Nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn n hexan của lá cây khôi đốm (sanchezia nobilis hook f)​

VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an dP rm ac y, KHOA Y DƯỢC ed ici ne PHẠM THỊ HÀ fM NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ho ol o N – HEXAN CỦA LÁ CÂY KHÔI ĐỐM Sc (Sanchezia nobilis Hook.f) Co py rig ht @ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2019 VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an dP PHẠM THỊ HÀ rm ac y, KHOA Y DƯỢC ed ici ne NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN fM N – HEXAN CỦA LÁ CÂY KHÔI ĐỐM ho ol o (Sanchezia nobilis Hook.f) Sc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2014.Y ThS Bùi Thị Xuân Co py rig ht @ Người hướng dẫn: TS Vũ Đức Lợi Hà Nội – 2019 VN U LỜI CẢM ƠN Em Phạm Thị Hà - sinh viên khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội Lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Vũ Đức Lợi rm ac y, - Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, khoa Y Dược - Đại học Quốc Gia Hà Nội định hướng, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành khóa luận Khơng vậy, Thầy cịn truyền cho em kiến dP thức, kĩ bổ ích hành trang giúp em thêm tự tin bước sang ngưỡng cửa sống Em xin cảm ơn ThS Bùi Thị Xuân, giảng viên khoa Y Dược - an Đại học Quốc Gia Hà Nội trực tiếp hướng dẫn tận tình, chu đáo, truyền tập hồn thành khóa luận ed ici ne đạt kinh nghiệm thiết thực, giúp đỡ em nhiều q trình học Để hồn thành khóa luận này, em xin cảm ơn đề tài khoa học fM công nghệ cấp Đại học Quốc Gia Hà Nội mã số: QG.18.20 hỗ trợ kinh phí tạo điều kiện tốt cho em bạn nhóm ho ol o Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban chủ nhiệm khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên khoa Y Dược thầy cô giáo sở khoa Y Dược liên kết đạo tạo tạo điều kiện cho em suốt Sc thời gian năm học tập nghiên cứu chuyên ngành Dược học Trong thời gian làm khóa luận học tập Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, @ hướng dẫn, bảo thầy cô, em cố gắng nỗ lực học ht tập nghiên cứu, nhiên kiến thức cịn hạn hẹp, thời gian nghiên cứu rig khơng nhiều nên khóa luận em khơng tránh khỏi thiếu sót Em py mong nhận lời nhận xét, góp ý q báu thầy để khóa Co luận tốt nghiệp Dược sĩ em hồn thiện Cuối cùng, em xin kính chúc thầy cô mạnh khỏe, hạnh phúc VN U thành cơng sống Em xin chân thành cảm ơn! rm ac y, Hà Nội, ngày 28 tháng 04 năm 2019 dP Sinh viên Co py rig ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an Phạm Thị Hà Tên đầy đủ Ký hiệu, viết STT tắt ORAC Khả hấp thụ gốc tự rm ac y, VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT (Oxygen radical absorbance capacity) IC50 Nồng độ ức chế 50% dP CC Sắc ký cột TLC Sắc ký lớp mỏng pTLC Sắc ký lớp mỏng điều chế S Singlet Dd EtOH ESI-MS 10 DEPT ht rig py Co ed ici ne Doublet of doublet Ethanol ho ol o Sc m/z @ 11 12 an fM (Half maximal inhibitory concentration) NMR Phổ khối ion hóa phun mù điện tử Detortionless Enhancement by Polarization Transfer Khối lượng/điện tích Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) Hình vẽ Tên hình vẽ Trang Hình 1.1 Hình ảnh Khơi đốm Hình 1.2 Hình ảnh quan sinh sản Khơi đốm Hình 1.3 Hình vẽ mơ tả vi phẫu thân Hình 1.4 Đặc điểm vi phẫu thân Hình 1.5 Hình vẽ mơ tả vi phẫu Hình 1.6 Đặc điểm vi phẫu Hình 1.7 Hình vẽ mơ tả bột 10 Hình 1.8 Đặc điểm vi phẫu bột 11 Hình 1.9 Hình vẽ mơ tả bột thân 12 Hình 1.10 Đặc điểm vi phẫu bột thân Hình 1.11 Các hợp chất phân lập từ Khơi đốm 14 Hình 1.12 Các hợp chất phân lập từ Khôi đốm 15 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất Khơi đốm phân đoạn n-hexan 25 Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất NS1 29 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất NS2 32 ed ici ne an dP rm ac y, fM ho ol o Sc @ ht rig py Co VN U DANH MỤC HÌNH ẢNH 9 12 MỤC LỤC VN U MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN rm ac y, 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Sanchezia 1.1.2.1 Trên giới dP 1.1.2.2 Ở Việt Nam 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Sanchezia 1.2 Tổng quan Khôi đốm an 1.2.1 Phân bố ed ici ne 1.2.2 Đặc điểm thực vật Khôi đốm 1.2.3 Đặc điểm vi phẫu Khôi đốm 1.2.4 Đặc điểm vi học bột dược liệu 1.2.5 Thành phần hóa học Khôi đốm 13 fM 1.2.6 Một số tác dụng dược lý nghiên cứu Khôi đốm 15 1.2.7 Công dụng theo Y học cổ truyền Khôi đốm 18 ho ol o CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1.Đối tượng nghiên cứu 19 Sc 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 19 @ 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 20 rig ht 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 21 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 Co py 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 24 3.2 Bàn luận 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 ht rig py Co @ Sc fM ho ol o ed ici ne rm ac y, dP an PHỤ LỤC VN U TÀI LIỆU THAM KHẢO VN U MỞ ĐẦU Với điều kiện thiên nhiên ưu đãi, Việt Nam có hệ sinh thái phong phú đa dạng, tiềm lớn tài nguyên dược liệu nói riêng rm ac y, tài nguyên dược liệu (thực vật, động vật, khống vật) nói chung Theo Danh lục thuốc Việt Nam số 12.000 lồi thực vật Việt Nam có gần 5.000 lồi có cơng dụng làm thuốc, điều thể đa dạng chủng loại dược liệu với phân bố rộng khắp nước Trải qua hàng ngàn năm dP lịch sử, cha ông ta phát hiện, tích lũy kho tri thức khổng lồ dược liệu y học cổ truyền với nhiều thuốc dân gian an Ngày nay, nhà khoa học dược, tập đoàn dược phẩm lớn ed ici ne trọng vào sàng lọc từ thiên nhiên để tìm hoạt chất sinh học có dược tính mạnh hơn, độc với chi phí nghiên cứu phát triển thấp so với tổng hợp hóa học Đẩy mạnh khai thác tài nguyên thiên nhiên dựa thuốc dân gian để phát triển thành sản phẩm thuốc fM có tác dụng chăm sóc sức khỏe Nhiều tài liệu nghiên cứu nước ngồi cho thấy Khơi đốm có tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, diệt côn trùng, ho ol o ngồi cịn có tác dụng chống oxy hóa, chống viêm hiệu [20, 21] Từ lâu người dân vùng dân tộc thiểu số dùng Khôi đốm chữa bệnh viêm dày phổ biến Cây Khôi đốm thuốc chi Sanchezia Nguyễn Tiến Sc Bân liệt kê “Danh mục loài thực vật Việt Nam”, phân bố chủ yếu @ miền núi Tây Giang - Quảng Nam, Hòa Vang - Đà Nẵng, miền núi Chiêm Hóa, Na Hang - Tuyên Quang, tỉnh Nam Định [1] Chi chủ yếu phân bố ht phía Tây Nam Mỹ, số lồi phân bố vùng phía Bắc Đơng Bắc rig Bắc Mỹ, Trung Mỹ, vùng biển Caribbean số đảo Thái Bình Dương Co py [9] Ở Việt Nam có số nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Khôi đốm năm 2016, TS Vũ Đức Lợi nhóm nghiên cứu cơng bố nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng VN U chống viêm dịch chiết từ Xăng sê hay gọi Khơi đốm, ngồi cịn có số đề tài nghiên cứu báo cáo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ dược sĩ Nguyễn Thị Mai vào năm 2017 Vũ Thị Mây vào năm 2018 rm ac y, Tuy nhiên, đề tài nghiên cứu cịn chưa nhiều, để góp phần cung cấp sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu Khơi đốm chăm sóc sức khỏe, chúng tơi lựa chọn tiến hành thực đề tài: “Nghiên dP cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n – hexan Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f)” với mục tiêu sau: Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n – hexan an Khôi đốm Co py rig ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne Xác định cấu trúc hợp chất phân lập dịch rửa SKLM, gộp ống có thành phần bốc dung VN U môi thu phân đoạn nhỏ gồm H1.1, H1.2, H1.3, H1.4 - Phân đoạn H1.1 tiếp tục phân tách cột sắc ký silicagel, rửa giải hệ dung môi n-hexan : ethylacetat (10:1; v/v) thu hợp rm ac y, chất ký hiệu NS1 (12 mg) Phân đoạn H1.2 tiếp tục phân tách cột sắc ký silicagel, rửa giải hệ dung môi n-hexan : dichlometan (5:1; v/v) thu hợp chất ký hiệu hợp chất NS2 (18mg) dP Hợp chất NS1: Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (daucosterol) Tinh thể có màu trắng đục, tnc = 285 0C, Rf = 0,45 (dichloroform : methanol, 8:1) Hợp chất NS1 phản ứng với thuốc thử H2SO4 10%/EtOH cho an màu hồng tươi chuyển dần xanh tím IR (KBr, cm-1) 3430 (OH), 2938 (C[M+Na]+ Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13 ed ici ne H), 1635 (C = CH), 1077 (C-O-C), 1021 (C-O-C) ESI-MS:m/z 599,1 C-NMR, DEPT chất NS1 chất tham khảo trình bày bảng 3.1 fM Bảng 3.1: Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR NS1 ho ol o chất tham khảo [11, 25] Vị trí C δHOa,c (ppm) ppm ppm (Mult, J=Hz) (Mult, J=Hz) CH2 36,9 37,3 CH2 31,2 29,4 76,9 78,5 CH Co py rig ht δHNS1 (ppm) @ δCOa,b Sc δCNS1 DEPT CH2 39,2 38,4 C 140,4 141,3 121,2 122,3 CH 3,54 sextet (7,0) 3,56(d; 7,0) 5,35 (d; 5,0) 5,36(d; 5,0) 27 5,35 (m) CH2 31,5 31,8 CH 31,2 30,6 CH 49,7 50,7 10 C 36,2 36,8 11 CH2 20,4 20,4 12 CH2 38,4 40,3 13 C 41,9 42,7 14 CH 55,5 56,9 15 CH2 25,4 23,8 16 CH2 29,1 26,7 17 CH 56,3 56,6 18 CH3 11,8 12,4 19 CH3 19,1 20 CH 35,3 21 CH3 18,6 22 CH2 33,2 32,6 23 CH2 27,6 24,9 24 CH 45,2 46,4 25 CH 28,8 28,9 0,78 (m) 26 CH3 19,7 19,8 0,79-0,87 (m) 0,94 (d; 5,4) CH3 18,9 20,1 0,79-0,87 (m) 0,89 (d; 6,3) CH2 22,4 21,7 0,88 (m); CH3 11,8 12,5 0,79-0,87 (m) CH 100,9 103,0 4,14 (d; 8,0) 2' CH 76,6 75,8 3,44 (m) 3' CH 73,5 79,0 3,25 (m) 4' CH 70,1 72,1 3,32 (m) 28 Co py rig 1' rm ac y, dP an ed ici ne 0,68 (s) 19,6 34,5 0,67(s) 0,94 (s) 0,92 (d; 6,5) 19,4 1,00 (d; 6,3) fM ho ol o Sc ht 29 @ 27 VN U 28 0,87 (m) CH 76,7 78,9 3,48 (m) 6' CH2 61,1 63,3 3,75 (d; 12,0) đo CDCl3, b )100 MHz, c )300 MHz, G) chất tham khảo daucosterol ed ici ne an dP rm ac y, a) VN U 5' Hình 3.2: Cấu trúc hợp chất NS1 Hợp chất NS1 phản ứng với thuốc thử H2SO4 10 %/EtOH cho màu hồng tươi chuyển xanh tím dần chứng tỏ NS1 thuộc nhóm sterol Phổ IR fM xuất đỉnh hấp thụ cực đại v*max 3430 cm-1 đặc trưng cho nhóm O-H; ho ol o đỉnh v*max 2938 cm- đặc trưng cho dao động hóa trị liên kết C-H; đỉnh v*max 1635 đặc trưng cho liên kết >C=C