Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn n−hexan của lá cây xăng sê (sanchezia nobilis hook f)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DUỢC ĐINH HOÀNG GIANG TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN CỦA LÁ CÂY XANG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DUỢC HỌC Hà Nội – 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DUỢC ĐINH HOÀNG GIANG TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN CỦA LÁ CÂY XANG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DUỢC HỌC) Khóa: QH.2015.Y Nguời huớng dẫn: TS VU ĐỨC LỢI ThS BÙI THỊ XUÂN Hà Nội – 2020 LỜI CẢM ON Em xin chân thành cảm on TS Vu Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Duợc liệu Duợc học Cổ truyền, Khoa Y Duợc, Đại học Quốc gia Hà Nội ThS Bùi Thị Xuân – Giảng viên Khoa Y Duợc, Đại học Quốc gia Hà Nội dã dịnh huớng, tận tâm bảo tạo diều kiện thuận lợi giúp em hồn thành Khố luận Các thầy khơng truyền dạt kiến thức học thuật mà trang bị cho em thêm nhiều ki nang cần thiết sống Em xin chân thành cảm on thầy cô Bộ môn Duợc liệu Duợc học Cổ truyền, Khoa Y Duợc, Đại học Quốc gia Hà Nội dã giúp dỡ tạo diều kiện cho em q trình thực hồn thành Khố luận Em cung xin gửi lời cảm on dến Quý thầy cô Ban Chủ nhiệm Khoa Y Duợc, Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên trực thuộc Khoa Y Duợc thầy cô co sở liên kết tạo với Khoa Y Duợc dã nhiệt tình dạy cho em từ diều can dến tới tri thức to lớn nhân loại suốt thời gian nam học tập nghiên cứu chuyên ngành Duợc học noi dây Do kiến thức em hạn hẹp, thời gian nghiên cứu khơng duợc nhiều nên Khố luận em khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận duợc lời nhận xét, góp ý Q thầy dể Khố luận tốt nghiệp Duợc si em duợc hoàn thiện hon Cuối cùng, xin duợc cảm on gia dình, tơi xin cảm on nguời bạn dã dồng hành tôi, nguời dã theo sát, quan tâm tạo diều kiện giúp tơi hồn thành Khố luận Xin chúc tất nguời mạnh khoẻ hạnh phúc! Hà Nội, ngày tháng nam 2020 Sinh viên Đinh Hồng Giang DANH MỤC KÍ HIỆU STT Kí hiệu Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt Colony-forming unit Đon vị hình thành khuẩn lạc DEPT Distortionless enhancement by polarization transfer Tang cuờng biến dạng chuyển phân cực DPPH 2,2'-diphenyl-1picrylhydrazyl ESI-MS FabI Enoyl-acyl carrier protein reductase I IC50 Half maximal inhibitory concentration LC50 Median lethal concentration Nồng dộ gây chết 50% MIC Minimum inhibitory concentration MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2- yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide 10 NMR Nuclear magnetic resonance Quang phổ cộng huởng từ hạt nhân 11 ORAC Oxygen radical absorbance capacity Khả nang hấp thụ gốc oxy 12 TLC Thin-layer chromatography Sắc ký mỏng CFU Electrospray ionisation mass spectrometry Quang phổ khối tia diện ion hoá Nồng dộ ức chế 50% mức tối da Nồng dộ ức chế tối thiểu DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Ảnh chụp hoa S nobilis Hình 1.2 Cấu tạo tổng thể S nobilis Hình 1.3 Cơng thức hoa S nobilis Hình 1.4 Thành phần bột cuống S nobilis Hình 1.5 Thành phần bột thân S nobilis Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo hợp chất 1-22 13 Hình 3.1 So dồ chiết xuất S nobilis phân doạn n-hexan 19 Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất S3 24 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất S4 26 Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất S5 28 DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 3.1 Dữ liệu phổ DEPT, 13C-NMR 1H-NMR hợp chất S3 hợp chất tham khảo 22 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ DEPT, 13C-NMR 1H-NMR hợp chất S4 hợp chất tham khảo 24 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ DEPT, 13C-NMR 1H-NMR hợp chất S5 hợp chất tham khảo 26 Bảng 3.4 Liên quan cấu trúc axit béo với tác dụng kháng khuẩn 29 Bảng 3.5 Tác dụng axit béo lên enoyl reductase vi khuẩn Gram (+) 29 Bảng 3.6 Nồng dộ ức chế tối thiểu axit béo 29 Bảng 3.7 Tỷ lệ ức chế axit palmitic so với dối chứng âm 31 Bảng 3.8 Đuờng kính vùng ức chế vi khuẩn E coli chất 31 Bảng 3.9 Nồng dộ ức chế tối thiểu axit béo 33 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHUONG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia 1.1.2 Đặc diểm thực vật chi Sanchezia 1.1.3 Đặc diểm phân bố chi Sanchezia 1.2 Tổng quan loài Sanchezia nobilis 1.2.1 Đặc diểm dại phẫu loài S nobilis .5 1.2.2 Đặc diểm bột duợc liệu loài S nobilis 1.2.3 Thành phần hoá học loài S nobilis 1.2.4 Tác dụng duợc lý 13 1.2.5 Cơng dụng lồi S nobilis theo Y học cổ truyền .15 CHUONG ĐỐI TUỢNG VÀ PHUONG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tuợng 16 2.1.1 Nguyên vật liệu .16 2.1.2 Hoá chất, thiết bị .16 2.2 Phuong pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Phuong pháp chiết xuất phân lập hợp chất 17 2.2.2 Phuong pháp xác dịnh cấu trúc hợp chất 18 CHUONG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Kết 19 3.1.1 Kết chiết xuất 19 3.1.2 Kết phân lập .20 3.1.3 Kết xác dịnh cấu trúc hợp chất phân lập duợc 22 3.2 Bàn luận 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 MỞ ĐẦU Đất nuớc Việt Nam sở hữu ranh giới trải dài nhiều vi dộ, bên biển liên tục thổi gió ẩm, bên núi giữ lại hoi ẩm dó, thời tiết thay dổi liên tục mùa nam khác rõ rệt vùng miền, giúp hệ sinh thái noi dây phát triển trù phú với nhiều loài dặc hữu sinh vật quý Chính diều dó tạo nên nguồn ngun liệu duợc liệu (thực vật, dộng vật, khoáng vật) to lớn, tạo tiền dề dể nhân dân Việt Nam từ xua tới tìm tịi, vận dụng nhiều phuong thuốc Nam duợc Cùng kiến thức Đông duợc, vị Thần y nuớc Việt cha ông ta dã xây dựng tích luỹ kho tàng tri thức y duợc học quý giá Trong thời diểm tại, y học Tây phuong dã qua thời kì bùng nổ, loại thuốc tổng hợp dang phát triển chậm chạp tác nhân gây bệnh dần trở nên dề kháng, xu huớng quay với nguồn gốc thiên nhiên lại dang duợc nhà khoa học ý nhiều hon Rất nhiều số loài sinh vật dang duợc sàng lọc tìm kiếm hoạt chất lại loài cỏ mọc hoang dại mà dân gian Việt Nam thuờng truyền tay làm thuốc diều trị phịng chống nhiều loại bệnh cấp mạn tính Hiện dã có nhiều nghiên cứu loài thuộc họ Acanthaceae, số thuộc chi Sanchezia Tuy nhiên nghiên cứu so sài thuờng tập trung vào thành phần hố học [23, 24], nghiên cứu dộc tính tác dụng sinh học nguời Phần lớn nghiên cứu lồi Sanchezia speciosa, cịn lồi Sanchezia nobilis duợc nghiên cứu ít, bao gồm số nghiên cứu giới nghiên cứu Việt Nam nhu nghiên cứu TS Vu Đức Lợi, ThS Bùi Thị Xuân, PGS.TS Bùi Thanh Tùng… [5-7, 48, 49] Trên mạng internet có xuất số báo viết tác dụng diều trị dau dày Khôi dốm hay Xang sê (một số có nêu tên khoa học lồi S speciosa) cách sắc khô với nuớc nhai sống tuoi [2], nhung chua có nghiên cứu chứng minh tác dụng này, mà hoàn toàn lời truyền miệng dân gian Các nghiên cứu truớc dây dã công bố thành phần dịch chiết S nobilis có chứa glycosid, sterol, flavonoid,… [5, 6, 23, 24] Ngồi có số khố luận tốt nghiệp duợc si cung sử dụng S nobilis làm dề tài nghiên cứu [3] Việc nghiên cứu sâu hon vào thành phần hoá học tác dụng sinh học giúp chứng minh kinh nghiệm sử dụng dân gian, huớng tới tìm kiếm, tách chiết phân lập hoạt chất nuôi trồng, sản xuất thuốc diều trị từ Nam 2019 dã có dề tài khố luận tốt nghiệp “Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân doạn n-hexan Khôi dốm” duợc si Phạm Thị Hà Vì thế, chúng tơi thực dề tài: “Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân doạn n-hexan Xang sê (Sanchezia nobilis Hook.f)” với mục tiêu sau: Chiết xuất phân lập duợc số hợp chất từ phân doạn n-hexan Xang sê/Khôi dốm Xác dịnh cấu trúc hợp chất dã phân lập CHUONG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia Theo phân loại Bộ Nông nghiệp Hoa Kỳ (USDA) nam 2020 [12], chi Sanchezia thuộc: Giới: Plantae (Thực vật) Phân giới: Tracheobionta (Thực vật có mạch) Siêu ngành: Spermatophyta (Thực vật có hạt) Ngành: Magnoliophyta (Thực vật hạt kín – Ngọc lan) Lớp: Magnoliopsida (Thực vật hai mầm – Ngọc lan) Phân lớp: Asteridae (Cúc) Bộ: Scrophulariales (Hoa môi – Hoa mõm chó) Họ: Acanthaceae (Ơ rơ) Chi: Sanchezia Ruiz & Pav (xang-sê) 1.1.2 Đặc diểm thực vật chi Sanchezia Sanchezia loại bụi thuờng xanh, nửa gỗ, nhỏ, mọc thẳng dứng, cao 1,3-2,4 m Thân tron nhẵn, màu lục sáng dến tím Lá hình giáo, to, dài tới 26 cm, mọc dối Phiến màu lục, vân màu vàng ngà rõ rệt Hoa màu vàng, hình ống, bẹ hoa màu dỏ, dài khoảng cm, mọc thành chùm dến chùm 10 từ nách thân Quả bao thn dài với 6-8 hạt trịn, nén chặt [22, 46] 1.1.3 Đặc diểm phân bố chi Sanchezia Theo tổ chức The Plant List, chi Sanchezia có 75 tên lồi, dó có 54 (72%) tên lồi duợc chấp nhận, (12%) tên dồng nghia 12 (16%) tên loài chua duợc dánh giá [37] Loài Sanchezia nobilis nằm số 54 tên duợc chấp nhận (mức tín nhiệm trung bình) Trên giới, chi Sanchezia gồm lồi dịa Nam Mỹ (Bolivia, Brazil, Colombia, Ecuador, Panama, Peru, Venezuela) loài ngoại lai C C C H D E P T C H & C D E P T S C D C l C C & D E P 1 p p m p p m p p m 22 33 44 55 66 77 888 99 11 00 11 11 11 22 11 33 11 44 11 55 C C C H D E P T C H & C D E P T S C D C l C C & D E P p p m p p m p p m 55 1212 00 1212 55 1212 00 1212 55 1212 00 121212 55 1212 00 1313 55 1313 00 1313 013 C C C H D E P T C H & C D E P T S C D C l C C & D E P p p m p p m p p m 11 11 11 11 11 11 11 22 22 222 22 22 22 22 22 22 M S D T r R e p v ( A -O p t A n al y I n S a m pl N a m M e t h A n al y N a m C S C o o l t S d u E cl i p X D -C m x P a g o O p e r I n st r u A E L C -M A c D a t 1 / /2 : P M S -T D r -S L P ri D a t 1 / / : P M D is pl a R e p S el e ct W in d o S el e ct A n al y M S D T r R e p v ( A -O p t A n al y I n S a m pl N a m M e t h A n al y N a m C S C o o l t S d u E cl i p X D -C m x P a g o O p e r I n st r u A E L C -M A c D a t 1 / /2 : P M S -T D r -S L P ri D a t 1 / / : P M D is pl a R e p S el e ct W in d o S el e ct A n al y 7.258 5.384 5.381 5.378 5.373 5.371 5.368 5.360 5.356 5.354 5.348 5.344 5.342 5.337 5.335 5.332 5.328 5.321 2.784 2.782 2.770 2.756 2.356 2.341 2.326 2.070 2.056 2.042 2.029 2.017 2.005 1.994 1.647 1.633 1.618 1.603 1.370 1.357 1.343 1.330 1.321 1.319 1.313 1.302 1.297 1.296 1.289 1.288 1.281 1.270 1.258 0.903 0.893 0.889 0.880 0.875 0.866 2.6 1.0 2.1 3.4 2.1 10.4 37.6 3.1 p p P G L S W S S F C B B S D F I B W P r o 0 c e s 0 5 .1 0 H z E M M H z 5 p a r a m e P P N S = L U F = W C O = = = 0 0 H W u M s H e z C H A N N f = = = = = T D T D D R A F S D N S T P P I T D F D E E W G Q I W S S O D U R N i a D H L L O S m t _ R V P B T A E R R c 0 0 1 s K e c 0 u u s s s e e e c m m P A B C z B D g B C B l / H H z z q u i s i P s a p r e a c m e S C D C l H P R O C E N C X A u P M r N r e D a t P a L r O a _ I m S e 5.373 5.371 5.368 5.360 5.356 5.354 5.348 5.344 5.342 5.337 5.335 5.332 5.328 5.321 5.318 5.316 5.314 5.311 5.307 2.6 1.0 2.1 3.4 2.1 10.4 7.6 3.1 p p 2.784 2.782 2.770 2.756 2.356 2.341 2.326 2.070 2.056 2.042 2.029 2.017 2.005 1.994 1.647 1.633 1.618 1.603 1.370 1.357 1.343 1.330 1.321 1.319 1.313 1.302 1.297 1.296 1.289 1.288 1.281 1.270 1.258 0.903 0.893 S C D C l H 2.784 2.782 2.770 2.756 1.0 2.6 p p 5.371 5.360 5.356 5.354 5.348 5.344 5.342 5.337 5.335 2.356 2.341 2.326 2.1 2.070 2.056 2.042 2.029 2.017 2.005 1.994 3.4 1.647 1.633 1.618 1.603 2.1 1.370 1.357 1.343 1.330 1.321 1.319 1.313 1.302 1.297 1.296 1.289 1.288 1.281 1.270 1.258 10.4 7.6 0.903 0.893 0.889 0.880 0.875 0.866 3.1 p p S C D C l H 180.33 S C D C l C 130.18 129.99 129.70 128.07 127.91 C 77.26 77.00 76.75 34.08 31.92 31.90 31.52 29.76 29.67 29.63 29.58 29.52 29.42 29.34 29.31 29.23 29.13 29.06 29.02 27.20 27.17 27.15 25.63 24.65 p p P G L S W S S F C B B S D F I B W P r o 0 c e s 0 H z 8 1 0 7 E M M H z p a r a m e P L W 1 9 P P P C N S = L L C P U F = W W P D C O = D P = R = P P N S = L U F = W C O = = = C H A N N f = = = = = C H A N N f = = = = = 0 0 0 W W W u s e w a l t z H M H z 0 0 0 C W u s e M H z T D D T D D R A F S D N S T P P I T D F D 1 E E W G Q I W S S O D U R N i a D H L L O S m t _ R V P B T A E R R c q u i s i 0 s e c 0 0 s K e c 5 0 7 u u s s s e e e c 4 H z C D C l H z z g p g m m P A B B B B / P s a p r e a c m e P R O C E N C X A u P M r N r e D a t P a L r O a _ m I S e 1 130.18 129.99 129.70 S C D C l C C 128.07 127.91 p p 1 1 1 34.08 31.92 31.90 31.52 29.76 29.67 29.63 29.58 29.52 29.42 29.34 29.31 29.23 29.13 29.06 29.02 27.20 27.17 27.15 S C D C l C C 25.63 24.65 22.67 22.56 14.06 14.02 p p 1 1 2 2 2 2 2 31.92 31.90 31.52 S C D C l C 29.76 29.67 29.63 29.58 29.52 29.42 29.34 29.31 29.23 29.13 29.06 29.02 C 27.20 27.17 27.15 p p 2 2 2 3 C C C H D E P T C H & C D E P T S C D C l C C & D E P 1 p p m p p m p p m 22 33 44 55 66 77 888 99 11 00 11 11 11 22 11 33 11 44 11 55 C C C H D E P T C H & C D E P T S C D C l C C & D E P p p m p p m p p m 55 1212 00 1212 55 1212 00 1212 55 1212 00 121212 55 1212 00 1313 55 1313 00 1313 013 C C C H D E P T C H & C D E P T S C D C l C C & D E P p p 11 111 111 p p 11 11 11 11 22 22 p p 22 22 22 22 22 22 22 22 ... ? ?Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân doạn n-hexan Xang sê (Sanchezia nobilis Hook. f)? ?? với mục tiêu sau: Chiết xuất phân lập duợc số hợp chất từ phân doạn n-hexan Xang sê/ Khôi... HÀ NỘI KHOA Y DUỢC ĐINH HOÀNG GIANG TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN CỦA LÁ CÂY XANG SÊ (Sanchezia nobilis Hook. f) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH... tới tìm kiếm, tách chiết phân lập hoạt chất nuôi trồng, sản xuất thuốc diều trị từ Nam 2019 dã có dề tài khố luận tốt nghiệp ? ?Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân doạn n-hexan Khôi