Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat của lá cây xăng sê (sanchezia nobilis hook f)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC  ––––––––––– ––––––––––– LÊ HỒNG DƯƠNG TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC  ––––––––––– ––––––––––– LÊ HỒNG DƯƠNG TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: NGƯỜI HƯỚNG DẪN: QH.2015.Y TS VŨ ĐỨC LỢI ThS BÙI THỊ XUÂN Hà Nội – 2020 LỜI CẢM ƠN Em Lê Hồng Dương – sinh viên lớp K4 Dược học, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Đây đề tài em chọn để nghiên cứu làm khóa luận tốt nghiệp sau năm theo học chuyên ngành Dược học Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Lời đầu tiên, em xin cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu – Dược cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Thầy trực tiếp bảo, hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình nghiên cứu để hồn thiện khóa luận Khơng vậy, thầy truyền cho em kiến thức, kĩ mềm hữu ích, giúp em tự tin bước sang ngưỡng cửa sống Em xin cảm ơn Ths Bùi Thị Xuân – Giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trực tiếp hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm, kĩ năng, giúp đỡ em nhiều trình thực tập Em xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên Khoa Y Dược thầy cô giáo sở Khoa Y Dược liên kết giảng dạy dạy dỗ, tạo điều kiện cho em suốt năm học tập nghiên cứu chun ngành Dược học Vì cịn thiếu kinh nghiệm, nên báo cáo em tránh sai sót Kính mong đóng góp ý kiến, bảo thầy để khóa luận em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng 05 năm 2020 Sinh viên Lê Hồng Dương DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT STT Ký hiệu Ý nghĩa d Doublet dd Doublet of doublet DEPT ESI-MS FT-IR Quang phổ chuyển đổi hồng ngoại Fourier transform infrared spectroscopy) HMBC Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation) HMQC Phổ HMQC(Heteronuclear Coherence) HSQC Phổ HSQC (Heteronuclear Single Quantum Coherence) IC50 Nồng độ ức chế 50% (50% inhibitory concentration) 10 IR Tia hồng ngoại (Infrared) 11 LC50 12 LC/MSD 13 m/z 14 NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân resonance) 15 ppm 10-6 (Parts per million) 16 s 17 UV Phổ DEPT (Detortionless enhancement by polarization transfer) Phổ khối ion hóa phun điện tử (Electrospray ionization mass spectrometry) Multiple (Fourier- Quantum Nồng độ gây chết 50% (50% lethal concentration) Sắc kí lỏng đầu dị khối phổ (Liquid chromatograph/mass selective detector) Khối lượng/điện tích (Mass to charge ratio) Singlet Tia tử ngoại (Ultra violet) (Nuclear magnetic DANH MỤC HÌNH ẢNH, HÌNH VẼ Hình ảnh, hình vẽ Hình Tên hình vẽ Hình thái vĩ mơ thân, lá, hoa (A); Lát Trang cắt dọc hoa (B) Hình Vi học bột thân Hình Vi học bột cuống Hình Hình ảnh Xăng sê – Sanchezia nobilis 14 Hook.f Hình Sơ đồ chiết xuất từ phân đoạn ethyl acetat 17 Xăng sê Hình Sơ đồ phân lập chất từ phân đoạn ethyl 18 acetat Xăng sê Hình Cấu trúc hợp chất XS3 (Apigenin) 19 Hình Cấu trúc hợp chất XS5 (Kaempferol) 20 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng biểu Bảng Tên bảng biểu Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR XS3 Trang 19 chất tham khảo Bảng Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR XS5 chất tham khảo 21 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố loài chi Sanchezia 1.2 Tổng quan Xăng sê (Sanchezia nobilis) 1.2.1 Phân bố Xăng sê 1.2.2 Đặc điểm thực vật Xăng sê 1.2.3 Đặc điểm vi học bột dược liệu Xăng sê 1.2.4 Thành phần hóa học Xăng sê 1.2.5 Tác dụng dược lí Xăng sê .9 1.2.6 Công dụng theo Y học cổ truyền Xăng sê 12 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng nghiên cứu 13 2.1.1 Nguyên liệu 13 2.1.2 Hóa chất, thiết bị .13 2.2 Phương pháp nghiên cứu 14 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 14 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 15 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 16 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 16 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 18 3.2.1 Hợp chất XS3: Apigenin 18 3.2.2 Hợp chất XS5: Kaempferol 20 3.3 Bàn luận 22 3.3.1 Apigenin 22 3.3.2 Kaempferol 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .26 MỞ ĐẦU Từ xa xưa, tài nguyên thuốc đóng vai trị quan trọng việc chăm sóc sức khỏe, đặc biệt nước có truyền thống sử dụng dược liệu Chính vậy, việc nghiên cứu, phát triển chất mang hoạt tính sinh học lồi có giá trị thiết thực đời sống Việt Nam nước có nguồn thực vật phong phú với khoảng 12.000 lồi, điều tra 3.850 loài sử dụng làm thuốc thuộc 309 họ [6] Đa phần mọc tự nhiên chưa nghiên cứu cách đầy đủ, có hệ thống mặt khoa học hoạt tính sinh học Viêm loét dày bệnh phổ biến hàng đầu bệnh đường tiêu hóa, xuất nhiều quốc gia lứa tuổi Theo Hội Khoa học Tiêu hóa Việt Nam, 70% người Việt có nguy bị đau dày có chiều hướng ngày gia tăng Vì vậy, dân gian ta truyền sử dụng Xăng sê vị thuốc quý Lá có tác dụng kháng viêm, làm liền vết loét để chữa bệnh viêm loét dày – tá tràng [5] Trên giới, số cơng trình nghiên cứu dược lí đại khẳng định phần tác dụng Xăng sê như: chống oxi hóa, chống ung thư, kháng khuẩn, kháng nấm, diệt côn trùng, … [37, 40, 41] Tuy nhiên nay, việc nghiên cứu thành phần hóa học, đánh giá tác dụng sinh học Xăng sê hạn chế Ở nước ta, có số nghiên cứu Xăng sê, ví dụ nghiên cứu TS Vũ Đức Lợi cộng cơng bố thành phần hóa học tác dụng chống viêm, chống loét dịch chiết từ Xăng sê [15, 16] Ngồi cịn số nghiên cứu TS Vũ Đức Lợi, PGS TS Bùi Thanh Tùng cộng nghiên cứu tác dụng chống oxi hóa [50], ThS Bùi Thị Xuân nghiên cứu tác dụng giảm đau Xăng sê [8]… Để đưa Xăng sê có nhiều ứng dụng thực tiễn sống, góp phần chăm sóc sức khỏe cho người dân, lựa chọn tiến hành thực đề tài: “Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook.f)” với mục tiêu sau: Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 7.925 9.7 2.09 7.928 7.915 7.911 8.7 7.7 6.7 5.7 4.7 XS3-DMSO-1H 3.7 2.7 1.7 0.7 6.929 6.920 6.916 8.6 1.02 6.933 9.6 2.07 7.6 6.768 6.6 5.6 1.04 4.6 6.481 6.477 3.6 2.6 1.03 ppm 6.193 6.189 39.83 39.66 39.50 39.33 39.16 39.00 40.00 102.80 98.79 93.91 103.66 121.14 115.91 128.42 71163 161.41 161.11 157.27 08164 69181 XS3-DMSO-C13CPD Current Data Parameters NAME LOI_XS3 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ Time INSTRUM PROBHD PULPROG TD SOLVENT NS DS SWH FIDRES AQ RG DW DE TE D1 D11 TD0 20191105 23.31 spect mm PABBO BB/ zgpg30 65536 DMSO 512 31250.000 0.476837 1.0485760 198.57 16.000 6.50 304.6 2.00000000 0.03000000 Hz Hz sec usec usec K sec sec ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 NUC1 P1 PLW1 125.7864591 MHz 13C 10.00 usec 88.00000000 W ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.1910008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.35764000 W PLW13 0.17989001 W F2 - Processing parameters SI SF WDW SSB LB GB PC 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm 0 32768 125.7726905 MHz EM 1.00 Hz 1.40 163.71 164.08 161.11 157.27 128.42 121.14 115.91 95 ppm 103.66 102.80 98.79 93.91 XS3-DMSO-C13CPD 161.41 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 181.69 XS3-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 210 200 DEPT135 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm CH&CH3 CH2 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm C13CPD 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm XS3-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 DEPT135 125 120 115 110 105 100 95 ppm 125 120 115 110 105 100 95 ppm 125 120 115 110 105 100 95 ppm CH&CH3 CH2 C13CPD XS3-DMSO-HSQC ppm 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 ppm XS3-DMSO-HSQC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 ppm Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: Method: Sample Name: Analysis Info: XS5.d Cot150x3mm.m XS5 Column Eclipse XDB-C18, 4.6 x150mm MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: Operator: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000514 Page of Print Date: 11/7/2019 1:47:55 PM Acq Date: 11/7/2019 1:46:02 PM Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: Method: Sample Name: Analysis Info: XS5.d Cot150x3mm.m XS5 Column Eclipse XDB-C18, 4.6 x150mm MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: Operator: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000514 Page of Print Date: 11/7/2019 1:48:10 PM Acq Date: 11/7/2019 1:46:02 PM 14 13 12 11 10 6.919 9.342 0.80 XS5 6.190 - 1.01 6.915 6.436 2.11 8.047 8.043 8.034 8.030 6.933 6.929 2.06 10.079 0.95 10.754 0.76 12.466 1.03 6.432 1.00 -1H 3.324 2.507 2.503 2.500 2.496 2.493 DMSO 6.186 1- ppm 1PROCNO10EXPNOXS5LOINAMEParametersDataCurre nt sec000 00000.1D1K3.304TEusec50.6DEu sec000 50DW68.127RGsec2767999.3AQH z15258 8.0FIDRESHz000.10000SWH2DS16 NSDMSO SOLVENT65536TDzg30PULPROGBB/ PABBOm m5PROBHDspectINSTRUM07.16Tim e20191 105DateParametersAcquisition W00000000.22PLW1usec20.10P11HNUC1MHz1920889.500SFO1=== =====f1CHANNEL======== 00.1PC0GB Hz30.0LB0SSBEMWDWMHz1890053.500SF65536SIpar ametersProcessing-F2 2.8 1.8 0.8 8.7 7.7 6.7 5.7 3.7 2.7 1.7 XS5-DMSO-1H 4.7 6.919 6.915 9.6 8.6 7.6 6.6 5.6 4.6 3.6 2.6 6.190 6.186 1.00 6.436 6.432 1.01 6.929 2.11 8.034 8.030 2.06 8.047 8.043 6.933 ppm 39.83 39.66 39.50 39.33 39.16 39.00 40.00 98.16 93.43 103.00 115.39 121.62 129.44 135.60 67160 159.14 156.14 146.79 86175 84163 XS5-DMSO-C13CPD Current Data Parameters NAME LOI_XS5 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ Time INSTRUM PROBHD PULPROG TD SOLVENT NS DS SWH FIDRES AQ RG DW DE TE D1 D11 TD0 20191106 5.08 spect mm PABBO BB/ zgpg30 65536 DMSO 640 31250.000 0.476837 1.0485760 198.57 16.000 6.50 304.5 2.00000000 0.03000000 Hz Hz sec usec usec K sec sec ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 NUC1 P1 PLW1 125.7864591 MHz 13C 10.00 usec 88.00000000 W ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.1910008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.35764000 W PLW13 0.17989001 W F2 - Processing parameters SI SF WDW SSB LB GB PC 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm 0 32768 125.7726904 MHz EM 1.00 Hz 1.40 175 175.86 170 165 160 163.84 155 160.67 159.14 145 140 146.79 135 130 125 135.60 120 129.44 115 110 121.62 105 100 115.39 95 ppm 103.00 98.16 93.43 XS5-DMSO-C13CPD 150 156.14 XS5-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 210 200 DEPT135 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm CH&CH3 CH2 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm C13CPD 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm XS5-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 130 DEPT135 125 120 115 110 105 100 95 ppm 125 120 115 110 105 100 95 ppm 125 120 115 110 105 100 95 ppm CH&CH3 CH2 130 C13CPD 130 ... ––––––––––– ––––––––––– LÊ HỒNG DƯƠNG TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook. f) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH... tiễn sống, góp phần chăm sóc sức khỏe cho người dân, lựa chọn tiến hành thực đề tài: ? ?Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook. f)? ??... Hook. f)? ?? với mục tiêu sau: Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê Xác định cấu trúc hợp chất phân lập CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân