình vẽ mơ tả bột thân 12 Hình 1.10 Đặc điểm vi phẫu bột thân 12 Hình 1.11 Các hợp chất phân lập từ Khôi đốm 14 Các hợp chất phân lập từ Khôi đốm 15 Sơ đồ chiết xuất Khơi đốm phân đoạn n-hexan 25 Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất NS1 29 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất NS2 32 Ph arm ac y an d ed ici ne fM 9 Co py rig ht @ Hình 3.1 Sc ho ol o Hình 1.12 ,V Hình 1.1 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma MỤC LỤC NU MỞ ĐẦU ,V CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia Ph arm ac y 1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Sanchezia 1.1.2.1 Trên giới 1.1.2.2 Ở Việt Nam 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Sanchezia an d 1.2 Tổng quan Khôi đốm 1.2.1 Phân bố ed ici ne 1.2.2 Đặc điểm thực vật Khôi đốm 1.2.3 Đặc điểm vi phẫu Khôi đốm 1.2.4 Đặc điểm vi học bột dược liệu 1.2.5 Thành phần hóa học Khơi đốm 13 fM 1.2.6 Một số tác dụng dược lý nghiên cứu Khôi đốm 15 1.2.7 Công dụng theo Y học cổ truyền Khôi đốm 18 Sc ho ol o CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1.Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 19 ht @ 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 20 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 21 Co py rig CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 24 3.2 Bàn luận 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma TÀI LIỆU THAM KHẢO Co py rig ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an d Ph arm ac y ,V NU PHỤ LỤC PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma NU MỞ ĐẦU Với điều kiện thiên nhiên ưu đãi, Việt Nam có hệ sinh thái phong ,V phú đa dạng, tiềm lớn tài nguyên dược liệu nói riêng tài nguyên dược liệu (thực vật, động vật, khống vật) nói chung Theo Danh Ph arm ac y lục thuốc Việt Nam số 12.000 lồi thực vật Việt Nam có gần 5.000 lồi có cơng dụng làm thuốc, điều thể đa dạng chủng loại dược liệu với phân bố rộng khắp nước Trải qua hàng ngàn năm lịch sử, cha ông ta phát hiện, tích lũy kho tri thức khổng lồ an d dược liệu y học cổ truyền với nhiều thuốc dân gian Ngày nay, nhà khoa học dược, tập đoàn dược phẩm lớn trọng vào sàng lọc từ thiên nhiên để tìm hoạt chất sinh học ed ici ne có dược tính mạnh hơn, độc với chi phí nghiên cứu phát triển thấp so với tổng hợp hóa học Đẩy mạnh khai thác tài nguyên thiên nhiên dựa thuốc dân gian để phát triển thành sản phẩm thuốc fM có tác dụng chăm sóc sức khỏe Nhiều tài liệu nghiên cứu nước ngồi cho thấy Khơi đốm có tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, diệt côn trùng, Sc ho ol o ngồi cịn có tác dụng chống oxy hóa, chống viêm hiệu [20, 21] Từ lâu người dân vùng dân tộc thiểu số dùng Khôi đốm chữa bệnh viêm dày phổ biến Cây Khôi đốm thuốc chi Sanchezia Nguyễn Tiến Bân liệt kê “Danh mục loài thực vật Việt Nam”, phân bố chủ yếu ht @ miền núi Tây Giang - Quảng Nam, Hòa Vang - Đà Nẵng, miền núi Chiêm Hóa, Na Hang - Tuyên Quang, tỉnh Nam Định [1] Chi chủ yếu phân bố phía Tây Nam Mỹ, số lồi phân bố vùng phía Bắc Đơng Bắc Co py rig Bắc Mỹ, Trung Mỹ, vùng biển Caribbean số đảo Thái Bình Dương [9] Ở Việt Nam có số nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Khôi đốm năm 2016, TS Vũ Đức Lợi PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma nhóm nghiên cứu cơng bố nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng NU chống viêm dịch chiết từ Xăng sê hay cịn gọi Khơi đốm, ngồi cịn có số đề tài nghiên cứu báo cáo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ ,V dược sĩ Nguyễn Thị Mai vào năm 2017 Vũ Thị Mây vào năm 2018 Ph arm ac y Tuy nhiên, đề tài nghiên cứu cịn chưa nhiều, để góp phần cung cấp sở tiền đề cho việc ứng dụng ngun liệu Khơi đốm chăm sóc sức khỏe, lựa chọn tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n – hexan Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f)” với mục tiêu sau: an d Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n – hexan Khôi đốm Co py rig ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne Xác định cấu trúc hợp chất phân lập PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma môi thu phân đoạn nhỏ gồm H1.1, H1.2, H1.3, H1.4 NU dịch rửa SKLM, gộp ống có thành phần bốc dung - Phân đoạn H1.1 tiếp tục phân tách cột sắc ký silicagel, rửa ,V giải hệ dung môi n-hexan : ethylacetat (10:1; v/v) thu hợp Ph arm ac y chất ký hiệu NS1 (12 mg) Phân đoạn H1.2 tiếp tục phân tách cột sắc ký silicagel, rửa giải hệ dung môi n-hexan : dichlometan (5:1; v/v) thu hợp chất ký hiệu hợp chất NS2 (18mg) Hợp chất NS1: Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (daucosterol) Tinh thể có màu trắng đục, tnc = 285 0C, Rf = 0,45 (dichloroform : an d methanol, 8:1) Hợp chất NS1 phản ứng với thuốc thử H2SO4 10%/EtOH cho màu hồng tươi chuyển dần xanh tím IR (KBr, cm-1) 3430 (OH), 2938 (C[M+Na]+ Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13 ed ici ne H), 1635 (C = CH), 1077 (C-O-C), 1021 (C-O-C) ESI-MS:m/z 599,1 C-NMR, DEPT chất NS1 chất tham khảo trình bày bảng 3.1 fM Bảng 3.1: Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR NS1 Vị trí C δCNS1 δCOa,b δHNS1 (ppm) δHOa,c (ppm) ppm ppm (Mult, J=Hz) (Mult, J=Hz) CH2 36,9 37,3 CH2 31,2 29,4 76,9 78,5 DEPT ht @ Sc ho ol o chất tham khảo [11, 25] Co py rig CH CH2 39,2 38,4 C 140,4 141,3 121,2 122,3 CH 3,54 sextet (7,0) 3,56(d; 7,0) 5,35 (d; 5,0) 5,35 (m) 5,36(d; 5,0) 27 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma CH 31,2 30,6 CH 49,7 50,7 10 C 36,2 36,8 11 CH2 20,4 20,4 12 CH2 38,4 40,3 13 C 41,9 42,7 14 CH 55,5 56,9 15 CH2 25,4 23,8 16 CH2 29,1 26,7 17 CH 56,3 56,6 18 CH3 11,8 12,4 19 CH3 19,1 20 CH 35,3 21 CH3 18,6 22 CH2 33,2 32,6 23 CH2 27,6 24,9 0,68 (s) 19,6 34,5 0,67(s) 0,94 (s) 0,92 (d; 6,5) 1,00 (d; 6,3) Sc ho ol o fM 19,4 CH 45,2 46,4 CH 28,8 28,9 0,78 (m) CH3 19,7 19,8 0,79-0,87 (m) 0,94 (d; 5,4) CH3 18,9 20,1 0,79-0,87 (m) 0,89 (d; 6,3) ht @ 24 NU ,V 31,8 Ph arm ac y 31,5 an d CH2 ed ici ne 28 CH2 22,4 21,7 0,88 (m); 29 CH3 11,8 12,5 0,79-0,87 (m) 1' CH 100,9 103,0 4,14 (d; 8,0) 2' CH 76,6 75,8 3,44 (m) 3' CH 73,5 79,0 3,25 (m) 4' CH 70,1 72,1 3,32 (m) 25 26 Co py rig 27 0,87 (m) 28 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma CH 76,7 78,9 3,48 (m) 6' CH2 61,1 63,3 3,75 (d; 12,0) đo CDCl3, b )100 MHz, c )300 MHz, G) chất tham khảo daucosterol ed ici ne an d Ph arm ac y ,V a) NU 5' Hình 3.2: Cấu trúc hợp chất NS1 Hợp chất NS1 phản ứng với thuốc thử H2SO4 10 %/EtOH cho màu hồng tươi chuyển xanh tím dần chứng tỏ NS1 thuộc nhóm sterol Phổ IR fM xuất đỉnh hấp thụ cực đại v*max 3430 cm-1 đặc trưng cho nhóm O-H; đỉnh v*max 2938 cm- đặc trưng cho dao động hóa trị liên kết C-H; đỉnh Sc ho ol o v*max 1635 đặc trưng cho liên kết >C=C